病理组织免疫组化技术初讨

【摘要】近年来，在对肿瘤进行诊断、分类以及预后等方面，病理组织免疫组化技术得到了较为广泛的应用，该方式对提升医学诊疗的准确性和有效性具有积极效果。本文主要将我院在病理组织免疫组化检测技术上的一些经验与大家共同分享，以期积极推进其合理应用。

【关键词】病理诊断 免疫组化 分析研究

【中图分类号】R36

【文献标识码】A

【文章编号】2095-6851（2014）04-0587-01

近年来，病理免疫组化技术得到了越来越广泛的应用，该方法可以极大地提高临床治疗效果，对于促进患者尽快康复具有积极意义。总体来说，该方式是目前组织标本制作方面比较理想的一种方式[1]。免疫组化作为一个综合性的操作技术，具有较多的反应步骤和较为复杂的影响因素，在进行操作时，要求技术人员充分按照规程进行，要不断加强全程控制。我院积极进行了实践，取得了一定的经验。具体情况如下。

1 免疫组化操作过程

1.1 固定标本 固定标本的基本作用，就是确保组织细胞本身形态完整，防止其发生负面变化。这一步是进行病理诊断的基础，对诊断结果的准确性和免疫组化的有效性均具有极为重要的影响。具体来说，要注意以下几个方面的因素：①在标本脱离本体后要立即进行固定，时间控制在15分钟以内。固定液采用比例为10%的中尔马林，其用量必须控制在标本的5-10倍。②要把握好标本的固定时间。手术离体标本固定时间一般为12-24h，最大限度为72h。研究表明，如果标本固定时间超过1周，将导致组织细胞抗原决定簇被覆盖，从而无法进行检测。③要注意准确把握固定液的种类以及浓度。进行免疫组化，一般采用浓度为10%的中性甲醛。固定液的浓度要保持一定的度，过高或者过低，都会对组织造成一定的影响，导致组织的有效成分丢失挥着无法实现准确的背景着色等，对最终结果造成不良影响。④在进行标本固定时要正确处理。比如，在固定淋巴组织时，要切开包膜，否则将会对固定液的渗透造成不良影响。有些大标本在进行固定时没有切开，将导致固定不均匀，从而影响染色效果。

1.2 切片、烤片与脱蜡 ①确保切片质量。有价值的切片不仅要薄，而且要完整。要确保将病变组织准确完整地切出来，才可以在染色的时候做到有的放矢。一般情况下，切片厚度大约为3-4um。②确保切片皱褶平整。如果切片边缘位置发生卷曲，则将导致试剂无法完全冲洗，每各阶段的试剂均可能在不平整位置残留，最后在显色时，这些地方着色效果就会受到严重影响，无法准确进行判断。③保证清洁。要确保所使用的水源一级器具均达到清洁要求，防止对切片造成的污染，影响最终效果。④控制好温度。烤片温度要适当，过低则无法实现效果，容易造成脱片，过高则对效果造成严重影响，使抗原丢失。一般维持65℃烘烤1小时就可以开始染色。⑤妥善脱蜡。脱蜡要把握好分寸，如果不彻底，蜡膜就将阻止抗体进入组织，影响最终效果。可以采用三级松节油，每级脱蜡8分钟，效果比较理想。

1.3 减少或清除非特异性染色 如果组织中非抗原抗体反应出现阳性染色，则属于非特异性背景染色。发生这一情况的主要原因是蛋白吸附在高电荷的胶原和结缔组织上。这种情况下，可应用0.3%的双氧水封闭。0.3%的双氧水作用比较缓和，不会影响染色以及抗原。

1.4 抗原修复 修复方法主要是加热。具体的工具包括高压锅、微波炉等。通过加热，对氢键进行修复，从而使组织中的抗原决定簇显示出来。高压锅热修复应用较多：先在锅中加入0.01M，pH6.0的柠酸盐缓冲液共计2000ml，加热直到沸腾，再放入切片，盖上并加减压阀。保持火源，在减压阀冒汽2分钟后熄火、冷却。再将切片取出进行下一步工作。

1.5 一抗的选择 大多数科室都使用的即用型抗体，值得注意的是不同公司的一抗作用是不一样的，就是同一家公司的抗体，也是有些效果好，有些效果差。这就需要多选择几家公司进行比较，择优使用。使用浓缩型的抗体的时候，在使用前，需要进行不同浓度配比实验，找到最佳浓度配比后才进行配置试剂。使用一抗后，我科建议切片在4摄氏度的冰箱内过夜。

1.6 显色 DAB显色液应当在使用之前进行配置，时间控制在30分钟之内。如果显色液发生棕色沉淀，则表明其已经失效。在对显色进行观察时，阳性部位较多的组织显色极为迅速，1-3分钟就会显示棕色，此时立即终止。阳性部位稀少的组织，则要借助显微镜进行观察，时间控制在10-15分钟。

1.7 复染 衬托免疫组化的阳性染色，使组织结构清晰易于观察。

2 免疫组化质量控制

2.1 保证染色切片质量 切片质量是影响临床判断的一个重要因素。在进行染色切片时，需要医生和技师的相互配合。医生要正确进行组织选取和对照设置，准确地对结果进行分析和进行技术指导；技术人员则要按照相应规范进行操作，确保其检测的精准度。

2.2 提高质量控制水平[2]在进行实验室操作时，必须按照既定的技术标准和操作流程严格执行。在进行固定时，要保证烤片时间和适当温度，要防止出现对抗原决定簇的破坏。试剂浓度要进行严格控制。为提高质量控制效果，要同时设立阳性、阴性以及空白对照。要确保抗原修复的一致性，准确控制好温度和时间以及修复液的酸碱度，同时要对抗体的阳性或者阴性进行准确判定。

3 讨论

病理免疫组化技术的用途日益广泛，这一方式可以极大地提高肿瘤诊断的准确率。在对患者进行诊疗时，还可以通过抗病毒、细菌、真菌以及寄生虫抗原的特异性抗体进行免疫组化染色，对疾病进行准确诊断[3]。在报告结果时，不能只是局限于解释结果，还要兼顾抗体特性和组织性质，并排除干扰因素[4]。在具体的操作中，由于技术原因，该方式还存在着一定的局限性。要实现最佳的效果，需要准确诊断和合理解释同时实现。因此，医生和技术人员在具体实践过程中，一方面要加强配合，另一方面要严格执行相应规范制度，尽量避免和缩小由于局限性导致的误差，增加诊断准确率。

参考文献

[1]张哲学.临床诊断中免疫组化技术的应用研究[J].中国民族民间医药，2011，12（6）：99-100.

[2]张雪昊.肿瘤诊断中免疫组化的临床意义[J].实用肿瘤学杂志，2011，11（9）：159-160.

[3]陈文.免疫组化在病理诊断中的应用分析[J].中国实用医学杂志，2011，9（5）：98.

[4]张平.对病理诊断中免疫组化技术应用的分析[J].中外医疗，2011，9（6）：68-69.