时间：2023-03-19 23:48:51
摘要：目的制定柴胡药材中柴胡皂苷a、d的含量测定方法。方法用高效液相色谱蒸发光散射检测法（HPLCELSD）,AlltimaC18色谱柱,流动相甲醇水（80∶20）,速度0.8ml・min1；蒸发光散射检测器参数：漂移管温度40℃，气压3.5bar。结果柴胡皂苷a和柴胡皂苷d分别在1.908~19.08μg（r=0.9996）和1.804~18.04μg（r=0.9992）范围内线性关系良好,平均回收率分别为98.35%（RSD=1.26%）和97.64%（RSD=1.58%）。结论该方法简便、灵敏、可靠、准确、重现性好,可作为柴胡药材的质量控制方法。
关键词：柴胡；高效液相色谱蒸发光散射检测法；柴胡皂苷
DeterminationofSaikosaponina,dinRadixBupleuribyHPLCELSD
Abstract：ObjectiveTodeterminesaikosaponina,dinRadixBupleuribyHPLCELSD.MethodsHPLCELSDwasusedinthequantitativeanalysisbyusingAlltimaC18chromatographycolumnandmethanolwater(80∶20)asamobilephase.Theflowrateofmobilephasewas0.8ml・min1.Thetubetemperatureofthedetectorwas40℃.Thepressofpureairwas3.5bar.ResultsThelinearrangesforsaikosaponinaanddwere1.908~19.08μg（r=0.9996）and1.804~18.04μg（r=0.9992）,theaveragerecoverieswere98.35%(RSD=1.26%)and97.64%(RSD=1.58%),respectively.ConclusionThismethodiseasy,sensitive,reliable,accurate,reproducibleandcanbeusedasthequalitycontrolmethodofRadixBupleuri.
Keywords：RadixBupleuri;HPLCELSD;Saikosaponin
柴胡药材来源于伞形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.或狭叶柴胡BupleurumscorzonerifoliumWilld.的干燥根。为常用中药,在我国已有2000多年药用历史,具有和解表里、疏肝、升阳之功效［1］。其主要有效成分为柴胡皂苷,其中柴胡皂苷a，d的活性较强,具有抗炎、保肝、降低血中胆固醇等药理活性［2］。应用高效液相色谱法测定柴胡皂苷a，d含量的报道较多［3，4］。但由于检测波长在210nm,杂质峰干扰十分严重,检测灵敏度低,影响了含量测定的准确性。本文应用HPLCELSD法同时测定柴胡皂苷a，d的含量,其杂质峰干扰小,分离度好,灵敏度高,出峰时间短,便于操作。
1仪器与试药
高效液相色谱仪：Agilent1100系统，SEDEX75型蒸发光散射检测器；超声波清洗机（中国华南超声波设备厂），工作频率25kHz，功率250w。柴胡皂苷a，d对照品购自中国药品生物制品检定所，含量测定用,批号分别为110777200303和110778200402；甲醇为色谱纯（CALEDONLABORATORIESLSD.），水为重蒸水，其它试剂均为分析纯；柴胡药材经鉴定为柴胡BupleurumchinenseDC.的根。
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱为AlltimaC18(250mm×4.6mm,5μm);流动相：甲醇水（80∶20）；速度0.8ml・min1，柱温25℃；检测器参数：漂移管温度40℃，气压3.5bar。在选定的条件下，柴胡皂苷a、d对照品与样品中其它组分色谱峰可基线分离，峰形好。按柴胡皂苷d峰计算，理论板数为3000以上。柴胡皂苷a，d对照品，供试品的高效液相色谱图见图1。
1.柴胡皂苷a2.柴胡皂苷da供试品图谱b对照品图谱
图1高效液相色谱图（略）
2.2对照品溶液的制备精密称取柴胡皂苷a9.54mg和柴胡皂苷d9.02mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。
2.3供试品溶液的制备取柴胡药材粉末（过60目筛）约1g，精密称定，置25ml量瓶中，加入5%氨水甲醇20ml，超声处理40min，放置至室温，加5%氨水甲醇至刻度，摇匀，静置，精密吸取上清液20ml置蒸发皿中，水浴蒸干，加甲醇溶解，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.4线性关系考察分别精密吸取柴胡皂苷a和d的混合对照品溶液2，5，10，15，20μl注入高效液相色谱仪中，分别测定柴胡皂苷a和d的峰面积。以峰面积自然对数值为纵坐标，进样量的自然对数值为横坐标，绘制标准曲线。柴胡皂苷a在1.908~19.08μg范围内呈良好线性关系，回归方程为Y=5.89721.5336X，r=0.9996；柴胡皂苷d在1.804~18.04μg范围内呈良好线性关系，回归方程为Y=5.86191.4965X，r=0.9992。
2.5精密度实验精密吸取对照品溶液10μl，按上述色谱条件重复进样5次，测定峰面积，结果柴胡皂苷a和d的RSD分别为1.18%和1.53%，表明仪器的精密度良好。
2.6稳定性实验取样品溶液,按含量测定方法及色谱条件分别置0，2，4，6,8h测定，结果柴胡皂苷a和d的RSD分别为1.29%和1.68%，表明样品溶液在8h内稳定。
2.7重复性实验精密称取同批号样品6份，按含量测定方法及色谱条件进行测定，结果样品中柴胡皂苷a和d的平均含量分别为11.4541，8.3612mg・g1，RSD分别为1.34%和1.82%。
2.8回收率实验采用加样回收法，，取已知柴胡皂苷a，d含量的样品6份，每份约0.5g，精密称定，分别加入柴胡皂苷a对照品6.0544mg和柴胡皂苷d对照品4.4621mg，按含量测定方法及色谱条件进行测定，结果柴胡皂苷a和d的平均回收率分别为98.35%（RSD=1.26%）和97.64%（RSD=1.58%）。
2.9样品测定取不同批号的药材，按上述供试液的制备方法制备供试液。精密吸取对照品溶液5，20μl及供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，按外标两点法测定柴胡皂苷a，d含量，结果见表1。
3讨论
3.1柴胡皂苷a，d为柴胡的主要有效成分,但在提取过程中其结构易发生变化,因此，严格控制提取条件十分重要。本实验比较了甲醇、5%吡啶甲醇、5%氨水甲醇的提取效果。结果表明，5%氨水甲醇溶液超声提取效果最佳。
表1样品含量测定结果（略）
3.2采用5%氨水甲醇溶液超声处理，分别测定了不同提取时间（20，30，40，50min）样品中柴胡皂苷a，d的含量，结果在40～50min内样品中柴胡皂苷a、d的含量基本不变。故文中采用超声40min的方法。
3.3本文采用HPLCELSD法测定柴胡中柴胡皂苷a，d的含量,较采用紫外检测器检测,能明显减少杂质峰的干扰,峰形好,出峰时间短,有利于提高检测的准确度和工作效率。
参考文献：
［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：198.
［2］张本.柴胡属植物药理作用研究概况［J］.吉林中医药，1983，3(1):39.
