高效液相色谱法检测三聚氰胺分析方法的探索

摘要：本文通过高效液相色谱法从流动相的比例、流速、柱温、检测波长等方面探索了测定三聚氰胺的最佳检测条件。采用HPLC进行测定，色谱柱为：ZORBAX Eclipse XDB-C18（46×250 mm，5 ?m），流动相为：缓冲溶液（柠檬酸和辛烷磺酸钠的混合溶液）：乙腈的体积比为88：12，流速为：1.0 mL/min，柱温为：30 ℃，进样量为：20 μL，检测波长为：238 nm。在线性范围内0.8～80 μg/mL，得到线性回归方程Y=77.002X+8.0288，相关系数为：0.9999，最低检出限为：0.04 μg/mL。

关键词：高效液相色谱 三聚氰胺 线性 检出限

三聚氰胺（Melamine）（化学式：C3H6N6），俗称密胺、蛋白精，IUPAC命名为“1，3，5-三嗪-2，4，6-三氨基”，分子式为：是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，被用作化工原料。它是白色单斜晶体，几乎无味，微溶于水（3.1g/L常温），可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等，不溶于丙酮、醚类，对身体有害，不可用于食品加工或食品添加物。

1.3标准溶液和样品溶液的配制

1.3.1 标准溶液的配制

2、结果与讨论

2.1流动相比例的选择[2]

实验以柠檬酸和辛烷磺酸钠的混合溶液为缓冲溶液，调节缓冲溶液与乙腈的比例为80：20，85：15，89：11，88：12，90：10进行测定。结果表明，缓冲溶液与乙腈的比例为88：12时，三聚氰胺的出峰位置，峰形适宜且无其他杂峰干扰。三聚氰胺高效液相色谱图见图1。

2.2流速的选择

调节流速分别为1.0，0.8，0.5 mL/min，当流速降低时，保留时间延长，峰出现拖尾，因此为了提高分离效率，选用1.0 mL/min作为流动相的流速。

2.3柱温的选择

调节柱温分别为20，30，40 ℃，实验发现：柱温对保留时间和色谱峰的峰形没有特别大的影响，所以，选用接近室温的温度（30 ℃）为最佳检测温度。

2.4进样量的选择

调节进样量为10，15，20 μL。对于同一浓度的标准溶液，峰面积与进样量成正比，故增大进样量能增大峰面积，能增大最低检出限，但是进样量越大，色谱峰易拖尾，同时进样量也受仪器的限制，综合考虑，最佳进样量为20 ?L。

2.5检测波长的选择

将三聚氰胺溶于甲醇水溶液（V甲醇：V水=1：1），在紫外分光光度计于200-400 nm范围内进行扫描，结果显示，三聚氰胺在238 nm处有最大吸收，故选用238 nm为最佳检测波长。

2.6标准曲线与最低检测限

三聚氰胺的色谱峰面积（Y）对其质量浓度（X，μg/mL）进行线性回归，得到的线性回归方程为：Y=77.002X+8.0288，R=0.9999，线性范围为0.8～80 μg/mL，将浓度为0.8 μg/mL的标准溶液逐步稀释，得到三聚氰胺的最低检出限为0.04 μg/mL。三聚氰胺标准曲线见图2。

2.7重现性实验

按照上述优化后的色谱条件，将40 μg/mL的三聚氰胺标液连续进样6次，得到三聚氰胺的峰面积测定值的相对标准偏差（RSD）分别为0.06 %，保留时间的相对标准偏差（RSD）为0.42 %。

2.8加标回收率试验

准确称取同一种乳饮料（5次），同时添加已知量的三聚氰胺标液，按照GB/T 22388-2008进行样品处理，按照优化后的色谱条件进行色谱分析，计算加标回收率，样品测定的加标回收率为95.5-98.5 %。

3、结论

本文研究建立了高效液相色谱-紫外检测器检测分析三聚氰胺的方法，最佳检测条件为：流动相为：缓冲溶液（柠檬酸和辛烷磺酸钠的混合溶液）：乙腈的体积比为88：12，流速为：1.0 mL/min，柱温为：30 ℃，进样量为：20 μL，检测波长为：238 nm。该方法操作简单，准确性好，灵敏度较高，能满足实际应用的需要。

参考文献

[1]李建平等. 食品中三聚氰胺的固相萃取-高效液相色谱测定法. 环境与健康杂志， 2009， 26 （7）， 635-636.

[2]蒋宝秀. 浅析三聚氰胺检测与流动相的关系. 科技资讯， 2011， 18： 81