形态对体外受精—胚胎移植治疗结局的影响

时间:2022-06-12 06:49:03

【摘要】 目的:探讨正常形态百分率对体外受精-胚胎移植( IVF-ET)治疗结局的影响。方法:回顾分析于本中心接受治疗的238个IVF-ET周期,根据WHO推荐的Diff-Quik染色方法及评价标准进行形态学分析,共分为3组:A组:5%5%时,形态对常规IVF的治疗结局没有影响。

【关键词】 体外受精-胚胎移植; 形态; 临床结局

研究显示,不孕不育患者呈逐年上升的趋势,而男方因素占不孕症病因的比例约为25%~40%[1],因此正确评估男性不育患者的生育力十分重要。分析是评价男性生育力最客观和最直接的检测方法,而形态能够从很大程度上反映功能,是指导临床诊断及治疗方案的一项非常重要的参数[2],但由于染色方法及评判标准方面存在的差异,形态学分析对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的预测价值始终存在争议[3,4]。为了更深入了解正常形态百分率对常规体外受精治疗结局的影响,本研究采用《WHO人类及-宫颈黏液相互作用实验室检验手册》第4版[5]推荐的形态学分类标准,对在本中心接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的238例患者的男方进行严格的形态学评估,回顾性分析形态与IVF-ET结局之间的关系。

1资料与方法

1.1研究对象

选择2009年3月至2011年12月在我中心接受IVF-ET治疗的不孕不育患者238例,不孕病因主要为女方输卵管因素或男方少、弱、畸症,其中原发不孕101例,继发不孕137例。女方平均年龄(32.9±4.2)岁,不育年限(4.3±2.9)年,男方平均年龄(34.4±5.6)岁。共完成238个取卵周期,217个移植周期。

1.2方法

1.2.1主要试剂①形态学检查:Diff-Quik快速染色法试剂盒购自深圳华康生物医学工程有限公司。②体外受精和胚胎培养:ASP,MOPS,G-IVF,G1,G2,HSA-solution及Sperm Grad等培养液均为瑞典Vitrolife公司产品。

1.2.2分析男方禁欲2~7d,以法取精于洁净的专用取精杯中,待其液化后按照《WHO人类及-宫颈黏液相互作用实验室检验手册》第4版[5]标准进行常规分析及形态学分析。形态学分析采用Diff-Quik试剂进行染色,100倍油镜下观察不少于200个并进行形态评估,分别记录正常形态、头部畸形、颈部及中段畸形和尾部畸形的个数,最后计算出正常形态占全部计数的百分率。所有标本的分析及形态学分析均由1名技术人员人工操作完成。

1.2.3控制性促排卵超排卵方法按照本中心常规方案,当有2个以上优势卵泡直径达到20mm时,注射绒毛膜促性腺激素(hCG)250μg,36h后经阴道B超引导下取卵,获得的卵子置于37℃、6%CO2培养箱内待授精。

1.2.4处理、体外受精-胚胎移植男方取精后1h之内,采用密度梯度离心及上游法处理,处理后置于CO2培养箱中待用。取卵后4~6h,向装有卵子的四孔皿中加入,使的最终密度为10万条a+b级/卵子,置37℃、6%CO2培养箱中进行过夜培养。授精后 16~20h剥除颗粒细胞并观察卵子受精情况。取卵后48h、72h观察卵裂及胚胎发育情况,并进行卵裂期胚胎评级,选择评级较高的胚胎在B超引导下进行胚胎移植。本中心优质胚胎评判标准为:正常受精(2PN)来源,第2天为3~5细胞,第3天为7~9细胞,碎片≤20%,卵裂球大致均一且无多核、空泡等现象。移植后14d验尿和血hCG为阳性,则确诊为生化妊娠;移植后4周超声见妊娠囊则确诊为临床妊娠。

