形态对宫腔内人工授精妊娠率的影响

[摘要] 目的 探讨正常形态比率对宫腔内人工授精（IUI）临床妊娠率的影响。 方法 回顾分析328个周期宫腔内人工授精临床资料，根据男方形态学检查结果分为三组：正常形态百分率≥4%、2%～

[关键词] 形态；宫腔内人工授精；妊娠率

[中图分类号] R394.8 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2014）18-26-03

宫腔内人工授精（IUI）已被广泛应用于不育症的临床治疗。男性不育在进行宫腔内人工授精技术治疗时，主要是根据中浓度、前向运动百分比来评价，即男方因素主要是轻度少、弱症。但是在自然授精过程中通过优胜劣汰，必须有足够数量形态正常且活力较好的最终才能与卵子结合[1]。以往的研究主要是关注了处理后前向运动的数量与IUI结局的关系[2-4]，而关于形态学与IUI妊娠结局的关系研究较少。因此本研究对328个IUI治疗周期中形态检查结果与治疗结局进行分析，旨在探讨形态学对IUI成功率的影响，研究形态分析在辅助生殖中的预测价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2013年1月～2014年1月在本科室行夫精

人工授精的夫妇165对共328周期，患者不孕年限>1年；女方无全身性疾病及传染病；子宫输卵管造影或者宫腔及腹腔镜检查至少一侧输卵管通畅；所有患者均符合卫生部颁布的人工授精适应证的指征。其中，女方平均年龄为（32.7±3.9）岁，男方平均年龄为（34.4±5.6）岁。

按照第5版《WHO人类检查与处理实验室手册》[5]（以下简称第5版《WHO》）的标准对男方进行检查，根据男方形态学检查的结果分为三组：正常形态百分率≥4%、2%～

1.2 方法

1.2.1 形态学检验 待液化后，将滴于洁净载玻片上，推片，自然风干后采用Diff-Quik快速染色法染色。在光学显微镜油镜1000倍下每片读取200个，按第5版《WHO》严格标

准法进行判别，计数正常形态及畸形，只有头和尾都正常的才认为是正常的，缺陷的类型包括：头部缺陷、颈部和中段缺陷、主段缺陷、过量残留胞浆。

1.2.2 根据不同病因利用自然周期或促排卵周期进行IUI B超监测卵泡直径结合血E2、尿LH测定确定诱发排卵时机，肌注HCG 5000～10000IU后24～36h行IUI。

1.2.3 收集及处理方法 男方禁欲3～7d，法采集于广口无菌无毒容器中，采用密度梯度离心法分离，将液化后充分混匀的加于平衡好的90%、45% SpermGrad（瑞典Vitrolife公司）上层，300g离心20min，移去上层的精浆和分离液，将锥形管底层的团混匀，移至平衡好的SpermRinse中，混匀后300g离心5min，弃上清，视底层的多少留取0.3～0.6mL培养液，将混匀，记录处理前后浓度、活力、前向运动比例。活力分级参照《WHO》第5版实验室标准。

1.2.4 IUI方法 将悬液注入宫腔，抬高臀部休息30min，术后用黄体酮支持黄体。

1.3 临床妊娠的判定

IUI后17d，通过尿妊娠试验或血β-HCG检测确定是否妊娠。IUI后5周复查B超，检测到孕囊、卵黄囊及心脏搏动者确定为临床妊娠。

1.4 统计学处理

用SPSS20.0统计软件进行分析，计量资料比较采用单因素方差分析，计数资料的比较采用x2检验，P

2 结果

2.1 处理前后参数及回收率比较

处理前浓度、活力及前向运动总数各组间比较无显著性差异，处理后浓度、活力及前向运动总数各组间比较有显著性差异。各组间回收率有显著性差异。见表1。

2.2 IUI妊娠结局

各组间临床妊娠率有显著性差异（x2=6.664，P=0.036）。见表2。

表2 各组临床妊娠率比较

组别 周期数 临床妊娠数 临床妊娠率（%）

≥4%

2%～

84

39 38

15

1 19.5

17.9

2.6

3 讨论

目前，不孕不育已成为全球突出的社会问题之一，在不孕夫妇中，男方因素所占比例为25%～40%[6]。形态分析在男性不育症的诊断和治疗中发挥重要的作用。2010年WHO出版了第5版《世界卫生组织人类检查与处理实验室手册》，新版手册修订最明显的内容之一是形态学的判读标准和正常参考值。按照新版手册，对正常形态的判定更为严格，形态的正常参考值仅为≥4%。所以按第5版《WHO》手册的标准，形态对辅助助孕结局的预测价值是很值得探讨的问题。

