疏肝健脾祛湿中药体内抗鸭乙型肝炎病毒的实验研究

[摘要] 目的：观察由疏肝健脾湿中药组成的加味四逆散醇提物体内抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的作用。方法：采用先天感染鸭乙型肝炎病毒的广州麻鸭为动物模型，以斑点杂交法检测用药前后鸭血清DHBV-DNA OD值的变化，并以拉米夫定作阳性对照。结果：加味四逆散大剂量组用药第5天和第10天，血清DHBV-DNA OD值明显下降，与病毒对照组比较，差异有显著性 (P

[关键词] 疏肝健脾湿法；加味四逆散；鸭乙型肝炎病毒；鸭肝炎模型

[中图分类号] R256 [文献标识码]B [文章编号]1673-7210（2008）05（a）-025-02

Experimental study on the effect of traditional Chinese medicine which dispersing stagnated liver qi for strengthening spleen and eliminating dampness to anti-DHBV DNA in vivo

CHEN Shi-hui, MO Yun-tao

（Nanzhuang Hospital of Foshan City，Foshan 528061，China)

[Abstract] Objective:To study the anti-DHBV effect of alcohol extraction from Jiaweisinisan(JWSNS) decoction which combined with the traditional Chinese medicine, which dispersing stagnated liver qi for strengthening spleen and eliminating in vivo.Methods:Congenitally infected with DHBV Guangzhou brown spot ducklings were used as the hepatitis B animal model and the change of serum HBV-DNA optic density value (OD value) was observed.Lamivudine was used as the positive control drug.Results:The virus titer of JWSNS large dose group decreased markedly at day 5 and day 10,compared to virus control group(P

[Key words] Dispersing stagnated liver qi for strengthening spleen and eliminating dampness method;Jiaweisinisan decoction;Duck hepatitis B virus;Duck hepatitis model

四逆散方出自《伤寒论》，由柴胡、芍药、枳实、甘草组成。方中柴胡疏肝透热，升发郁阳；枳实微寒而降，下气泄热，宣通胃络；芍药敛阴养血，甘草益气和中，合则制肝扶脾而缓急止痛。四药相配，升降并用，肝脾(胃)两调，使邪去郁解，气机调畅，清阳得升则“四逆”自温。现代医家经临床观察和实验研究发现，四逆散或四逆散加味具有使HBsAg，HBeAg，HBV DNA阴转和修复肝损伤，改善肝功能，保护肝细胞，缓解减轻肝纤维化的程度，改善病情等作用。

张仲景在《金匮要略》中提到：“见肝之病，知肝传脾，当先实脾”，而脾喜燥而恶湿。故本研究根据传统中医理论及笔者临床经验总结，在四逆散基础上加味健脾中药白术、茯苓及祛湿药鸡骨草组成加味四逆散进行体内实验。

1 材料与方法

1.1实验动物

1日龄雄性广州麻鸭，购自广州石井镇潮阳村孵化场，将动物购回并适应性喂养2 d后，经斑点杂交法筛选出先天自然感染DHBV者作为实验用动物。

1.2 药物

柴胡、枳实、白芍、甘草、云苓、白术、鸡骨草，药物皆购自广州中医药大学第一附属医院中药房。以70%乙醇提取，分别浓缩成含生药1 g/ml的原液；拉米夫定(3TC)片剂，葛兰素史克制药(苏州)有限公司，国药准字H20030581，100 mg/片，蒸馏水溶解成10 mg/ml的浓度。

1.3分组及给药方法

将先天感染鸭随机分为A、B、C、D、E 5组，每组6只。A组为病毒对照组，B组为3TC组，C组为加味四逆散大剂量组，D组为中剂量组，E组为小剂量组。加味四逆散醇提物分别以20 g/(kg・d)、10 g/(kg・d)、5 g/(kg・d)灌胃；3TC按200 mg/(kg・d)灌胃，共灌胃10 d。对照组未做任何处理。

1.4 鸭血中DHBV检测

每组动物分别于给药前1 d(T0)、给药后5 d(T5)、给药后10 d(T10)、停药后3 d(P3)自胫静脉采血，离心，收集血清。按缺口翻译试剂盒操作说明书，用32P标记作探针，将40 μl血清点于硝酸纤维膜上，进行斑点杂交，放射自显影图片斑点，在酶标仪上检测OD值( 滤光片为490 nm)，以OD值间接代表病毒载量，用t检验进行统计分析。