1.2.5分组按正常形态百分率将结果分为3组,A组:5%

1.3统计学分析

结果用SPSS统计软件包进行分析,计量资料以±s表示,采用单因素方差分析。计数资料采用χ2检验,P

2结果

2.1各组基本资料统计结果比较

在238例取卵周期中,A组、B组、C组的正常形态百分率分别平均为 (7.8±1.4)%、 (12.3±1.4)%和 (19.5±4.2)%,各组之间在女方年龄、不孕年限、男方年龄、女方基础FSH值、Gn天数、Gn总量、hCG日E2值、hCG日P值、内膜厚度、获卵总数、MⅡ卵数等结果比较均无显著性差异(P>0. 05),见表1。

3讨论

质量是IVF治疗成功的关键因素之一,而形态是反映质量及功能的重要参数之一[6]。研究发现,头部异常的畸形由于运动速度慢而无法到达输卵管壶腹部使卵子受精。当头部表面缺乏某种细胞表面蛋白时可能会造成顶体的异常,导致丧失与卵子透明带结合的能力,进而引发受精失败[7]。另外,体内高水平的活性氧也会促使质膜发生过氧化反应,导致形态及活力发生异常并影响受精[8]。目前有关形态的评定标准和它在体外受精中所起的作用一直存在争议[2,3,4],有研究[2,9,10]认为形态可对IVF结局起预测作用,但是也有不同的观点[4,11],认为形态与IVF结局没有相关性。为此,我们回顾性分析了在本中心接受IVF-ET治疗的238例患者,探讨形态是否会对IVF结局产生影响。

2010年,《世界卫生组织人类分析实验室技术手册》第5版[12]正式出版,但随之而来的是第5版手册中有关正常参考值,特别是形态学部分引发的巨大争议。有学者认为第5版手册推荐的活动力及形态学等参数的评估标准缺乏循证医学的支持[13]。第5版手册提出正常形态临界值为4%,Skakkebaek[14]认为以4%作为正常形态的参考值下限似乎太低,并对其如何在临床上指导患者的诊断及治疗提出了质疑。另外,Ariagno等[15]也表示对第5版手册(图谱)中一部分正常形态的评估结果持不同意见。因此,本研究仍采用《WHO人类及-宫颈黏液相互作用实验室检验手册》第4版[5]推荐的分析及形态学检测方法及评估标准,本研究的结果对临床仍有一定的指导意义。

国内外的研究[9,16]均显示:当正常形态百分率

本研究结果显示,当正常形态百分率>5%时,三组间的受精率、2PN受精率、多精受精率、2PN卵裂率、可移植胚胎率、优质胚胎率、着床率、妊娠率、流产率、多胎率等结果比较均无显著性差异(P>0. 05),尽管A组的妊娠率(40.0%)略低于B组(55.0%)和C组(56.5%),但亦无显著性差异,这与Keegan[4]等及Hotaling[11]等的研究结果一致,说明形态对IVF结局的预测价值是有限的。这也许和本研究的样本量小有关,我们还将扩大样本量继续研究。也有可能是经过密度梯度离心和上游的处理,一部分形态异常的被剔除掉了,得到了较好的临床结局。本研究中总体受精率和妊娠率分别是74.9%(2094/2795)和52.5%(114/217),说明正常形态百分率>5%且密度及活力达到常规IVF要求的患者选择常规IVF治疗是可行的,并且能够得到满意的结局。当然,也有少数患者会发生受精失败,可能的原因之一是其的形态正常但功能异常,导致与卵子透明带结合的能力降低或缺失,当这类患者再次行助孕技术时,选择卵胞浆内单注射(ICSI)治疗往往能获得满意的受精率和妊娠结局。因此,我们还需进一步研究的功能,因为形态正常并不一定说明功能正常[18,19]。

综上所述,本研究的初步结果显示:当正常形态百分率>5%时,形态对常规IVF治疗结局的预测价值有限,行常规IVF治疗能够获得满意的受精率及妊娠率。但是我们仍然认为,正常形态百分率结合常规的其它参数仍能够很好的评估男性生育力,并为体外受精方式的选择提供可靠的依据。然而,形态分析结果可能受到一系列因素的影响,由于染色方法、评判标准以及技术人员的主观性等均可造成结果的差异,该技术有待进一步完善,同时,实验室内部及各实验室之间可以通过建立并不断完善内部及外部质量控制体系来减小形态分析过程中的系统误差及人为因素的干扰,以确保形态分析结果的准确可靠。

参考文献

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