术后化疗的Ⅱ期结肠癌患者血清Smad4的表达及临床意义

【摘要】 目的 研究Ⅱ期结肠癌患者术后行辅助化疗前后血清Smad4表达水平及临床意义。方法 110例Ⅱ期结肠癌术后辅助化疗的患者， 根据有无复况分为复发组（37例）和未复发组（73例）；应用酶联免疫吸附剂测定法（ELISA）对其辅助化疗前后血清Smad4水平进行检测。分析血清Smad4水平与患者无病生存时间的关系。结果 未复发组化疗后血清Smad4水平与化疗前相比明显升高， 差异有统计学意义（P

【关键词】 血清Smad4；结肠癌 ；化疗；酶联免疫吸附剂测定法

结肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤， 其易复发和转移的特性严重威胁着人类的健康和生命[1]。Ⅱ期结肠癌最为多见， 手术治疗是其公认的治疗手段， 而辅助化疗也越来越普遍， 但是辅助化疗的效果却存在争议。因此， 寻找能早期预测化疗疗效的分子生物学指标非常重要。Smad4基因是转化生长因子-β（TGF-β） 信号通路的重要级联分子， 在信号转导、调节靶基因的转录过程中发挥着重要的作用[2]。作者之前的研究表明Smad4在结肠癌的发生发展中起着非常重要的作用， 参与了肿瘤新生淋巴管的生成， 促进了肿瘤的转移[3]。本研究进一步探讨血清Smad4水平变化在Ⅱ期结肠癌患者术后化疗中的临床意义。现报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取沧州市中心医院 2013年5月～2015年8月经病理和临床指标诊断为Ⅱ期结肠癌患者110例， 平均年龄（68±10）岁， 平均随访时间为60个月。其中未复发者（未复发组）73例， 复发者（复发组）37例。所有患者均行结肠癌根治术， 术后行静脉化疗， 化疗方案：四氢叶酸200 mg/m2， 5-氟尿嘧啶425 mg/m2连续5 d， 28 d为1个周期， 共化疗6周期。所有患者术前均未接受化疗、放疗及免疫治疗等抗肿瘤治疗。

两组患者一般资料比较， 差异无统计学意义（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 血清Smad4的检测方法

1. 2. 1 建立标准曲线 利用棋盘滴定法确定抗原、抗体最适工作浓度。采用间接ELlSA法检测不同浓度标准品的吸光度值， 以浓度为横坐标， 以吸光度为纵坐标， 建立标准曲线。

1. 2. 2 血清Smad4检测 早晨空腹抽取静脉血3 ml 25℃条件下静置1 h， 10000 r/min高速离心10 min， 取上清血浆1 ml， 加入1.5 ml试管中， 置入-65℃冰箱保存。待所有血液样品处理完之后统一采用ELISA检测Smad4蛋白浓度， 实验严格按照Smad4蛋白（ELISA）试剂盒说明书操作。

1. 3 随访 所有患者均采用电话随访、门诊复查和住院等相结合的随访方式。

1. 4 统计学方法 采用Curve Expert1.30曲线软件绘制标准曲线。采用SPSS20.0统计学软件进行数据统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P

2 结果

2. 1 两组患者化疗前血清Smad4水平变化比较 复发组化疗前血清Smad4水平为（36.5±8.7）pg/ml， 而未复发组中化疗前血清Smad4水平为（75.4±12.7）pg/ml， 两者相比差异有统计学意义（P

2. 2 两组患者化疗前后血清Smad4水平变化比较 复发组术化疗后Smad4水平为（40.2±11.5）pg/ml， 与化疗前Smad4水平相比差异无统计学意义（P>0.05）。而未复发组化疗后Smad4水平为（99.3±21.5）pg/ml， 显著高于于化疗前水平， 差异有统计学意义（P

2. 3 化疗前血清Smad4与患者无病生存时间的关系 患者化疗前血清Smad4的水平与其无病生存期呈正相关 （I=-2.03， P

3 讨论

结肠癌是最常见的恶性肿瘤之一， 严重威胁人类健康。多种治疗手段， 如手术治疗、化疗和靶向治疗， 使Ⅱ期结肠癌的治愈率已明显提高， 但化疗后仍有部分患者出现肿瘤的复发和转移[4]。因此， 寻找能早期预测化疗疗效的分子生物学指标非常重要。目前， Ⅱ期结肠癌患者的最主要化疗方案还是以5-氟尿嘧啶为基础的化疗。Smad蛋白被证实是TGF-β家族的下游信号蛋白， 在信号转导、调节靶基因的转录过程中发挥着重要的作用[5]。Smad4蛋白是其重要的成员之一， 其位于人染色体18q21， 是首先在胰腺癌中发现的新型抑癌基因[6]， 其所编码的Smad4蛋白是转化生长因子-β（TGF-β）信号通路的重要级联分子， 在信号转导、调节靶基因的转录过程中发挥着重要的作用[7]。国外多项研究报道， 在胰腺癌、乳腺癌、结肠癌、食管癌中， Smad4基因的缺失与失活可以增加肿瘤细胞的侵袭与转移能力， 从而导致肿瘤的转移复发[8]。Papageorgis等[2]经体外实验证实Smad4基因失活能与结肠癌细胞的化疗耐药有密切关系， Smad4可能在结肠癌的发生发展中发挥着重要的作用。因此， 本研究选取110例Ⅱ期结肠癌术后行以5-氟尿嘧啶为基础的辅助化疗的患者， 对其化疗前后的血清中Smad4水平进行检测， 探讨其在其化疗中的意义及其与无病生存时间的关系。

研究结果发现， 复发组化疗前血清中Smad4水平明显的低于未复发组（P

总之， 血清中Smad4的水平能预测Ⅱ期结肠癌患者术后对5-氟尿嘧啶为基础的辅助化疗的敏感性， 并与化疗后患者的无病生存时间呈负相关， Smad4在结肠癌的发生发展中发挥着抑制因子的作用。但是， 因为本研究样本量有限， 还待更大的临床样本来证实， 同时， 需要更多更深入的具体分子机制的研究。

参考文献

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[收稿日期：2015-09-02]