［3］王鹏，贾凌云，孙启时，等.不同产地柴胡中柴胡皂苷的含量测定［J］.沈阳药科大学学报，2004，21(3):193.
关键词：高效液相色谱仪 缓冲液 流动相 调制
液相色谱法的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂,或它们的混合液。另外,水性溶剂也常用于缓冲液。有的资料[1]介绍了用于高效液相色谱法的代表性缓冲液的具体调制方法,但通常对缓冲液的解释往往含糊不清。因此,常因资料上表示的内容与实际的配置方法的不同,而产生流动相的差异,影响色谱图和分析结果。而且,不仅缓冲液,有时还要考虑到溶剂的混合方法等流动相调制方法方面的漏洞等因素[2]。本文以具体的事例,研究流动相调制方法对分析结果的影响。
1)缓冲液的调制
例如,写的是“20mM磷酸缓冲液(PH2.5)”在实际中该怎样调制?不妨举几个能想到的情况。首先,可以确定是使用磷酸的缓冲液,但是,是什么离子不明确。即使就以钠离子而言,“20mM”的浓度弄不清是指磷酸,还是指磷酸钠的浓度。若认为是“20mM”磷酸(钠)缓冲液,“20mM”可看作是磷酸的浓度。另一方面,若把“20mM”看作是钠的浓度,也可以认为是“20mM磷酸二氢钠水溶液调整PH后的缓冲液(而且, 20mM磷酸钠水溶液的PH在5.0附近,只要稍用一点酸就可以调到PH2.5)”,这时,由于调整PH用的酸,产生离子对的效果,或者也许会对分析结果有影响。从上述考虑,会产生对缓冲液有多种解释的可能性。
上述例,具体有3种解释。对分析结果会产生多大影响,见图1所示。上段是“20mM”作为磷酸浓度的解释,将作为“20mM磷酸(钠)缓冲液(PH2.5)”调制的溶液用于流动相的结果。中段和下段“20mM”作为磷酸二氢钠的浓度解释,分别加磷酸和高氯酸调整PH为2.5时的结果。像此例中的二氢可待因那样对保留时间有明显的影响时,给分析方法造成困难。对缓冲液应尽量明确溶液的特性和调制方法,以免产生不同的解释。(如图1）
2)有机溶剂和水性溶剂的混合方法
有机溶剂和水性溶剂的混合液作为流动相是经常的,但是由于混合方法的不同,有时分析结果相关很大。作为一例,20mM磷酸(钠)缓冲液(PH2.5)90%与乙腈10%的混合时,混合比为9:1的话,20mM磷酸(钠)缓冲液(PH2.5)与乙腈的体积比为9:1,也就是可以解释为各自按体积比率的相当量称取后进行混合。另外,按10%乙腈解释的话,解释为用20mM磷酸(钠)缓冲液(PH2.5),将乙腈稀释调制也可以成立。在后者的情况下,产生混合体积减少部分,余下的添加20mM磷酸钠缓冲液。两者虽然没有太大的差别,但,如图2所示,由于混合的方式不同,分析结果(特别是保留时间)也会有显著 差别,这点必须注意。（如图2）
在一般情况下,调制高效液相色谱法用流动相时,用A液:B液=3:2(V:V)的表示方法,即A液体积比相当于3,B液体积相当于2,分别称取混合(实际上本溶液混合后的溶液体积比合计体积比5要少)。
不仅是流动相的调制方法,试样溶液和其他溶液的调制也经常有上述问题。另外,在不同部门(医药部门或化工部门)各自都有自己的常识习惯,这也是困惑的原因,在这种情况下,例如,日本药典、卫生试验法、日本工业规格等法定书都有各自作为通则和定义涉及溶液的调制,因此可参考这些书,避免混乱,在日常更好地记住这些表示。
参考文献
[1] 刘珍.仪器分析.化学工业出版社.2004.
关键词 液相色谱－质谱联用仪；计量；校准；方法
中图分类号O657.7+2 文献标识码A 文章编号 1674-6708（2011）35-0084-02
0 引言
液质联用技术是20世纪90年展起来的一门综合性技术，液相色谱仪的高分离效能与质谱仪的高灵敏度、高选择性使之成为科学研究与检测领域强有力分析工具。液相色谱―质谱联用仪广泛应用于食品安全、药品检测和开发，农药残留、水质分析和蛋白质生物标志物的发现和验证等工作。而液相色谱―质谱联用仪的准确可靠是利用仪器进行科学试验的前提；判断仪器是否准确可靠就需要建立一套科学有效并且可行的校准方法。
目前，实验室用液相色谱―质谱联用仪主要由液相色谱和质谱仪两部分组分；与液相色谱连接质谱计有单极，多极两种。其中，液相色谱的作用是将分析样品通过色谱柱进行分离；质谱仪的作用是将分离出的样品转化为运动的带电气态离子碎片，引入磁场并按质荷比（m/z）大小分离并记录，其过程为可简单描述为：
其中，z为电荷数，e为电子电荷，U为加速电压，m为碎片质量，V为电子运动速度。质谱仪一般由进样系统、电离源、质量分析器、真空系统和检测系统构成。
1 计量特性
液相色谱―质谱联用仪各项技术指标见表1：
2 校准条件
2.1 实验室环境
1）仪器室内无强烈的机械振动和电磁干扰，不得存放与实验无关的易燃、易爆和强腐蚀性气体或试剂；
2）实验室温度：15℃~27℃；
3）实验室湿度：75%RH。
2.2 标准物质和试剂
1）利血平（reserpine）：标准物质；
2）氯霉素（chloramphenicol）：标准物质；
3）乙腈（acetonitrile）：液相色谱级或同级别；
4）甲醇（methol）：液相色谱级或同级别；
5）聚乙二醇（polyehtylene glycols，缩写为PEG）：色谱级或同级别；
6）乙酸铵（ammolun acetate）：色谱级或同级别。
2.3 校准设备
数字温度计：测量范围0℃~100℃，最小分度不大于0.1℃。
3 校准项目和校准方法
3.1 分辨力
仪器稳定后，执行Autotune命令进行自动调谐，检查仪器质量偏差、分辨力及离子强度的变化是否达到规定的要求，直到调谐通过，打印调谐报告，得到半峰宽FWHM。
注：1）调谐液常见种类有PPG（聚丙烯醇）、PEG（聚乙二醇）和NaI（碘化钠）等溶液，不同仪器厂商有不同的规定：同时，正负离子模式调谐可用不同配制的PPG溶液或PEG溶液等，具体调谐时可根据各仪器规定的要求执行；2）也可以采用手动调谐
3.2 质量范围
在正离子模式下，以PEG（根据仪器规定的浓度配制）溶液为调谐校准物质，对仪器的+Q1（一级质谱正离子）、+Q3（三级质谱正离子）进行调谐，质量数设定达到2000以上，观察仪器是否出现2000以上（含2000）的质谱峰。在负离子模式下，以NaI（根据仪器规定的浓度配制）溶液为调谐校正物质，对仪器的―Q1（一级质谱正离子）、―Q3（三级质谱负离子）进行调谐，质量数设定达到2000以上，观察仪器是否出现2000以上（含2000）的质谱峰。
3.3 信噪比
3.3.1 ESI+源（ESI的正离子模式）
仪器调谐优化后，以200μL/min速度注入5μL浓度为1pg/μL的利血平溶液（溶剂为70:30的乙腈/水），采用MRM扫描方式，选择离子对609-195（母离子为609，子离子为195）作为监测对象，连续测量3次，根据公式（1）计算其S/N，取平均值作为其信噪比。
