药品检验常用菌种的保存注意要点

【关键词】 实验菌种；定期检查；保存管理；复苏在生产、科研、医疗等领域的实践活动中， 人们获取了各种各样的实验菌种， 其中不乏宝贵和实用者。微生物容易变异， 世代时间相应较短， 在传代过程中有很大几率死亡或者变异[1]。所以实验菌种保存和管理工作极为重要， 是微生物育种以及微生物学研究的重要构成部分。

1 实验菌种保存的目的与意义

1. 1 目的 对各类利用价值不等的微生物菌种进行广泛收集， 并通过合理保存方式确保其在传代过程中或保存期间不至微弱、衰退、变异或者死亡， 从而良好保持自身初始生物学特性， 最终可良好应用于交换、检验、研究和使用， 即为保存实验菌种的目的。

1. 2 意义 在药品检验工作中， 实验菌种的有效保存是其中较为关键的一项技术。药品检验中有关控制菌检查所选取的阳性对照菌应给予妥善保管， 避免因多次传代而导致菌株死亡， 或其生物学典型特征由此发生改变。此外， 在检验药品微生物时对于可疑致病菌应利用合理方法加以保存， 以利于进一步鉴定， 最大化保证用药安全。

2 实验菌种保存处理与要点

在保存实验菌种时， 应确保微生物自身代谢保持在相对静止或最不活跃状态， 由此可实现在一定时间段内使菌株在保持生活能力的同时又不出现变异。在影响微生物自身代谢能力的诸多因素中， 隔绝空气、保持干燥和低温是其重要因素。因而保存实验菌株的诸多方法均遵循上述三种因素而设计[2]。

2. 1 斜面低温保存：在固体斜面培养基中接种实验菌种， 经充分生长后， 取油纸包扎好棉塞部分， 并于2～8℃环境中保存。根据微生物不同种类， 其保藏时间也各有不同， 有芽孢的细菌、放线菌以及霉菌等保存时间通常为2～4个月， 1次移种；酵母菌保存时间则为2个月。细菌移种应保持在每月1次。斜面低温保存多见于工厂以及实验室菌种室， 属于常用保存法， 其便于操作、简单实用， 无需投入特殊设备， 并可对菌株进行实时检查， 确认其是否变异或死亡。但此法保存实验菌种有较大缺陷， 实验菌种容易发生变异。究其原因为培养基并不具备严格恒定的物理和化学特性， 微生物代谢会随着多次传代而发生改变， 导致微生物性状受到影响， 污染杂菌的几率较高所致[3]。

2. 2 液体石蜡保存 ①取三角烧瓶， 将液体石蜡装入后以棉塞封口， 外以牛皮纸包扎， 置于121.3℃环境下行30 min灭菌处理， 然后贮存于40℃温箱内， 蒸发掉水汽后备用。②在斜面培养基中取保存菌种进行培养， 进而获取健壮孢子或菌体。③将灭菌所用液体石蜡用灭菌吸管抽取， 并注入菌种已良好繁殖的斜面上， 注入量应保持不低于斜面顶端1 cm， 彻底将空气与菌种隔绝开来。④直立试管， 贮存于室温或者低温下。液体石蜡保存法效果较好且实用性较强。芽孢细菌、放线菌以及霉菌菌种保存期可延长至少2年， 期间菌种可保持活力不死；酵母菌保存期限则为1～2年， 通常来说无芽胞细菌保存期限也在1年左右；难以用常规保存方法处理的脑膜炎球菌在37℃恒温温箱内用此法也可保存3个月[4]。液体石蜡保存法简单易行， 无需增加特殊设备， 同时也不像斜面低温保存法那样经常移种。但此法在保存菌种时装置需保持直立， 占据较大空间， 不利于携带， 且取出培养移种后， 经火焰烧灼时接种环内培养物以及液体石蜡残留部分容易受热飞溅， 对此应给予重视。

2. 3 滤纸保存法 ①裁剪滤纸， 均分为0.5 cm×1.2 cm的条状， 取1～2张放入安瓿管内， 并以棉塞充填， 置于121.3℃环境下行30 min灭菌处理。②在斜面培养基中对需保存菌种加以培养， 确保其充分生长。③在灭菌培养试管或培养皿内滴入1～2 ml灭菌脱脂牛奶， 在牛乳内溶入数环菌苔， 混匀处理后制备为浓悬液。④将安瓿管中条状滤纸用灭菌镊子取出并在菌悬液内浸泡， 吸附饱和后放回安瓿管， 并以棉塞充填。⑤将安瓿管放入干燥器（吸水剂为五氧化二磷）， 将其中空气抽干。⑥在管内充塞入棉花， 熔封后于低温下保存。⑦取用菌种并实施复活培养时， 应用火焰加热瓿管口， 然后再加热区域滴冷水促使玻璃碎裂， 将口端玻璃敲掉， 开启安瓿管后将滤纸取出， 置于培养基内， 并在温箱内培养。此法可用于保存丝状真菌、酵母菌以及细菌， 其中细菌以及酵母菌保存时间可达2年， 少数丝状真菌保存时间则长达14～17年[5]。

2. 4 液氮冷冻保存法 ①取材质为硼硅盐酸玻璃的安瓿管， 规格为75 mm×10 mm， 或容积为1.2 mm；②在进行霉菌孢、酵母菌以及细菌等容易分散的菌种时应取棉塞充填安瓿管， 并置于121.3℃环境下行15 min灭菌处理；③取10%甘油蒸馏水， 将菌种加入制备为菌悬液， 装入安瓿管后熔封。④以1℃/min的速率降温， 将安瓿管逐渐冻结， 最终温度保持为-30℃， 然后将安瓿管置入液氮冷冻保藏器内。液态气氮内部温度为-196℃。

3 实验菌种保存期间的定期检查

在实验菌种保存和管理期间， 定期检查是其中一项最基本内容， 利用定期检查的开展可对菌种形态特征、存存活情况、生理生化特征正常与否以及保存技术是否有效予以直接考查。定期检查应对保存菌种干燥程度、外观以及真空度等保存状况进行观察。

4 小结

药品检验菌种在其保存以及管理过程中应严格遵循相关规范， 同时还应注意安全防护事项以及妥善的菌种处理措施， 只有在管理实验菌种中严格遵循实验操作规程， 菌种的安全以及有效性才可得到有效保证， 才能更好地服务于药品检验。

参考文献

[1] 李秋菲，党琳琳，张芹，等.微生物菌种的使用、保存和管理.中国药业， 2008，17（14）：10.

[2] 李家琪，章激，曹军华，等.药品卫生学检测中奶粉圆片菌种保存方法探讨.中国医院药学杂志， 2007，27（4）：556-558.

[3] 许少洪.基层细菌实验室菌种保存和使用方法的探讨.中国卫生检验杂志， 2008，18（4）：734.

[4] 李志明.一种沙门菌和志贺菌保存用培养基.中国卫生检验杂志， 2008，18（9）：1913.

[5] 孙燕萍，凌霞，彭浩，等.1份半固体培养基保存的模拟肛拭样品鉴定结果分析.现代预防医学， 2009，36（23）：4542-4543.