医用臭氧治疗对HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群的影响

摘要：目的：观察医用臭氧治疗hbeag阳性慢性乙型炎患者外周血T淋巴细胞亚群的变化，探讨医用臭氧对机体免疫功能的影响。

方法：采集165例医用臭氧治疗的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者治疗前、后及32例（对照组）健康体检者的外周血，用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群的变化。

结果：HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者与健康体检者相比，CD4+T淋巴细胞降低（P

结论：医用臭氧能提高对HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者的CD4+，CD8+水平，增强其抗病毒应答能力。

关键词：慢性乙型肝炎医用臭氧T细胞亚群流式细胞术

【中图分类号】R4【文献标识码】B【文章编号】1008-1879（2012）11-0165-02

目前国内外对T细胞免疫在乙型肝炎患者中的报道较多[1，2]，并发现T淋巴细胞亚群比例的失调是导致感染慢性化的重要原因[3]，有作者采用臭氧治疗45例慢性乙型肝炎（CHB）患者，发现有一定的疗效，而无严重的不良事件发生[4]，为此我们应用医用臭氧治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者165例，并观察其疗效及外周血T淋巴细胞亚群的变化，现报道如下。

1对象与方法

1.1病历来源。我院及外院2010年8月—2011年10月住院及门诊HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者165例，男135例，女30例，年龄18-65岁，平均年龄（31.2±10.3）岁，符合2000年（西安）全国传染病与寄生虫病和肝病学术会议修订的标准[5]，所有病例HBsAg，HBeAg，HBV DNA持续阳性6个月，ALT在正常值上限的2-10倍，血清总胆红素不超过正常上限的2倍，血清白蛋白大于32g/L，凝血酶原活动度大于60%，外周血红细胞计数大于4.0×109/L、血小板计数大于80×109/L。1年内未接受任何抗病毒或免疫调节剂，排除丙型肝炎，丁型肝炎、HIV等重叠感染者以及糖尿病、甲状腺功能异常，精神神经系统疾病、自身免疫性疾病、严重心肾疾病患者。另选32名我院健康体检者作为外周血T淋巴细胞亚群检测的对照组。

1.2治疗方法。165例HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者，在常规护肝治疗如静脉滴注还原性谷胱甘肽等基础上，在患者签署知情同意书的条件下，应用医用臭氧自血疗法（MAH），抽患者外周静脉血100亳升，流入密闭的一次性采血袋中（袋中加有枸椽酸钠抗凝剂），用一次性注射器从臭氧发生设备（德国赫美斯臭氧发生器）抽取50亳升一定浓度臭氧和50亳升医用纯氧混合气体，通过滤膜注入臭氧反应袋中与全血充分混合后（5分钟），再回输患者体内。第一个月：臭氧浓度20-35μg/ml×100ml气体×100ml血液。第1周：臭氧浓度20μg/ml，3次（隔日1次）。第2周：臭氧浓度25μg/ml，3次（隔日1次）。第3周：臭氧浓度30μg/ml，3次（隔日1次）。第4周臭氧浓度35μg/ml，3次（隔日1次）。第二个月：医用臭氧浓度40μg/ml×100ml气体×100ml血液。第三个月：医用臭氧浓度20μg/ml×100ml气体×100ml血液。每周3次，共3个月。

1.3检测方法。外周血淋巴细胞亚群检测，采用K3EOTA抗凝真空管采血5ml，在流式细胞仪（美国BecKMAN、coulTET公司，）上检测CD4+，CD8+细胞，萤光标记单克隆抗体CD4+和CD8+购自BeckMAN、coulTER公司，操作按试剂盒说明书进行，血清生化学指标检测采用美国ABI公司7000荧光定量PCR仪（深圳匹基生物工程公司）血清学标志检测采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测（上海科华公司）。

1.4统计学方法。采用SPSS13.0统计软件进行统计分析，计量资料以X±S表示，两组间差异比较采用成组设计的t检验，以P

2结果

治疗前后患者肝功能及ABVDNA，HBeAg，变化情况（见表1）。

3讨论

乙型肝炎病毒（HBV）是一种非细胞毒性的病毒，其所致的肝细胞损坏是由机体针对HBV特异性抗原的免疫反应的所引起[5]。机体感染HBV后外周血淋巴细胞亚群间的平衡被打破，主要表现为各种淋巴细肥亚群数目和功能的改变[7]。而Bocci等进行臭氧对血液中白细胞尤其是淋巴细胞的体外作用的十余年研究，终地揭开了臭氧在一定浓度窗下具有免疫激活和调节作用的面纱，臭氧作用于全血，可诱导产生众多细胞因子[4]。据国内外研究显示，宿主的细胞免疫功能特别是HBV特异性CD+4T细胞反应和CD8+细胞反应对HBV的清除和疾病的转归有重要的影响[8]，另外Peraltac在肝脏缺血再灌注损伤研究中发现，臭氧能提高腺苷量，降低黄嘌呤水平。前者具有保护作用，后者可形成反应性自由基，对肝脏具有损伤作用[9]。

本文结果显示采用医用臭氧治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎12周后，患者CD+4T细胞明显上升，CD8+T细胞明显下降，CD+4/CD8+明显上升，说明患者的细胞免疫功能得到一定恢复，且肝功能改善HBV DNA水平、HBeAg水平明显下降。

总之，乙型肝炎是严重危害人类健康的疾病，感染乙肝病毒的转归与机体的免疫状态密切相关，从免疫学的观点看，治疗乙肝的关键是恢复慢性HBV感染者体内有效的T细胞反应[10]。因此医用臭氧治疗慢性乙型肝炎值得临床进一步探索。

参考文献

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