S/N=H（609-195）/H噪声 （1）
式中：H（609-195）为离子对609-195的峰高；
H噪声为基线噪声。
3.3.2 ESI-源（ESI的负离子模式）
参照2.3.1的条件，注入5μL浓度为0.5pg/μL的氯霉素溶液（溶剂为70:30的乙腈/水），采用MRM方式，选择离子对321-152（母离子为321，子离子为152）连续测试3次，根据公式（1）计算S/N，取平均值作为其信噪比。
3.4 质量准确性
仪器调谐通过后，采用针泵进样方式，以10μL/min速度注入5μL浓度为100ng/μLPEG1000溶液（溶剂为70：30的乙腈/水，溶剂含有2mmol/L 乙酸铵），通过离子扫描检测出碎片离子1004.622u±0.05u准确质量数。每隔5min测量1次，测量6次，根据公式（2）计算其质量数的实测值与理论值之差，根据公式（3）计算标准偏差，以此评价质量准确性。
式中： ΔM为质量准确性，单位u；
Mi为离子质量数实测值，单位u；
为离子质量数测量平均值，单位u；
为离子质量数理论值，单位u；
S为离子质量数测量标准偏差，单位u。
3.5 测量重复性
3.5.1 ESI+源（ESI的正离子模式）
仪器优化后，选择泵流速为200μL/min，色谱柱为C18，流动相为70：30的乙腈/水，注入5μL浓度为20pg/μL的利血平溶液（溶剂为70：30的乙腈/水，且溶剂含有2mmol/L乙酸铵），通过MRM扫描方式，选择检测对象为609-195离子对，测量6次，按质量色谱峰进行面积积分，根据公式（4）计算其RSD，以此评价重复性。
式中： RSD为相对标准偏差，%；
xi为第i次测量的峰面积；
为6次测量峰面积的算数平均值；
i为测量序号。
3.5.2 ESI-源（ESI的负离子模式）
仪器优化后，选择泵流速为200μL/min，色谱柱为C18，流动相为70：30的乙腈/水，注入5μL浓度为20pg/μL的氯霉素溶液（溶剂为70：30的乙腈/水，且溶剂含有2mmol/L氯化铵），通过MRM扫描方式，选择检测对象为321-152离子对，测量6次，按质量色谱峰进行面积积分，根据公式（4）计算其RSD，以此评价重复性。
3.6 柱温箱温度控制
将数字温度计探头固定在柱温箱内，选择35℃和45℃（也可以根据用户使用温度设定）进行校准，按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后没每隔10min记录一次读数，共计7次，求出平均值。平均值与设定值之差为ΔTs，7次读数最大值与最小值之差为控温稳定性Tc。
4 校准的意义和周期
通过对液相色谱―质谱联用仪的校准可以很好的控制在实验分析过程中因使用的液相色谱―质谱联用仪的精度误差而带来的分析误差。提高实验数据的真实性和准确性。
台式液相色谱―质谱联用仪的校准一般委托有相应资质的第三方校准机构进行校准。一般校准周期不超过2年。仪器使用维护人员可根据实际使用情况对周期进行调整。在更换重要部件、维修或对仪器性能有怀疑时，应随时校准。
参考文献
[1]JJF1001-1998 通用计量术语及定义.
[2]JJF1005-2005 标准物质常用术语和定义.
[3]JJF1059-1999 测量不确定度评定与表示.
[4]JJF1094-20002 测量仪器特性评定.
[5]JJF1164-2006 台式气相色谱仪-质谱联用仪校准规范.
[6]JJG705-2002 液相色谱仪检定规程.
[7]GB/6041-2002 质谱分析方法通则.
1仪器与材料
美国waters2695高效液相色谱仪，VWD检测器；鬼针草采自云南红河州、广西，经刘圆副教授和戴斌教授鉴定为菊科鬼针草属植物狼杷草BidenstriparticaLinn.，白花鬼针草BidenspilosaL.var.ratiataSch-Bip.，婆婆针BidensbipinataLinn.，三叶鬼针草BidenspilosaLinn.的干燥全草；槲皮素（批号081-9304，中国药品生物制品检定所，含量测定用）；甲醇为色谱纯；水为二次重蒸水；其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件KrosmasilC18柱（4.6mm×250mm，5μm），柱温30℃，流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液（41∶59），检测波长360nm，流速1ml·min-1。槲皮素峰可以达到基线分离，峰形对称，分离度好，按照槲皮素峰计，理论塔板数不应低于5000。见图1～8。
图1槲皮素对照品色谱图（略）
图2三叶鬼针草（云南产）根色谱图（略）
图3三叶鬼针草（云南产）茎色谱图（略）
图4三叶鬼针草（云南产）叶色谱图（略）
图5狼杷草色谱图（略）
图6白花鬼针草色谱图（略）
图7婆婆针色谱图（略）
图8三叶鬼针草色谱图（略）
2.2供试品溶液的制备
2.2.1对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇配置成0.04mg·ml-1的溶液。
2.2.2样品溶液的制备称取鬼针草药材粉末（过40目筛）约1.0g，精密称定，置圆底烧瓶中加入甲醇-25﹪盐酸溶液（4∶1）25ml，称定重量，加热回流1h，取出，冷却至室温，用上述混合溶液补足减失重量，摇匀，过滤，取续滤液，过0.45μm的微孔滤膜，作为样品溶液。
2.3线性关系的考察分别精密量取上述对照品溶液0.5，2，4，8，20μl，在上述色谱条件下测定峰面积。以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为Y=3×106X-33404，R2=0.9999(n=5)。结果表明槲皮素在0.02～0.80μg范围内与峰面积具有良好的线性关系。
2.4精密度实验精密吸取对照品溶（0.04mg·ml-1）10μl，重复进样6次，测得峰面积的RSD为0.97%（n=6）。结果表明精密度良好。
2.5稳定性实验精密量取样品溶液10μl，分别于0，2，4，6，8h测定。按照槲皮素对照品峰面积计算RSD为0.6%（n=6）。结果表明样品溶液在配制后8h内稳定。
2.6重复性实验取同一批样品溶液，精密称取6份，按“2.2”项下方法制备样品溶液，按照“2.1”项下色谱条件测定槲皮素的含量，RSD为1.6%（n=6），表明重复性良好。
2.7回收率实验精密称取9份已知含槲皮素量的药材粉末0.25g，依次加入低、中、高3种质量浓度槲皮素对照品溶液，按“2.2”项下方法制备样品溶液，按照“2.1”项下色谱条件测定。结果平均回收率为99.87%，RSD为0.9%（n=9）。
