高效液相色谱法测定八角属植物果实中原儿茶酸的含量

摘要: 目的：建立了八角果实中原儿茶酸的含量测定方法，明确八角科植物果实中原儿茶酸的含量.方法：HPLC法，采用Diamonsil TMC18柱，甲醇-水（含08％冰醋酸）为流动相，检测波长为260 nm.结果：该方法线性关系良好，精密度高，平均回收率9911％，RSD＝185%（n＝5）.得出了大八角和野八角果实中的原儿茶酸的含量较高，超过6%，为原儿茶酸的资源植物的结论.

关键词: 高效液相色谱法；原儿茶酸；八角属

中图分类号:R282.6 文献标识码:A 文章编号:1672-8513(2010)02-0110-03

Determination of Protocatecheuic Acid in the Fruit of Illiciaceae Plants by HPLC

[KH*2]HUANG Jianmei 1, DUAN Lei 1, DUAN Tianxuan 1, MA Changhua 1，XUE Yun 2

(1.School of Chinese Pharmacy, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100102,China；

2.Yunnan Honghe Food and Drug Administration, Mengzi 661100 China)

Abstract: The research aims to establish a method for determining the concentration of protocatecheuic acid in Illicium fruits and uses HPLC with Diamonsil TMC18 column as stationary phase, methanol-water(including 0.8％ glacial acetic acid) as mobile phase and λ 260 nm as detection wavelength. The research findings show that the method has a linear calibration curve, high in precision and satisfactory in repeatability; the average recovery is 99.11%; the concentration of protocatecheuic acid in the fruit of Illicium majus and Illicium simonsii is higher than others and Illicium fruit can serve as a source of protocatecheuic acid.

Key words:HPLC; Protocatecheuic acid; Illicium

八角科植物为单一属科，在全世界共有34种，我国有24种，为八角科植物的主要分布区.我国西南地区八角科植物的资源比较丰富.八角茴香和地枫皮为中国药典2005版收载的来源于八角属的品种.八角属植物果实中的主要成分有挥发油、倍半萜内酯、黄酮、木质素及有机酸等成分［1］.有机酸类成分在各种果实中普遍存在，而且含量较大，其中主要成分为莽草酸 ［2］和原儿茶酸.药理实验表明原儿茶酸具在体外具有明显的抑制血小板聚集活性和抗菌活性［3］，还有能够降低心肌耗氧量，拮抗肾上腺素所致的心肌耗氧量增加，提高心肌耐氧能力，减慢心率，改善缺血中心区的乳酸和K ＋的产生，显著减小心肌梗死范围［4］的作用.本文建立八角属植物果实中原儿茶酸的高效液相含量测定方法，并测定了八角科15种植物果实中原儿茶酸的含量，扩大原儿茶酸的资源.

1 仪器与试药

HP1100高效液相色谱仪（VWD检测器，四元泵，Aglient化学工作站），Diamonsil TMC18（25 mm×460 mm，5 μm）色谱柱；水为娃哈哈纯净水，甲醇为色谱纯，冰醋酸为化学纯；原儿茶酸对照品为本室自制，熔点200～202 ℃，其EI-MS、 13C NMR及 1H NMR与文献一致,色谱归一化测得含量为9824％；八角属果实经北京中医药大学中药学院黄建梅教授鉴定.

2 方法与结果

21 色谱条件

Diamonsil TMC18（25 mm×460 mm，5 μm）色谱柱；检测波长：260 nm；流动相：甲醇－水（含08％冰醋酸）（20∶80）；流速：10 mL/min，色谱图见图1~2.

22 对照品溶液的制备

精密称取原儿茶酸对照品约5 g，置50 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度.

23 供试品溶液的制备

将八角药材粉碎，过40目筛，精密称取药材粉末约01 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇－08％冰醋酸（40∶60）20 mL，密塞，称重，超声提取50 min，提取完毕后再精密秤定并用甲醇－08％冰醋酸（40∶60）补足至原重量，吸取5 mL上清液，用045 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液备用.

