高效液相色谱法测定浓香型白酒中乳酸的含量

摘要 [目的]建立测定浓香型白酒中乳酸含量的HPLC方法。[方法]采用Agilent SB-C18柱（4.6×150 mm2，5 μm）色谱柱，0.005 mol/L H2SO4溶液为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长210 nm，柱温35 ℃，进样量20 μL。[结果]乳酸在1～12 mg/mL的浓度范围内与峰面积呈良好线性关系（R2=0.999 8），平均回收率为99.36%（RSD=0.066%），最低检出限为0.009 mg/mL。[结论]此方法准确、简便、快速，适用于浓香型白酒中乳酸的含量测定。

关键词 浓香型白酒；乳酸；含量测定；高效液相色谱法

中图分类号 S571.1 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）04-0291-02

Determination of Lactic Acid Content in Chinese Strong Aromatic Spirits by HPLC

LI Bin WANG Ying

（College of Biological and Chemical Engineering，Nanyang Institute of Technology，Nanyang Henan 473004）

Abstract [Objective]To establish a HPLC method for the determination of the lactic acid content in Chinese strong aromatic spirits.[Methods]An Agilent SB-C18 column（4.6×150 mm2，5 μm） was used with sulfate acid as the mobile phase at a concentration of 0.005 mol/L. The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wave length was 210 nm.The temperature of the column was 35 ℃ and the sample amount was 20 μL.[Results]There was a good linear relationship between the concentration of lactic acid within 1～12 mg/mL and the peak area（R2=0.999 8）.The average recovery rate was 99.36%（RSD=0.066%）.The lowest detection limit was 0.009 mg/mL.[Conclusion]This method could be accurate，simple，quick and suitable for the determination of lactic acid in Chinese strong aromatic spirits.

Key words Chinese strong aromatic spirits；lactic acid；content determination；HPLC

酸类物质是白酒中重要的呈香呈味物质，在白酒微量芳香成分中占很大比例，尤其对浓香型白酒的口感影响较大，同时酸类也是形成酯类的前体物质，有机酸在白酒中含量的高低直接影响酒质的好坏。乳酸在浓香型白酒酸类物质中占有相当大的比重，因此对乳酸进行定量分析对白酒的勾兑以及生产工艺的控制都有十分重要的意义[1-3]。目前，白酒中乙酸、丙酸、丁酸、己酸等有机酸可以利用气相色谱仪分析，但是由于乳酸在FID上没有响应，因此在气相色谱仪上直接进样不能分析白酒中的乳酸。利用高效液相色谱仪直接进样，可快速、准确地分析出白酒中乳酸的含量，同时弥补了气相色谱仪不能直接分析乳酸的缺点[4]。

1 材料与方法

1.1 试验材料

52°赊店老酒元青花：购于当地超市；乳酸标准品：购于Sigma公司；自制超纯水；H2SO4（分析纯）开封开化有限公司试剂厂。

1.2 仪器与设备

L-7400日本日立公司；UV-VIS检测器；Agilent SB-C18柱（4.6×150 mm2，5 μm）；自动进样器；化学工作站；微孔滤膜（0.45 μm，25 mm）。

1.3 试验方法

1.3.1 色谱条件。柱温35 ℃。流动相：0.005 mol/L H2SO4溶液。使用前用0.45 μm的微孔滤膜过滤。流速1.0 mL/min，检测波长210 nm，进样量20 μL[5]。

1.3.2 标准曲线的制作。准确称取一定量的乳酸标准，用流动相溶解并定容于10 mL容量瓶中，配成乳酸标准液，然后进行稀释，分别配成1、2、3、6、9、12 mg/mL的标准溶液。上机前以0.45 μm的微孔滤膜过滤。

1.3.3 精密度试验。取乳酸标准品溶液，连续进样5次，记录色谱图，以主成分的峰面积计算RSD。

1.3.4 重复性试验。取同批酒样，连续取6份，测定乳酸的含量。

1.3.5 回收率试验。分别向已知乳酸浓度的酒样中加入高、中、低3种浓度的乳酸标准品溶液，分别取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图[6]。

2 结果与分析

2.1 乳酸色谱测定分析

2.2 线性关系

以乳酸标准品浓度（X，g/L）为横坐标，以峰面积（Y）为纵坐标，计算得回归方程为：

Y=532 942X-480 310（R2=0.999 8）。表明乳酸在1～12 mg/mL的范围内浓度与峰面积呈良好线性关系。

2.3 精密度试验结果

2.4 重复性试验结果

取同批酒样，连续取6份，测定乳酸的含量。结果分别为0.138%、0.140%、0.141%、0.139%、0.137%、0.143%，平均含量为0.140%，RSD为1.5%。

2.5 回收率的测定

为了考察测定结果的准确性，进行了回收率的测定，结果见表2。可以看出，平均回收率为99.36%，RSD为0.066%。回收率在99.30%～99.43%之间，RSD小于2%，说明该方法测定结果比较可靠。

2.6 最低检出限的测定

用乳酸标准溶液进行逐步稀释后，进行HPLC分析，以3倍信噪比计算最低检出限为0.009 mg/mL。

3 结论与讨论

高效液相色谱仪法检测浓香型白酒中乳酸的含量，速度快，检测样品浓度范围宽，精密度和准确度都很高，高效液相色谱仪和气相色谱仪相结合可以对白酒中有机酸含量进行全面分析，对科学指导白酒生产有重要意义。

4 参考文献

[1] 原小寓，于泓，董影杰，等.白酒中乳酸的离子排斥色谱-直接电导检测分析[J].食品科学，2011，32（12）：188-190.

[2] 李维青.浓香型白酒与乳酸菌、乳酸、乳酸乙酯[J].酿酒，2010，37（3）：90-93.

[3] 镇达，姚惟琪，钱志伟，等.浓香型白酒发酵中乳酸含量动态变化与相关微生物研究[J].中国酿造，2009，12（12）：32-34.

[4] 冯向东.高效液相色谱法测定白酒中乳酸和乙酸含量[J].酿酒科技，2009，5（5）：115-116.

[5] 郑志，姜绍通，潘丽军.EDTA定钙法测定发酵液中乳酸含量的探讨[J].分析检验，2003，24（3）：102-105.

[6] 王柳，吕嘉枥，沈文.HPLC法分析酸奶发酵过程中的有机酸[J].食品工业，2014，35（4）：197-200.