2.8样品含量测定按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按照“2.1”项下方法测定，不同部位测定结果见表1，不同种测定结果见表2。
表1三叶鬼针草不同部位中槲皮素的含量（略）
表2鬼针草属不同种中槲皮素的含量（略）
3讨论
实验曾考察了甲醇-0.4%磷酸溶液（50∶50）；甲醇-0.4%磷酸溶液（45∶55）；甲醇-0.4%磷酸溶液（40∶60）；甲醇-0.4%磷酸溶液（41∶59）为流动相，流速1ml·min-1，柱温30℃，以KromasilC18柱（4.6mm×250mm，5μm）为分析柱。本实验以甲醇-0.4%磷酸溶液（41∶59）为流动相，槲皮素峰可以达到基线分离，峰形对称，分离度好。本法简便、准确、重复性好，可以作为控制鬼针草属药材质量的标准之一。
高效液相色谱技术概述
在色谱法中，高效液相色谱技术是重要分支，使用的流动相为液体，能够利用高压输液系统将流动相泵入色谱柱。而色谱柱内装有固定相，能用于进行不同极性单一溶剂、缓冲液和不同比例混合溶剂的分离，并将分离得到的各成分送入检测器，以实现试样分析。作为在农学、化学和商检等多个领域得到应用的重要分离分析技术，该技术具有较低检测限度，并且灵敏度较高，因此能够在食品检测中得到运用。
高效液相色谱技术在食品检测中的运用分析
在营养成分检测中的运用。在食品检测中，高效液相色谱技术可用于检测营养成分。在食品中的糖含量检测上，运用该技术能够完成多种糖的测定，比如酒类糖分和果聚糖异构体等。在脂肪酸检测方面，运用该方法能够对二十碳五烯酸等脂肪酸物质进行检测，从而为食品的加工、贮存和配比提供科学依据。而蛋白质具有相对分子量大和易发生变性等特点，以至于难以实现分离分析。运用高效液相色谱技术，则可以完成蛋白质和氨基酸分离，所以能够对这些营养成分进行灵敏测定。在食品保鲜方面，有机酸发挥着防腐的作用，同时也是食品鲜味和酸味的组成成分之一。运用高效液相色谱法进行检测，可利用反向C18柱完成有机酸分离，然后利用紫外吸收检测器等设备进行乳酸、柠檬酸和苹果酸等物质的检测。此外，在维生素检测上，可运用高效液相色谱法进行保健食品中多种水溶性维生素的检测。
在添加剂检测中的运用。在食品加工过程中，一般都要使用添加剂进行食品色、香、味得到改进，并对食品进行保鲜。而添加剂为人工合成或天然的物质，可以划分为甜味剂、色素、防腐剂和抗氧化剂等。但是，人工合成的添加剂具有一定毒性，需限制其使用，所以还要进行食品中添加剂含量的检测。在甜味剂检测方面，运用高效液相色谱技术使用的色谱柱通常为C18柱、-NH2柱和阴离子交换柱，使用的检测器包含电导检测器和紫外-可见光检测器，可完成甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和甜味素等多种甜味剂的测定。在防腐剂检测方面，可使用R高效液相色谱法进行脱氢乙酸、BA和对羟基苯甲酸乙酯等防腐剂的测定，具有准确、灵敏和操作简便的特点。在色素检测方面，联合使用高效液相色谱技术和紫外-可见光检测器，并使用C18柱分离的梯度洗脱系统，可完成胭脂红、亮蓝、柠檬黄和日落黄等多种色素的测定。在抗氧化剂检测方面，运用R高效液相色谱法能够完成油脂中的9种抗氧化剂的同时测定，最低检测浓度可以达到2mg/kg。另外，运用高效液相色谱法进行BHA、PG、BHT等物质的分离，可分别达到84%、95%和99%的样品回收率。运用高效液相色谱法检测食品中的增白剂，可使用阴离子柱进行亚硫酸盐的分离，最低检出限能够达到0.2μg/kg。
在有毒有害物质检测中的运用。在食品中，可能含有多种有毒有害物质，如农药兽药残留和霉菌毒素等。如果误食含有霉菌毒素的食品，可能导致人出现急性或慢性中毒现象，甚至引发人体细胞癌变。运用高效液相色谱法，可进行食品中霉菌毒素的检测。从原理上来看，利用该方法能够结合不同微生物的化学组成或代谢产物进行样品中各种细菌的分析，以确定病原微生物的特异性化学组分，进而判定食品是否存在微生物超标问题。比如，在黄曲霉毒素检测方面，运用高效液相色谱法和质谱法进行食品检测，最低检测限可达0.02μg/kg，回收率则在77%-102%范围内。在农兽药残留检测方面，运用高效液相色谱法可完成热稳定性差和沸点高的农药残留检测，使用的色谱柱通常为C18或C8，联合使用的检测器包含荧光检测器、紫外检测器等。比如，联合使用高效液相色谱法和紫外检测器，可完成除虫脲、氟苯脲等蔬菜中苯甲酰脲类农药残留量的测定。此外，还可以利用高效液相色谱法与质谱法完成水果、蔬菜等多种食品中四溴菊酯残留检测。在兽药检测方面，联合使用高效液相色谱法和质谱法，则能完成多种磺胺类药物残留的测定，检出限在1.0-4.5μg/L的范围内，回收率在92%-100%之间，具有准确、方便和快速等检测优势。
通过分析可以发现，由于具有检测灵敏度高、分离效能高和分析速度快等优点，高效液相色谱法在食品营养成分、添加剂和有毒有害物质检测等方面得到了广泛应用，所以能够为食品安全提供更多保障。而相信随着该项技术的不断发展，其未来也将在食品检测领域获得更好的发展前景。
【关键词】高效液相色谱分析；食品检测；应用
1.HPLC在食品添加剂领域的应用
1.1食品甜味剂的检测
甜味剂是指能够赋予食品甜味的食品添加剂。按其营养价值可分为营养型与非营养型甜味剂，通常所讲的甜味剂系指人工合成的非营养型甜味剂，如糖精钠、环己氨基磺酸钠(甜蜜素)、乙酰磺胺酸钾(安塞蜜)和天冬酰苯丙氨甲酯(甜味素和阿斯巴甜)等。目前，糖精钠价格低廉，应用广泛，但过量添加会损害人的健康。采用液相色谱-气相色谱联用技术， SpherigelC18色谱柱，电喷雾负离子采集模式，甲醇-甲酸-三乙胺缓冲盐梯度洗脱，定量测定果冻等食品中安赛蜜、糖精钠和甜蜜素含量，结果加样回收率为93.19%～100.90%，相关标准偏差(RSD)为1.05%～2.04%。该方法选择性好，定性定量准确，分析时间短，同时也适用于饮料等其他食品的定性定量检测。
用高效液相色谱-荧光法(HPLC-FLD)测定食品中的糖精钠，最低检出限在0.005～0.200mg/ml，与高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV)相比较，HPLC-FLD法重现性好，准确度更高，由于FLD的选择性响应，降低了对色谱柱的性能要求，更适合复杂样品的快速分析，使其具有比UV法更高的可靠性，是一种较为理想的糖精钠检测方法。
1.2食品防腐剂的检测
常用的防腐剂有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钠盐等，因其具有毒性小的特点，故国标法中允许一部分食品中加入少量的防腐剂。但防腐剂的富集对人体机能会产生一定的影响，所以食品中防腐剂含量的测定显得非常重要。