2结果

各药物组与对照组相同时间光密度值比较及药物组给药不同时间光密度值与给药前比较结果见表1。

表1中结果显示，3TC组在给药第5天、第10天血清DHBV-DNA含量明显下降，与对照组比较及与自身用药前比较，差异均有显著性，分别为P＜0.05, P＜0.05；停药后3 d病毒滴度回升，与对照组及用药前比较，差异均无显著性(P＞0.05)；加味四逆散大剂量组在用药第5天起DHBV-DNA含量降低，第10天DHBV-DNA继续降低，与对照组及自身用药前比较差异均有显著性，分别为P＜0.05，P＜0.01，停药后第3天病毒滴度回升，与对照组比较，差异无显著性(P＞0.05)；加味四逆散中剂量组在用药第5天、第10天DHBV-DNA降低，与对照组比较差异有显著性，分别为P＜0.05，P＜0.01，与自身用药前比较，第10天明显下降，差异有显著性(P＜0.01)；停药第3天后病毒滴度回升，与对照组比较差异无显著性(P＞0.05)；小剂量组在整个实验期间血清DHBV-DNA含量均无下降。

3讨论

据文献报道，四逆散原方或四逆散加味一般具有保肝降酶、改善肝细胞损伤、提高机体免疫功能和延缓肝纤维化进程等的作用。研究表明，甘草酸类制剂能够有效降低慢性肝炎患者的转氨酶、总胆红素，且无明显副作用[1]。甘草酸抑制肝炎病毒的基础在于它具有皮质激素样作用，可减少肝细胞的水肿、坏死；抑制肥大细胞释放组织胺，抑制花生四烯酸和前列腺素E2，减轻细胞间质炎症反应，从而发挥与皮质醇类似的非特异性的抗炎作用。动物实验表明，抑制乙肝表面抗原(HBsAg)是其治疗慢性肝炎的基础[2]。柴胡也有显著保肝作用，能对抗多种生物或化学毒物所致肝损伤，柴胡皂苷可以抑制胆碱酯酶，发挥拟胆碱样作用，进而对消化系统和神经系统发挥调节作用[3]。另外，有研究发现，白芍总苷与当归提取物两药合用可对抗D-GL和CCl4所致血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)升高及还原型谷胱甘肽(GSH)降低，减轻D-GL所致肝脏病变程度[4]。实验证明，白术水煎液可显著提高老年小鼠全血谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活力，显著降低红细胞中MDA含量 [5]。而茯苓素体内诱导的小鼠腹腔巨噬细胞在体外抗病毒作用加强。茯苓素对小鼠的细胞免疫和体液免疫有相当强度的抑制作用，茯苓素在5～80 μg/ml浓度对PHA、LPS和ConA诱导的淋巴细胞转化均有显著的抑制作用，对小鼠血清抗体及脾细胞抗体产生能力也均有显著的抑制作用[6]。而鸡骨草性寒味苦，入脾、胃、膀胱经，具清热利湿、退黄的功效，是广东民间有名的祛湿药之一，也是常用的治疗急性肝炎的中草药。现代药理研究表明，鸡骨草能增强机体的免疫功能，且有明显的抗炎作用[7]。

本实验结果表明，加味四逆散大剂量组在用药第5天起DHBV-DNA含量降低，用药第10天DHBV-DNA仍在较低水平，但停药第3天后病毒滴度开始回升；中剂量组在用药第5天起DHBV-DNA含量降低，第10天DHBV-DNA继续降低，但停药第3天后病毒滴度开始回升，而小剂量组在整个用药过程中病毒滴度均无明显下降。本实验结果提示，中药复方四逆散及在其基础上加用健脾、祛湿中药可起到抗DHBV的作用，运用疏肝理脾，健脾湿的治疗原则治疗慢性乙型肝炎值得在临床推广运用。

从本实验结果可以看到，无论是3TC或者是加味四逆散停药后血清DHBV-DNA滴度均有回升的现象，这说明慢性乙型肝炎是一个长期的病理过程，必须坚持长期用药，以期得到更佳的治疗效果。

[参考文献]

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[2]Sato H,Goto W,Yamamura J,et al.Therapeutic basis of glycyrrhizin on chronic hepatitis B[J].Antiviral Res,1996,30 (2-3):171-177.

[3]王萍,陈青莲.柴胡炮制品对小白鼠全血胆碱酯酶活力的影响[J].中药材, 2000,23(4):219-219.

[4]陈象青,王钦茂,方华武,等.白芍总苷与当归提取物合用对实验性肝炎的保护作用[J].安徽中医学院学报,2002,21(3):44-47.

[5]李怀荆.白术水煎剂对老年小鼠抗衰老作用影响[J].佳木斯医学院学报, 1996,19 (1): 9.

[6]王国军,李嗣英,许津,等.茯苓素对小鼠免疫系统功能的影响[J].中国抗生素杂志,1992,17(1):42-47.

[7]周芳,李爱媛.鸡骨草与毛鸡骨草抗炎免疫的实验研究[J].云南中医中药杂志,2005,26(4):33-35.

（收稿日期：2008-01-16）

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