24 色谱系统适用性试验

按上述样品制备方法和色谱条件进行分析，以原儿茶酸计算，测得理论塔板数为9 000，原儿茶酸和前后色谱峰达到基线分离，原儿茶酸色谱峰的拖尾因子为094，峰形基本对称.

25 方法学考察

1）线性范围：精密称取原儿茶酸对照品适量，用甲醇溶解并配成原儿茶酸对照品溶液488 μg/mL，精密吸取对照品溶液1,2,4,6,8,10 μL进样，以原儿茶酸量(μg)为横坐标，原儿茶酸峰面积（mAU*s）为纵坐标进行线性回归，其回归方程为A=3 4461 m-14551，相关系数r=0999 8，结果表明原儿茶酸在0048 8～0488 μg与峰面积线性关系良好.

2）精密度试验：精密吸取原儿茶酸对照品溶液10 μL，重复进样5次，测定原儿茶酸得峰面积，结果RSD=126％.

3）稳定性试验：分别配置原儿茶酸对照溶液（1952 μg/mL）和供试品溶液（生药535 mg/mL），分别在0,2,4,6,8 h进样测定，测得对照品溶液的RSD＝193％，供试品溶液的RSD＝204％，结果表明，样品溶液和供试品溶液在8 h内稳定.

4）重复性试验：精密称取厚皮香八角粉末约01 g共5份，按23所述方法处理，精密量取续滤液10 μL进样，用外标一点法计算含量，测得原儿茶酸含量为349 mg/g，RSD＝220％.

5）加样回收率试验：精密称取已知含量的厚皮香八角粉末01 g 5份，置50 mL锥形瓶中，精密加入488 μg/mL原儿茶酸溶液8 mL，再加入甲醇8 mL，08％冰醋酸24 mL再按23所述方法处理，精密量取续滤液10 μL进样，以外标一点法计算质量分数，并计算加样回收率，平均回收率为9911％，RSD=185%.

26 样品的测定

按23制备供试品溶液，分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，分别注入高效液相色谱仪，测定色谱峰峰面积，用外标一点法计算含量，结果见表1.

3 结语

提取条件的选择：分别采用甲醇、甲醇－水、甲醇－酸水系统进行提取，发现甲醇－酸水系统提取效果比较好；又考察了酸水的量，结果40％甲醇－酸水的提取效果较好；确定提取溶剂之后又考察了超声、浸泡12 h后超声、索式提取3种提取方法，最终认为超声即可；最后又考察了超声提取时间，认为50 min即可提取完全。

流动相选择：分别采用甲醇－水、甲醇－05％冰醋酸水、甲醇－08％冰醋酸水的流动相系统进行分析，发现甲醇－08％冰醋酸水系统不仅分离效果较好，而且峰形也比较对称。

原儿茶酸已被证实对心血管系统具有明显的活性，本研究结果表明：八角属植物果实均含有较大量的原儿茶酸，可以作为原儿茶酸的资源植物，研究原儿茶酸在八角属植物果实中的分布对该属植物的资源利用有一定的实际意义。

参考文献:

［1］ 杨春澍，孙建宁，黄建梅.细辛属和八角属中药研究与应用［M］.北京:人民卫生出版社,2006.

［2］王晓强，郭亚健，杨春澍. 高效液相法测定八角属部分植物果实中莽草酸的含量［J］.中国中药杂志，2001,26（7）：447-449.

［3］杨东明，苏世文，李铣，等.五灵脂活性成分的研究［J］.药学学报，1987,22（10）：765-768.

［4］饶曼人，刘广余，高长忠，等. 原儿茶酸对缺血区心肌代谢及心肌梗塞范围的影响［J］.中国药理学报，1988,9（1）：27-30.

收稿日期:2009-10-26.

基金项目:霍英东教育基金会：高等院校青年教师基金（101034）.

作者简介:黄建梅（1970-），女，博士，教授.主要研究方向：中药成分的化学与生物活性研究.