利用HPLC测定含乳饮料中苯甲酸的含量。用Zn(Ac)2和KFe(CN)3溶液作为沉淀剂进行样品的预处理，磷酸盐缓冲液和甲醇混合溶液为流动相，C18色谱柱，于波长225nm处紫外检测，方法简单快速、灵敏度高，既适用于大部分含乳饮料，也适用于纯牛奶的测定。苏爱梅采用加沉淀剂沉淀法对火腿肠样品进行预处理，过滤后用RP-HPLC法测定火腿肠中防腐剂苯甲酸和山梨酸的含量。色谱柱为Symetry-C18，以0.02mol/L乙酸铵-甲醇(97∶3)为流动相，检测波长为230nm。苯甲酸和山梨酸浓度在0～0.05g/L范围内线性很好(r=0.9996)；山梨酸最低检出限为0.024g/L，平均回收率为100.4%，RSD为0.68%。
1.3食品色素的检测
目前已经公认人工合成食用色素应逐步限制使用，但值得注意的是，在我国至今仍有少数不法商人，超标准使用人工合成食用色素，甚至利用不能用作食品添加剂的染料，严重地危害了人们的健康。采用HPLC法测定保健食品黄金搭档包衣片中食用合成色素，样品前处理用粉碎提取法和漂洗法，聚酰胺吸附纯化LichrospherC18柱，甲醇-乙酸铵流动相梯度洗脱，单波长或多波长测定柠檬黄、靛蓝和诱惑红3种色素。其线性范围宽(0～100g/ml)，回收率高(91.3%～103.1%)，重现性好(RSD=2.11%～5.63%)，最低检出限为2～11ng。其中，尤以粉碎提取法，梯度洗脱，多波长检测效果更佳。
2.HPLC在食品营养成分领域的应用
2.1碳水化合物的检测
对于碳水化合物的测定，HPLC法操作简便，灵敏度高，可同时测定各种糖，国际上已将HPLC法作为酒类糖分含量测定的仲裁法。
2.2氨基酸的检测
氨基酸是生物体中重要的生命物质，是组成酶和蛋白质的基本单元，准确灵敏地测定食物中氨基酸的含量具有十分重要的意义。目前，柱前衍生化高效液相色谱法以其灵活和易于推广的特点。
采用邻苯二甲醛(OPA)-9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC)进行氨基酸柱前衍生，RP-HPLC法测定氨基酸含量。3个不同浓度梯度的氨基酸标准溶液线性关系良好，样品保留时间绝对误差小于0.1min，重现性RSD值低于4%，加标回收率均在90%～110%。
2.3脂肪酸的检测
脂肪酸是指一端含有一个羧基的长的脂肪族碳氢链，是有机物。饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸和三脂酰苷油磷脂卵磷脂等，对人体的健康起到了重要的作用。用HPLC法与基质辅助激光解吸电离飞行时间技术联用，分析蛋黄中磷脂粗提物。将从蛋黄中提取的多种磷脂通过HPLC预先分离，收集各组分后分别进行MALDI-TOF-MS分析得到比较清晰的质谱图。选用RP-HPLC与电容耦合非接触电导检测(C4D)结合的方法分离测定肉蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸与亚油酸5种未衍生化长链脂肪酸，采用HypersilODSC18色谱柱，以甲醇-1mmol/L醋酸钠(78∶22，V/V)为流动相，结果表明，硬脂酸在5～200μg/ml范围内与峰面积线性关系良好，其他4种酸线性范围为2～200μg/ml。将此种方法用于检测南瓜、大豆、米糠及棕榈油中脂肪酸，与标准气相色谱检测方法相比，简单、快速、灵敏度高。
3.HPLC在食品污染物领域的应用
3.1食品农药、兽药残留的检测
农药残留是由于使用农药而导致的在食品、农产品或动物饲料中残留的一定物质，国家相关标准都有明确的药物最大残留量，超过其值有可能对人体造成危害。运用HPLC柱后衍生荧光检测法，测定苹果、梨、桃、葡萄、香蕉和芒果等水果样品中涕灭威亚砜、涕灭威砜、灭多威、三羟基克百威、涕灭威、克百威和甲萘威7种氨基甲酸酯类农药的残留量，结果7种农药3种不同浓度平均添加回收率在72.5%～116.2%，最低检出限为0.0037～0.0074mg/kg。
3.2食品中其他来源化学污染物的检测
环境污染物以及在工业生产中所产生的有毒有害化学物，如包装材料等均可通过植物或动物进入食物链，并引起人类的疾病或健康问题。
3.3食品中霉菌毒素的检测
食品中存在多种霉菌毒素，主要的霉菌毒素有黄曲霉毒素、镰刀菌毒素和玉米赤霉烯酮等。粮食及食品由于霉变不仅会造成经济损失，有些还会造成误食人畜急性或慢性中毒，甚至导致癌症。
4.小结
目前在食品安全检测高标准的情况下，HPLC分析技术以其分辨率、灵敏度及定量精度高等特点，已被广泛应用于食品检测领域。现今科学技术日益更新，高效液相色谱仪器也在不断地更新发展，并且与各种检测技术的联用越来越普遍，包括液相色谱(LC)和质谱仪(MS)及核磁共振谱仪的集成(LC-MS-NMR)、气相色谱-液相色谱联用(GC-HPLC)、固相微萃取-液相色谱联用(SPME-HPLC)、聚焦微波辅助萃取-液相色谱联用(FAME-HPLC)，大大拓宽了HPLC的应用范围，提高了检测水平，在今后HPLC也会有更广阔的发展空间。
【参考文献】
化学发光分析法具有灵敏度高、仪器设备简单、线性范围宽、分析速度快以及不需要外加光源和单色器、没有散射光等干扰、以及容易实现自动化等优点,但选择性差。液相色谱,尤其是高效液相色谱,以其高效、高速和高分辨力等特征给人们留下了深刻的印象。
高灵敏度的化学发光检测手段与高分辨力的高效液相色谱法结合于一体,成为一种理想的分离分析方法,两种方法能取长补短,充分发挥各自优势。毫无疑问,高效液相色谱分离技术与化学发光检测器的联用将被广泛应用于生物工程、食品工业、环境检测等领域。本文包括两个部分。
第一部分是综述,这部分结合化学发光分析法,评述了近年来高效液相色谱及其与化学发光联用技术在食品分析和药物分析中的应用。
第二部分是研究报告。第一节是高效液相色谱及其与化学发光柱后检测联用技术在食品分析中的应用。首先,研究了反式白藜芦醇和高锰酸钾―硫代硫酸钠―多聚磷酸的高效液相色谱―化学发光体系的发光行为,摸索出反式白藜芦醇的分离分析方法,并成功应用于葡萄不同部位中反式白藜芦醇的快速灵敏的分析测定。
实验表明该法快速、简单、准确度高,适用于反式白藜芦醇的测定。(1)基质固相分散.高效液相色谱分析奶粉中残留的左旋咪唑和甲苯咪唑采用基质固相分散的提取方法,建立了快速、灵敏的反相高效液相色谱法测定了奶粉中左旋咪唑和甲苯咪唑残留的含量。采用岛津SPD-20A检测器,HypersilC18（4.6mm×150mm,5.0μm）色谱柱,流动相为CH3OH-KH2PO4溶液,等度洗脱,柱温为室温时于230 nm波长处以外标法测定。结果表明左旋咪唑和甲苯咪唑分别在0.18～0.90μg/mL和0.12～0.60μg/mL浓度范围内线性关系良好,其检测限分别为0.09μg/mL和0.06μg/mL。方法具有处理简单、检测快速、准确的特点。(2)反相高效液相色谱法快速测定多残留的高效液相色谱法。样品经处理后进反相Hypersil C18柱,流动相为CH3OH-CH3CN-0.01 mol/L H2C2O4溶液,流速为1.0 mL/min,检测波长为268 nm。结果表明:这6种抗生素在0.04～1.0μg/mL范围内呈线性关系,其检出限为0.02～0.06μg/mL,分析的平均添加回收率为80.00%～116.0%,变异系数为1.30～5.24%。方法具有处理简单、检测快速准确、易用于实际样品的测定。(3)反相高效液相色谱法同时测定，该法简便、快速、有效、重现性好,为食品质量检验控制提供科学依据。
