浅谈延长液相色谱柱使用寿命的方法

摘要：本文从液相色谱柱的使用和保养两个方面展开讨论，以期达到延长色谱柱的使用寿命。

关键词：色谱柱 寿命 保养

在用液相色谱法开展检验工作时，由于检验样品中经常会含有能够吸附在色谱柱的固定相上不易洗脱的化合物，长时间使用会出现柱效降低、分离效果差、色谱柱压力增加等现象，其中许多问题在使用中注意是可以避免或减轻的，因此良好色谱实验习惯和经常对色谱柱进行清洗或保养显得尤为重要。

一、色谱柱的使用及操作

良好地实验习惯可保证色谱柱的各项指标相对保持稳定和较大程度的延长色谱柱的使用寿命，故检测人员应养成良好的色谱实验习惯。

⑴检测人员在使用新色谱仪或更换新色谱柱时，应先仔细看其使用说明并在使用过程中严格按说明操作。⑵测柱效，保留在新色谱柱上测得的色谱图，并记录流动相、色谱柱、泵压力、使用条件等相关信息。⑶根据色谱柱使用频率定期检测柱效，与新色谱柱的色谱图比对，发现柱效、分离效果降低的情况，应及时对色谱柱清洗或冲洗。⑷日常工作中严格控制样品有机杂质含量、缓冲盐的pH值和浓度，防止蛋白质等大分子颗粒堵塞柱头、污染填料或流动相破坏，导致柱床层堵塞。⑸观察到色谱柱或色谱仪系统压力变化异常、温度变化异常、或在流动相转换时出现异常，要及时要分析异常出现原因并认真解决。

二、色谱柱的保养方法

即便是检测人员有良好的色谱实验习惯，色谱柱在长时间使用后或多次进样后显示出柱效降低时，仍有必要采用适当的流动相对色谱柱进行处理，冲洗除去吸附在固定相上的污染物和样品残余物。

1、色谱柱从系统上取下，反向连接到输液泵上。色谱柱出口不要连接到检测器上，以免污染检测器流通池。用85%的甲醇以0.5ml/min的流速冲洗4小时。在反向冲洗色谱柱之前应与色谱柱生产商确认，能否反向冲洗流动相。冲洗溶剂的选择要考虑所分析的样品和使用的流动相条件，一般清洗流动相强度应该比流动相更强，但是条件应该尽可能温和。

2、如色谱柱填料污染，应将柱头污染填料挖出更换，用同样规格的新填料精心修补并更换新筛板，然后用85%的甲醇流动相冲洗4小时，再采用异丙醇溶剂，0.5mL/min 流速下，冲洗色谱柱4 小时，最后用二氯甲烷溶剂，在0.5mL/min 流速下在冲洗色谱柱30 分钟，换用异丙醇冲洗色谱柱2 个小时，色谱柱性能会较再生前有极大的差别。

3、也可采用50%甲醇和50%的氯仿冲洗2小时，再用100%的乙酸乙酯0.5ml/min的流速冲洗2小时，最后用100%甲醇0.5ml/min的流速冲洗4小时。

另外，预柱（即保护住）也是保护色谱柱的一种很好的方法。这种保护住，柱长3.9×20mm，采用可换柱芯设计，提供各种填料可适应任何色谱柱，可将预柱连接在色谱柱前端，过滤流动相中大颗粒杂质，防止色谱柱堵塞，也起到保护色谱柱的作用。

要注意的是，在清洗色谱柱时，最好用与流动相组成相同的溶剂，如果使用其他的溶剂要考虑溶剂间的互溶性，不能使用强酸和强碱冲洗。