我们根据正常形态比例分组比较发现，虽然正常形态比例不同各组间分离前浓度、活力及前向运动总数并无差别，但分离后在浓度、活力和前向运动总数，各组间比较差异有显著性。统计结果也显示，各组间回收率有显著性差异，形态与回收率呈正相关。密度梯度离心法可以有效回收活力好、形态正常的[7]，我们采用的SpermGrad? 90%～45%两步梯度法，可以将外部紧密包裹DNA的成熟离心达到离心管底部，而其他类型的细胞包括未成熟和死精会在90%或45%的液表面上终止沉淀。我们的统计结果也符合这一原理，畸形虽然有时候活力正常，但因其存在结构上的缺陷或者发育不成熟，所以无法到达离心管底部。畸形率越高，其回收率就会越低，这也解释了为什么有时候密度与活力都不错的处理后回收并不理想的情况。

采用ART治疗男性不育，应该在客观评估男性生育能力的基础上进行。部分学者认为形态对预测IUI的妊娠率有意义[8-10]，当正常形态百分率

本研究显示，形态可以作为预测IUI治疗结局的一种参考指标，轻、中度畸形症患者可以选择IUI作为治疗手段，但是助孕方式的选择不能只根据单一因素来决定，在条件允许的情况下还可参考DNA损伤测定、与透明带结合能力等其他影响因素[11-12]。形态对IUI治疗结局的影响仍需大样本的研究来进一步证实。

[参考文献]

[1] Dong FL，Sun YP，Su YC，et al.Relationship between processed total motile sperm count of husband or donor semen and pregnancy outcome following intrauterine insemination[J].Syst Biol Reprod Med，2011，57：251-255.

[2] 孙源，李冰，冯健怀，等.处理后活动总数对宫腔内人工授精妊娠率的影响[J].生殖医学杂志，2011，31（4）：246-249.

[3] 张科，范立青，刘薇，等.活动总数、形态与宫腔内人工授精妊娠率的关系[J].中国现代医学杂志，2011，21（19）：2254-2257.

[4] 苏宁，王维，何燕，等.参数对宫腔内人工授精妊娠率的影响[J].国际检验医学杂志，2013，34（23）：3154-3155，3157.

[5] 谷翊群译.世界卫生组织人类检查与处理实验室手册[M].第5版.北京：人民卫生出版社，2011.

[6] Isidori AM，Pozza C，Gianfrilli D，et al.Medical treatment to improve sperm quality[J].Reprod BioMed Online，2006，12（6）：704-714.

[7] 李雪梅，朱文杰，周永红，等.密度梯度离心法分离在宫腔内人工授精中的应用[J].实用医学杂志，2009，25（14）：2288-2289.

[8] Badawy A，Elnashar A，Eltotongy M，et al.Effect of sperm morphology and number on success of intrauterine insemination [J]. Fertil Steril，2009，91（3）：777-781.

[9] Willem O，Nathalie D，Annelies T，et al.Semen quality and prediction of IUI success in male subfertility： a systematic review[J].Reprod BioM Online，2014，28：300-309.

[10] Wainer R，Albert M，Dorion A，et al.Influence of the number of motile spermatozoa inseminated and of their morphology on the success of intrauterine insemination[J].Hum Reprod，2004，19（9）：2060-2065.

[11] 刘德一， Gordon Baker HW.功能检测与男性不育诊治的新进展[J].中华男科学杂志，2007，13（2）：99-109.

[12] Nallella KP，Sharma RK，AzizN，et al.Significance of sperm characteristic in the evaluation of male infertility[J].Fertil Steril，2008，85（3）：629-634.

（收稿日期：2014-06-22）