酚类化合物分布广泛,其中很多具有雌激素活性,对人类健康和动物生存已经造成不良影响,因此建立快速有效的检测方法对于保护环境,采取有效的预防措施降低该类化合物的危害具有重大的现实意义。
[关键词]高效液相色谱；应用；发展现状；发展趋势
中图分类号：O652.63 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2015）27-0349-01
在我国科技和经济都在高速发展的时代，很多技术都有了非常明显的改进和提升，同时在这一过程中其所发挥的作用也非常的明显，所以在这样的情况下，其应用的质量和水平也有了非常大的提升，而其经过了长期的发展，得到了人们的高度重视，同时也在更多的领域发挥其积极的作用，所以对色谱仪进行研究是十分必要的。
1、液相色谱在当今时代的发展
1.1 新型高效液相色谱
当前在物质检测的过程中，高效色谱法得到了非常广泛的应用，同时在其发展的过程中也出现了很多新型的色谱，在分配机制层面，亲和色谱通常是按照另外一类分配机制而操作的一种新型的色谱，这种色谱在对物质进行检验的时候能够更好的体现分离的效果，因为它是利用大分子之间的一些特有的共性去识别和分离物质，在操作方面也非常的温和，此外其流动性也非常强，通常其是以超临界流体色谱作为介质，混合物在临街流体色谱上的分离原理和气象色谱和液相色谱都是一致的，但是在应用的范围上，这种液相色谱法要应用得更加广泛。
1.2 液相色谱与其他分析仪器联合使用
1.2.1高效液相色谱（HPLC）与其他分析仪器联合使用
当前，高效液相色谱仪在检测的过程中能够使用的型号十分的有限，但是它在运行中可以选择很多种检测器，在应用的时候能够体现出非常好的灵敏度，这样的情况下也就使得物质在这一过程中可以更好的得到分离，此外仪器自身应用的广泛性也得到了十分显著的提升。比如在环境污染分析当中，对水中烃类物质的测定就是非常重要的，海水当中有很多烃类的物质，其不具备挥发的性质，这样就可以对环境污染分析工作的进行提供更多有价值的参考。从固定相的角度来说高分子固定相也得到了发展和应用。此外高效色谱仪也逐渐增加了紫外线检测器，这种检测器能够同时测定食品当中对位红和苏丹红等若干可溶性的物质，从而也提高了液相色谱仪的应用价值。
1.2.2超高效液相色谱（UPLC）与其他分析仪器联合使用
当前超高效液相色谱串联质谱法是一种比较新的液相色谱法，它在使用的过程中具备非常好的性能，同时在这一过程中其也更加的简单，速度和效率都有了显著的提升，在灵敏度上也更好，在实际的应用中可以有效的减少来自于杂质的干扰，定量方面的限制明显放宽，在定性上更加的准确。
固相萃取和超高液相色谱法是对组织中的氯羟吡啶含量进行分析的一种非常有效的方法，所以这种方法也经常使用在治疗禽球虫病的药物当中。相关的研究人员使用这种方法建立了一个灵敏度非常好，同时检测速度也非常快的检测8种试剂农药残留量的方法，在实际的应用中收到了良好的效果。
同时这种检测方法在实际的应用中能够体现出非常好的分离效果，它能够帮助目标化合物和与其形成竞争关系的化合物杂质分离，这样也就使得质谱检测器的灵敏度得到十分有效的提升，所以，UPLC是当前质谱入口的首选。
2、液相色谱仪的应用
2.1 液相色谱仪在食品安全领域的应用
2.1.1食品添加剂的检测
在食品添加剂当中，人们最常使用的有三种，一种是防腐剂，一种是甜味剂，一种是色素。添加剂的检测方法有很多，在以往的发展中经常使用的有气象法和比色法。但是液相色谱法和其他的方法相比有着非常明显的优势，所以在当今的检测工作中这种方法得到了广泛的应用。
在防腐剂检测方面，研究人员用HypersilODS色谱柱，流动相为0.02mol/LpH5.0乙酸铵甲醇溶液，柱温35℃，在不同波长下同时测定苯甲酸和山梨酸。
在合成色素的检测方面，吴敏等采用Zorbax80AExtend―C8色谱柱，高效液相色谱仪配备紫外检测器，同时测定食品中对位红和苏丹红等8种脂溶性燃料。
近几年随着色谱柱填充制备技术的高速发展，已经可以一次性分离糖精钠、安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、柠檬黄、苋菜红、亮蓝这十种食品常用添加剂。其效率之高非其他仪器分析方法可比。
2.1.2食品中危害物质的检测
食品中有害物质主要可分为：农药、兽药残留；霉菌毒素；重金属；加工过程中高温或其它特殊条件下形成的致癌物质等。
黄曲霉毒素普遍存在于多种谷物类食品当中，具有极强的致畸致癌作用，研究人员用HyPersilODS―C18色谱柱，测定食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2含量，该方法方便快捷，定性准确，较传统的点板法，酶联免疫吸附法更为科学准确。
高效液相色谱法在应对2008年奶粉掺入三聚氰胺风波的检测中发挥了重要作用，面对全国众多乳制品企业的样品进行检测，尽快出具检测结果给老百姓一个公正准确的结果，检测方法必须既要快，又要准，检出量还非常微小，能做到完美完成这一任务的，仅有高效液相色谱法能够做到。
2.2 液相色谱仪在工业上的应用
以往，在石油化工、农药、环保等方面，经常采用薄层色谱法（TLC）和气相色谱法（OC）进行含量测定，而液相色谱法（LC）只是用于对组分标样的测定和分离的可能性的研究。
从上个世纪70年代开始，我国的很多科研部门和该行业当中的工厂就开始对液相色谱仪的生产和改进进行了研究，在这一阶段，LC开始出现在我国众多的科研领域当中，其也体现出了非常高的实用性，特别是对于那些热稳定性不是非常好或者是蒸汽气压不是很高的样品具有非常好的检测和分析效果，这样也充分的显示出了LC方法自身的优势。
2.3 液相色谱仪在生命科学领域的应用
生命科学研究工作中，最大的难题就是基因的解密工作，从基因组DNA序列尚不能回答某基因的表达时间、表达量、蛋白质翻译后加工和修饰的情况、以及它们的亚细胞分布等等。这些在基因组中不能解决的问题可望在蛋白质组学（Proteome）研究中找到答案。在所研究的细胞中会有3～5万种功能各异的蛋白质，目前蛋白质组研究所使用的双向电泳法一般只能分辨到2000～3000个蛋白质点。现代蛋白质组的分析可尝试使用第一向是体积排阻色谱的双向HPLC高效液相色谱作预分离。高效液相色谱和双向电泳将会成为蛋白质组学的重要分离工具。因此，高效液相色谱仪将为深入地揭示生命奥秘作出更大的贡献。
