稻瘟灵高效液相色谱分析方法的研究

提要:对稻瘟灵高效液相色谱分析方法进行了研究。用紫外检测器、Agilent Eclipse Plus C18柱，以甲醇：水(75：25，V／V)为流动相, 流速为1mL／min，在310nm波长下对稻瘟灵分析，试验了稻瘟灵主含量与杂质的分离，取得满意的结果。该方法的相对标准偏差为0.49%，添加平均回收率为99.61%，最低检出浓度为1mg/L。该分析方法快速、简单、灵敏、具有良好的准确度和精密度，适用于常规分析检验。

关键词：稻瘟灵；C18；紫外检测器

Abstract：The quantitative analysis method of isoprothiolane was developed using high performance liquid chromatography(HPLC)with ultraviolet absorbance detector and Agilent Eclipse Plus C18 column, The mobile phase was methanol-water(75:25 V/V)at a flowrate of 1.0 mL／min．The wavelength of detector was set at 310 nm．The results showed that Isoprothiolane and impurities could be effectively isolated,the result was satisfactory.The determination results of HPLC showed that the relative standard deviations was 0.49% and average spiked recoveries of Isoprothiolane was 99.61%,The detection limit of isoprothiolane was 1mg/L．The method can be used for conventional analysis, which has rapid、simple、accurate and sensitive characteristics.

Key words：Isoprothiolane;C18;UV detector;

中图分类号： S435.111.4+1 文献标识码： A 文章编号：

稻瘟灵（分子式：C12H18O4S2），又名富士一号，中文名1,3-二硫戊烷-2-叉丙二酸二异丙酯，属低毒、低残留、高效内吸的有机硫杀菌剂。稻瘟灵主要用于防治水稻稻颈瘟、稻叶瘟、稻苗瘟等稻瘟病，同时对水稻纹枯病、小球菌核病和白叶枯病有一定防效、并可兼治飞虱，本文通过对稻瘟灵高效液相色谱分析色谱柱、检测波长、流动相及配比等方面进行选择和优化，建立了一种可用于稻瘟灵原药有效成分测定的分析方法。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

高效液相色谱仪（Agilent 美国），配G1322A在线脱气装置、G1311A四元梯度泵、G1329A自动进样器、G1316A柱温箱、G1315D二极管阵列检测器、化学工作站；超声清洗器,针筒式微孔滤膜过滤器，0.45μm，其他玻璃仪器均经过校准。

乙腈为色谱纯；水为新蒸二次蒸馏水；稻瘟灵标样：已知含量99.0%。

1.2 试验方法

1.2.1 液相色谱分析条件

液相色谱柱： 250mm×4.6mm(id)不锈钢柱，内装Eclipse Plus C18填充物，5μm；流动相：甲醇：水=75:25（V/V）；流速：1.0ml/min；柱温：35℃，检测波长：310nm，进样体积：5μl。

标样、试样高效液相色谱图分别见图1，保留时间约为4.5min。

图1标样和试样色谱图分别为isoprothiolane-Std-1和isoprothiolane-Sample-1

1.2.2标样溶液以及试样溶液的配制

称取稻瘟灵标样0.05g（精确至0.0002g）于100ml容量瓶中，加入适量甲醇，超声波振荡溶解后，再加甲醇稀释至刻度，摇匀。标准溶液现配现用。

称取含稻瘟灵试样0.05g（精确至0.0002g）于100ml容量瓶中，加入适量甲醇，超声波振荡溶解后，再加甲醇稀释至刻度，摇匀。

1.3测定

在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针相对响应值的重复性，待相邻两针的响应值变化小于1.5％，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.4 方法的添加回收率

移取5.0ml 浓度为210mg/L的稻瘟灵标准溶液于两支10ml具塞刻度管中，向其中分别添加5.0ml浓度为70.0mg/L、140.0mg/L的稻瘟灵标准溶液，摇匀，配成1号、2号添加溶液，在上述操作条件下重复进样，分别计算其峰面积平均值，并代入计算测定浓度和添加回收率。

2 结果与讨论

2.1 色谱柱选择

在流动相及检测波长一定时，笔者采用Agilent Eclipse Plus C18（ 250mm×4.6mm，5μm）、Eclipse XDB-C18（ 150mm×4.6mm，5μm）、 Agilent StableBond C8（ 250mm×4.6mm，5μm）不锈钢柱，分别对稻瘟灵标准溶液进行了测定，发现了稻瘟灵与杂质在Agilent Eclipse C18（ 250mm×4.6mm，5μm）色谱柱上分离较好。

2.2 流动相选择

在Agilent Eclipse C18（ 250mm×4.6mm，5μm）色谱柱上，选用①V(甲醇):V(水) )=45:55；②V(甲醇):V(水)=60:40；③V(甲醇):V(水))=75:25；④V(乙腈):V(水)=60:40；⑤V(乙腈):V(水)=80:20作为流动相对稻瘟灵样品溶液进行测定，发现①④条件下稻瘟灵的出峰时间虽然在10min左右，但与杂质的分离结果并不理想；在②条件下有所改善，但稻瘟灵的出峰时间延长并且稻瘟灵峰形不好，用⑤为流动相时，分离时间短，色谱峰尖锐但成本较高；而用③为流动相时，分离时间短，色谱峰尖锐,样品峰与杂质分离得较好，并且当流速为1ml/min时，泵的操作压力低。

2.3检测波长选择

对稻瘟灵在190nm～400nm紫外吸收波长下进行扫描，发现最大波长为310nm，考虑到稻瘟灵常与三环唑复配，三环唑最大吸收波长在230nm，另外考虑到甲醇的紫外吸收截止波长和检测器最适宜的波长范围，我们最终选择了310nm为稻瘟灵的检测波长。实验结果显示，在此波长下稻瘟灵吸收峰面积较大、稳定，且能与杂质较好的分离，

2.4 标准曲线的选择

用液相色谱在上述条件下对稻瘟灵标准溶液(浓度分别为20.0、50.0、100.0、250.0、500.0mg/L)进样2次，以峰面积平均值-浓度进行线性回归，得到的方程为Y=14.032-1.8693x,相关系数为R2=0.9999，如图2所示。

图2稻瘟灵浓度与峰面积的线性方程

2.5 方法的精密度和准确度

用液相色谱对稻瘟灵标准溶液(浓度为500.0mg/L)进样15次，计算得到相对标准偏差为0.49%。标准溶液平均添加回收率99.61% 。

3 结束语

本文通过对高效液相色谱条件的选择与优化，建立稻瘟灵高效液相色谱分析方法精密度和准确度好，能满足稻瘟灵原药及其他剂型中稻瘟灵有效成分分析要求。

参考文献：

[1] 陈敏为，甘礼骓，《有机杂环化合物》（第一版）. 北京: 高等教育出版社. 61990: 4244. ISBN 7-04-001122-0/O.699.

[2] 付羽 李明 刘垠 常耀强，高效液相色谱法同时测定水稻及土壤中稻瘟灵和三环唑《湖北农业科学》2012年 第11期 2325-2328页

[3] 程运斌 刘育清,40%异稻・稻瘟灵乳油的气相色谱分析《农药》2010年 第8期578-580页

[4] 夏雨 李国全 王英,混剂中稻瘟灵和异稻瘟净的液相色谱分析《农药科学与管理》2008年 第10期 11-13页