提高网状纤维染色质量的体会

【关键词】 网状纤维；染色质量；氨银液

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2012.08.744 文章编号：1004-7484（2012）-08-3020-01

在病理日常技术工作中，为了疾病的鉴别诊断需要，除了常规的HE染色外，经常还需进行其他的特殊染色，其中经常会使用到网状纤维染色方法。然而该项特殊染色技术较难掌握，并且染色结果的好坏受多种因素影响。我科经多年实际操作，现就提高该染色结果的体会介绍如下。

1 材料与方法

1.1 材料 选取肝、胸腺、淋巴结等组织，10%中性甲醛固定，常规石蜡包埋，切片厚约4um。

1.2 氨银液的配制 用100ml小量杯盛10%硝酸银水溶液5ml，徐徐滴加浓氨水，此时溶液产生沉淀，继续滴加浓氨水至溶液变清亮，加入3%氢氧化钠水溶液5ml，溶液再次生成沉淀，继续缓缓滴加浓氨水至沉淀恰好溶解为止。最后加入蒸馏水至100ml即可。

1.3 染色方法 ①切片常规脱蜡至水后，再用蒸馏水洗涤。②0.5%酸性高锰酸钾水溶液5min，蒸馏水冲洗。③2%草酸漂白1min，蒸馏水冲洗。④2%铁明矾媒染10min，蒸馏水冲洗一次。⑤氨银液染1-2min蒸馏水冲洗。⑥10%中尔马林液还原1min，流水冲洗3min。⑦V.G复染3min，水洗。⑧常规脱水、透明、封固。

2 结果

网状纤维呈黑色，胶原纤维呈红色，红细胞呈黄色。

3 讨论

要染好网状纤维，需要掌握好以下几点：

3.1 切片的厚度要掌握在3至4um之间，不可太厚，不然容易造成脱片。

3.2 配制氨银液时应注意以下几点：①氨银染色主要靠化学反应作用，因此在染液配制及染色过程中所使用的玻璃器皿如漏斗、量筒、滴管等一定要清洁，可先用稀盐酸泡洗，再用蒸馏水冲洗干净，放入烤箱烤干使用。禁用自来水洗涤。因为自来水所含杂质较多，与银相遇会产生化学反应，影响染色效果[1]。②对相关试剂的纯度与用量要严格要求。如硝酸银纯度不高而含较多杂质，则会导致配制时氨水加入过量，使得配制好的氨银液着色效果差并且保存时间不长。滴加氨水时应边加边振荡溶液，使溶液恰好变清亮即可。

3.3 高锰酸钾氧化及草酸漂白的过程中是最容易产生切片脱落，因此时间均不宜太长。高锰酸钾氧化以切片呈棕褐色为度，而草酸漂白至切片变白即可，不然极易造成切片脱落。

3.4 2%铁明矾媒染时，各种染色方法的时间从3min到20min不等。我们经过多次实验对照，感觉以10min最为理想。

3.5 切片在染氨银液前，要用蒸馏水冲洗一下，以去除不必要的杂质而影响染色质量。氨银液染色时间1-2min左右，以液面出现银颗粒析出即可，不宜太久。染完氨银液之后要用蒸馏水从侧边快速把氨银液冲洗掉，避免氨银液的析出物污染组织。有些方法中，氨银液的染色以浸染为主。但我们认为这可能会出现两个问题，其一，切片背景不够清晰，组织上可能有银颗粒或杂质的污染；其二，氨银液用量过多，造成试剂的不必要浪费[2]。

3.6 以往网状纤维染色方法中，都用到氯化金分色及硫代硫酸钠固色。我们通过实际工作观察，发现氯化金容易把切片中已经染上银的比较纤细的网状纤维的颜色褪掉，造成着色不均匀现象[3]。而我们省略这两个步骤，对结果并无产生差异。

参考文献

[1] 方晓燕，潘金娥，蓝爱荣，黎飚.网状纤维染色法的改良[J].右江民族医学院学报，2001，5（1）：836-836.

[2] 杨世峰，程国平.介绍一种网状纤维染色改良法[J].解剖学杂志，2010，1（2）：132-133.

[3] 刘少颜.介绍一种改良的骨髓石蜡包埋组织网状纤维染色技术[J].临床与实验病理学杂志，2012，1（1）：104-104.