3、结语
高效液相色谱法在物质检测方面有了非常广泛的应用，同时在这一过程中其也在不断的完善，这是因为我国的科学技术在不断的发展，在这样的情况下，其应用的范围也在不断的拓宽，在更多的领域都能看到高效液相色谱法的身影，这对我国药品行业和食品行业的发展都有着非常重要的意义，因此我们必须要加大对这种技术的投入，使其更好的体现出自身的优势和价值，从而更好的推动我国相关行业的发展。
参考文献
[1]郑和辉，王萍，李洁.超高效液相色谱法检测化妆品中的12种磺胺抗生素[J].色谱.2007（02）
[2]李熠，赵静，薛晓锋，周金慧.超高效液相色谱法同时测定蜂胶中的12种活性成分[J].色谱.2007（06）
[3]翁芳华，陈建业，温鹏飞，黄卫东.蓝莓酒中11种酚酸的高效液相色谱测定[J].食品科学.2006（09）
关键词：细胞膜色谱法；液相色谱-质谱法；活性成分；佛手柑内酯
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.08.024
中图分类号：R284.1；R285.5
文献标识码：A
文章编号：1005-5304(2013)08-0066-03Screening Effective Components from Fructus Citri Sarcodactylis by Cell Membrane Chromatography and HPLC/MS WANG Yan-wei, CHANG Rui-miao, WANG Xin, YUE Yuan, XUE Hui, LI Xiao-ni (College of Pharmacy, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China)
Abstract：Objective To screen the active component from Fructus Citri Sarcodactylis which have aortic vascular relaxant effect. Methods The active components from Fructus Citri Sarcodactylis were screened by combining vascular smooth muscle/cell membrane chromatography (VSM/CMC) and liquid chromatography/mass spectrometry (LC/MS) with pharmacological assay in vitro. Results Bergapten was the active component of Fructus Citri Sarcodactylis that functions in vascular. The pharmacological experiment showed that bergapten had vasodilating effect. The capacity factor of this compound on the VSM/CMC model was found to be significantly correlated with its pharmacological effect. Conclusion Association between compound and membrane protein (receptor) can be reflected by using the VSM/CMC model. VSM/CMC-offline-LC/MS technology can be used to quickly screening new active components from natural medicine.
Key words：cell membrane chromatography；LC/MS；active component；bergapten
高血压是最常见的心血管疾病,需要长期用药。目前临床应用的降压药以化学药为主,虽然这些药起效速度快,但长期服用会产生耐药性,且会出现心悸、低血压、水肿等不良反应。佛手为芸香科植物佛手的干燥果实。佛手含挥发油、黄酮和香豆素类等化合物[1-3]。现代药理研究表明,佛手醇提取物对肠道基金项目：山西省科技厅社会发展项目(20120313016-4)通讯作者：李晓妮,E-mail：平滑肌有明显的抑制作用；有扩张冠状血管、增加冠脉血流量的作用；高浓度时可抑制心肌收缩力、减缓心率、降低血压、保护实验性心肌缺血[4-5]。本实验采用血管平滑肌细胞膜色谱法(VSM/CMC)[6-9]筛选佛手舒张血管的活性成分,从而为佛手的药效物质基础和创新药物研究开发提供实验依据。1 实验材料1.1 药物与试剂 佛手购于山西省药材公司,经本校生药学教研室高建平教 率、精密度、重复性等试验表明均符合要求。
对绿原酸HPLC含量测定的试验方法进行了筛选,并对建立的方法进行了准确度、精密度、专属性、线性范围和耐用性等方法学验证试验。结果表明,该测定方法专属性强、重复性、准确度与精密度良好,阴性对照无干扰,系统适用性良好。
本研究建立了黄柏、大黄的薄层色谱鉴别方法。由于当归等薄层色谱鉴别干扰严重,未能建立起有效的薄层色谱鉴别方法,今后将根据实际情况,继续予以研究。参考文献：[1] 吴安明,于肖辉,喻志标.杏香兔耳风颗粒中绿原酸含量测定研究[J].江西中医学院学报,2012,24(3)：46-48.[2] 赵涛,王月茹,卢露,等.鱼金清解口服液中绿原酸含量的测定[J].世界中医药,2012,7(2)：177-178.[3] 张建,梁艳.高效液相法测定清肝利胆口服液中绿原酸含量[J].中医研究,2012,25(4)：73-74.(收稿日期：2013-02-28,编辑：陈静)授鉴定为芸香科植物佛手Citrus medica L. var. sarcodactylis Swingle的干燥果实(广东)。尼群地平(中国药品生物制品检定所,批号100585-201104),硝苯地平(中国药品生物制品检定所,批号100338-201103),佛手柑内酯(成都瑞芬思生物科技有限公司,批号008-110627),格列齐特片(哈药集团制药总厂制剂厂,批号20110201),格列喹酮片(天津金世制药有限公司,批号20100901),甲醇(天津市四友精细化学品有限公司,批号373049-10914),大孔球形硅胶(青岛美高集团有限公司),K-H液(Krebs-Henseleit液)中的各成分均为分析纯。1.2 仪器
