有关复方中药克痹骨泰胶囊质量标准的研究

【中图分类号】R28 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2012)07－0354－02

【摘要】 目的研究与修订克痹骨泰胶囊的质量标准。方法采用TLC方法对克痹骨泰胶囊中的血竭、白花蛇舌草进行定性鉴别；应用HPLC法，选用ZORBAX-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），乙腈－0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液（48∶52）为流动相，检测波长440 nm，流速1.0 ml/min，柱温35℃，对克痹骨泰胶囊中的血竭素进行含量测定。结果血竭、白花蛇舌草的TLC鉴别方法专属性强，简单可行。HPLC含量测定，血竭素进样量在0.035 22～0.281 8 μg范围内与峰面积成良好的线性关系（r＝0.999 97，n=5）；血竭素的回收率为100.29%，RSD=0.51%。结论该方法可对克痹骨泰胶囊的主要药味进行准确的定性或定量测定，能更为有效地控制克痹骨泰胶囊的质量。

【关键词】 克痹骨泰胶囊 质量标准 薄层色谱法 高效液相色谱法

克痹骨泰胶囊是由石见穿、白花蛇舌草、延胡索、没药（制）、血竭、土鳖虫、巴戟天7味药材制成的中药成方制剂。国家食品药品监督管理局颁布的克痹骨泰胶囊标准［WS3-017(Z-003)-2000(Z)］规定了对血竭、白花蛇舌草、延胡索的TLC鉴别和血竭素的含量测定。但此标准规定项下白花蛇舌草鉴别，所得TLC检测结果不明显，不能很好的达到鉴别的目的；血竭的鉴别中所使用的提取溶剂苯毒性较大；含量测定用薄层扫描法本身有较大测定误差。本实验修订了血竭、白花蛇舌草的TLC鉴别，并建立了高效液相色谱法测定克痹骨泰胶囊中血竭素的含量，旨在为药品检验工作提供更为安全、有效、精确的定性定量测定方法。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪：Agilent 1100高效液相色谱仪

克痹骨泰胶囊样品由郑州益康药物研究所提供；血竭素高氯酸盐对照品（中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号0811－200203）；血竭药材对照品（中国药品生物制品检定所，批号 906-9005）；白花蛇舌草对照药材（中国药品生物制品检定所，批号 1183-200101）；

薄层硅胶板（5 cm×20 cm，青岛海洋化工厂生产）；乙腈为色谱纯，甲醇、乙醇、甲苯、苯、三氯甲烷、正己烷等为分析纯。纯净水为自制双蒸水。

2 TLC鉴别

2.1 血竭的TLC鉴别 取本品内容物5 g，研匀，加甲苯20 ml，超声处理60 min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品；另取血竭对照药材0.1 g，加三氯甲烷10 ml，振摇30分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；取缺血竭阴性样品，同法制成阴性样品溶液；照薄层色谱法（《中国药典》2005年版Ⅰ部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇（19∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。本法经阴性对照实验及3批样品实验观察，确认本法可行。

2.2 白花蛇舌草的TLC鉴别 取本品内容物5 g，加硅藻土2 g，研匀，加乙醇50 ml，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加10%甲醇溶液10 ml使溶解，用三氯甲烷振摇提取2次，15 ml/次，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷2 ml使溶解，作为供试品溶液。取白花蛇舌草12 g，加水煎煮3次，滤过，滤液浓缩至近干，加硅藻土1 g，研匀，加乙醇50 ml，同法制成对照品药材溶液；取缺白花蛇舌草阴性样品，同法制成阴性样品溶液；照薄层色谱法［中国药典2005年版一部附录VIB］试验，同一硅胶G薄层板上，以正己烷-三氯甲烷-甲醇（3∶9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。本法经阴性对照实验及3批样品试验观察，确认本法可行。

3 含量测定

3.1 色谱条件 ZORBAX-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm, 5μm）；乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钠（48∶52）为流动相；流速1.0 ml/min，检测波长440 nm；理论板数按血竭素峰计算应不低于3 000。

上述色谱条件参照《中国药典》2005年版Ⅰ部血竭项下【含量测定】项下方法拟订，在上述条件下，血竭素峰与相邻色谱峰可获得基线分离，分离度大于1.5。

3.2 溶液的制备

3.2.1

对照品溶液的制备 精密称取血竭素高氯酸盐对照品4.85 mg，置50 ml棕色量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1 ml，置5 ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每毫升中含血竭素14.09 ug）(血竭素重量=血竭素高氯酸盐重量/1.377) 。

3.2.2 供试品溶液制备 取装量差异项下的本品，研细，取约5.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入3%磷酸甲醇溶液50 ml，密塞，称定重量，超声处理5 min，放冷，再称定重量，用3%磷酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 ml，置10 ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。

3.2.3 缺血竭的阴性对照溶液的制备 依据处方中的比例，按制法制备缺血竭的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。经进样检验阴性无干扰。

3.3 线性关系的考察 精密取血竭素高氯酸盐对照品溶液，分别制成浓度为3.522，7.045，14.09，21.14，28.18 ug/ml的溶液(以血竭素计)，分别注入高效液相色谱仪，进样量10μl，记录血竭素峰面积,以峰面积积分值Y为纵坐标，血竭素的浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程为：Y=32.079 78X+1.385 19e-1，r=0.999 97。表明血竭素进样量在0.035 22～0.281 8 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

3.4 精密度实验