[关键词]液相色谱技术；食品；安全；检验；应用；
中图分类号：O657.7+2 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）03-0379-01
高效液相色谱技术因其具有分离效率高、检测速度快、检测灵敏度高等特点，已在食品安全检验领域发挥着重要作用，同时随着高效液相色谱-质谱联用技术的不断改进与发展，必将发挥越来越重要的作用。
1 高效液相色谱法
1.1 高效液相色谱法简介
液相色谱技术（HPLC技术）是一种起源于西方国家的先进的检验技术，在物理分离、化学分析中都得到了广泛的应用，以高效液相色谱仪为主要代表。液相色谱技术具有悠久的发展历史，经过不断的发展与更新而形成，具有时代性和历史性。色谱法就是利用色谱技术来利用物理性质来使其分离成固定相和流动相，进而展现出不同的分布特点，达到分离的目的。色谱法以凝胶色谱、气象色谱和液相色谱为主，其中液相色谱技术的应用价值最高。随着食品安全问题的愈演愈烈，食品安全检测工作被提上了日程，将液相色谱技术应用于食品安全检验中，对食品样品的在液体与固体或不互溶的情况下进行分离与分析，并对其中的成分进行鉴定的过程，能充分了解食品中所含有的成分并对其进行分析，可明确了解到食品是否具有安全性。
1.2 高效液相色谱法特点
与气相色谱法、经典液相色谱法相比，高效液相色谱法具有如下优点：①在小口径短不锈钢柱内填充颗粒极细的固定相，降低了传质阻力，有效提高柱效，分离效能高。②采用高压输液系统提高流动相的流速，缩短分析时间，分析一个样品仅需几分钟到几十分钟，分析速度高。③采用高灵敏度检测器，检测灵敏度高，紫外检测器可达0.01ng。④通过流动相可以控制和改善分离过程，同时色谱柱
2 液相色谱技术进行食品安全检验的几点思考
2.1 实现对食品营养成分的检验
高效液相色谱法可对食品中的营养成分进行定性、定量分析，即确定营养成分的种类及含量，如糖类、脂肪酸类、维生素等人体所必须的营养成分。裘立群[1]等用反相高效液相色谱法同时测定水果中脂溶性维生素。该方法准确度高，灵敏度好，回收率在88.5%～93.6%之间，适合于水果等低含量脂溶性维生素的测定。
2.2 实现对食品添加剂的检验
食品添加剂是指为改善食品色、香、味等品质，以及为防腐和加工工艺的需要而加入食品中的化合物质或者天然物质。我国规定了食品添加剂的最大使用量或残留量，但是目前超量使用添加剂的现象非常多，过量的添加剂对人体产生潜在的毒害。林海丹等建立了利用高效液相色谱法同时测定食品中18种添加剂的分析方法。该方法采用乙腈-6%乙酸溶液作为流动相，梯度洗脱程序，检测波长为280nm。结果显示在1.0～25mg/L的浓度范围内18中添加剂的线性良好，相关系数均在0.99以上，相对标准偏差在2.43%～11.7%之间，回收率在88.9%～99.9%之间，操作简便，结果准确度高。阿不都外力.吐尼亚孜[3]等利用反高效液相色谱法同时测定食品中14中食品添加剂，包括苯甲酸、山梨酸、尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丁酯、尼泊金丙酯、糖精钠、安赛蜜等添加剂。样品经简单处理后，经HypersilODS（4.6×200mm，5m，DEAIC）色谱柱分离，采用20mmol/L乙酸铵（pH=6.8）-甲醇为流动相进行梯度洗脱，流速设置为1mL/min，柱温控制在30℃，在波长234nm、254nm处利用紫外检测器对食品中的14种添加剂进行检测，并在18min内完成分析流程。该方法平均加标回收率在94%～99%之间，相对标准偏差小于4.5%。
2.3 实现对残留农药的检验
农药残留是农药使用后一个时期内没有被分解而残留于生物体、收获物、土壤、水体、大气中的微量农药原体、有毒代谢物、降解物和杂质的总称。据统计目前世界上化学农药年产量达200万t，其中有近1000种人工合成化合物被用作杀虫剂、杀菌剂、杀藻剂、除虫剂、落叶剂等类农药。农药尤其是有机农药的大量施用，造成严重的农药污染问题，成为对人体健康的严重威胁。食用含有大量剧毒残留农药的食物会导致人、畜急性中毒事故。长期食用农药残留超标的农副产品，可能引起人和动物的慢性中毒，诱发疾病，甚至影响到下一代。由于农药残留对健康的危害极大，各国对农药的施用都进行严格的管理，并制定了每种农药在食品中的最大残留限量。目前广泛使用的农药中以有机化合物为主，该类化合物的特点是分子量大、挥发性低、受热易分解或失去活性，高效液相色谱技术在此类化合物的定量分析中发挥着不可替代的作用。杨涛[4]等建立了高效液相色谱法测定果蔬中防腐杀菌剂的方法，可同时测定噻苯咪唑、邻苯基苯酚、联苯、对苯基苯酚、联苯醚、联苯胺、多菌灵、乙萘酚、乙氧基喹、抑霉唑10种防腐杀菌剂。该方法固定相采用ZORBAXExtend-C18柱，流动相采用不同比例的甲醇和pH8.0的磷酸盐缓冲溶液，检测器为紫外检测器进行检测，相对标准偏差（n=6）在0.83%～4.71%之间。
2.4 分析霉菌毒素
食品在加工、存储过程中，容易存在多种霉菌毒素，如黄曲霉素、玉米烯酮霉素等，有致癌性，严重危害人体健康。应用高效液相色谱技术和免疫亲和柱萃取，检测限为10ng/kg，可检测酸奶等食品中是否含有黄曲霉素；应用高效液相色谱与大气压化学电离质谱联用，检测限下降为0.12pg/kg，可检测粗提物食品中的玉米烯酮霉素。随着环境的日益恶化，像汞、锌、铅及其化合物等重金属也称为环境中广泛存在的一类污染物，对农作物和水产品的生长造成了危害，常采用化学法、原子荧光法等测定其含量，近年来随着HPLC技术的不断完善和发展，也出现了以HPLC技术测定无机离子的的报道，且效果良好。
3 高效液相色谱-质谱联用技术
高效液相色谱-质谱联用技术是一项新的分离技术，它利用质谱法提供未知物丰富的结构信息，从而克服了高效液相色谱法无法准确定性的缺点，该技术的特点集中表现在具有高分离能力、高灵敏度、应用范围广和极强的专属性方面。因其在对高沸点、难挥发、热不稳定性化合物的定性定量分析方面有其独特优势，已被广泛应用于食品安全检验领域，同时在药物分析特别是中草药分析领域也有极为广阔的应用前景。
4 结束语
综上所述，HPLC技术作为目前市场上进行食品安全检测的一种行之有效的分析分离手段，得到了广泛的应用，但是任何一种检测方法不可能做到面面俱到，因此合理综合使用多种色谱技术，实现检测结果的精确可靠且方便快捷，才能更好的服务于社会。另外政府也需加强市场监管，建立规范的市场经济秩序，杜绝食品安全问题，相关技术人员和部门需不断突破创新，开发更多、更好、更实用的食品检测方法，造福人类，促进社会和谐发展。
参考文献