高效液相色谱法―荧光检测法测定人血浆中阿昔洛韦的浓度

【摘要】 目的 建立测定人血浆中阿昔洛韦浓度的高效液相色谱-荧光检测法。方法 色谱柱：伊利特C18（200mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.02mol・L-1高氯酸水溶液=8：92；流速：1.0mL・min-1；柱温：35℃；荧光检测：激发波长，280nm；发射波长，405nm；进样量：20μL。结果 血浆中内源性物质对阿昔洛韦的测定无干扰，阿昔洛韦的线性范围为0.1-10μg・mL-1（R=0.999），准确度为98.21-100.36%，日内、日间精密度均小于3.54%，绝对回收率为96.23%-98.76%。结论 该法特异性强，准确度高，可用于血浆中阿昔洛韦浓度的测定。

【关键词】 高效液相色谱；荧光检测法；阿昔洛韦；浓度

文章编号：1004-7484（2014）-02-1072-02

阿昔洛韦是临床上一种常用的核苷类抗病毒药，在体内以原形排出，肾功能障碍会影响阿昔洛韦的排泄，以致产生毒性反应。目前，该药主要用于器官移植病人中，而该类病人又极易患有肾功能衰竭，因此，对该药的血药浓度进行检测是非常有必要的[1]。本文就高效液相色谱法-荧光检测法测定血浆中阿昔洛韦的方法进行了研究，旨为该药的临床药学研究提供参考和依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC-10AT型高效液相色谱仪（日本岛津公司），RF-10AXL型荧光检测器（日本岛津公司，BS224S型万分之一电子天平（德国Sartorius公司），TGL16M低温高速离心机（长沙泰英仪器厂），XW-80A微型涡旋混合仪（上海沪西分析仪器厂有限公司）。

1.2 试药 阿昔洛韦对照品、喷昔洛韦对照品均由中国药品生物制品检定所提供，甲醇、高氯酸为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：伊利特C18（200mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.02mol・L-1高氯酸水溶液=8：92；流速：1.0mL・min-1；柱温：35℃；荧光检测：激发波长，280nm；发射波长，405nm；进样量：20μL。

2.2 贮备液的配制 阿昔洛韦贮备液的配制：称取阿昔洛韦对照品20.0mg，置100mL容量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得，4℃冰箱中密封保存，备用。

内标贮备液的配制：称取喷昔洛韦对照品20.0mg，置100mL容量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得，4℃冰箱中密封保存，临用前经纯化水稀释至5μg・mL-1。

2.3 血浆样品的处理 精密吸取血浆400μL，置1mL EP管中，加入内标溶液10μL，涡旋1min后，加入80μL20%的高氯酸，继续涡旋1min，12500rpm离心10min，取上清液20μL进样，分析，记录色谱图。

2.4 方法学考察

2.4.1 专属性 分别将阿昔洛韦、喷昔洛韦对照品溶液、按“2.3”项下处理得到的空白血浆（不加内标处理）及阿昔洛韦的血浆样品溶液，进样分析，记录色谱图，结果表明（见图1），阿昔洛韦和内标的保留时间分别约为7.0min和8.8min，峰型良好，血浆中的内源性物质对阿昔洛韦及内标的测定无干扰。

2.4.2 标准曲线及线性范围 取空白血浆，加入适量阿昔洛韦贮备液，分别得到浓度为10、5、2.5、1.0、0.5、0.25、0.1μg・mL-1的系列标准溶液，按“2.3”项下处理后，进样分析。以阿昔洛韦的浓度（X）为横坐标，阿昔洛韦与内标峰面积比值（Y）为纵坐标进行线性回归，结果Y=0.429X+2.146e-003（R=0.999），表明在0.1-10μg・mL-1浓度范围内，阿昔洛韦、内标峰面积比与阿昔洛韦的浓度间线性关系良好。

2.4.3 准确度与精密度 分别配制低、中、高浓度（0.25、1.0、8.0μg・mL-1）的阿昔洛韦血浆样品各5份，按“2.3”项下条件处理后，进样分析。由标准曲线计算药物浓度，以测得值除以理论值，计算准确度和日内RSD，连续测定3天，计算日间RSD。结果低、中、高浓度的平均准确度为98.21-100.36%，日内的RSD小于2.08%，日间的RSD小于3.54%。

2.4.4 回收率 分别配制低、中、高浓度（0.25、1.0、8.0μg・mL-1）的阿昔洛韦血浆样品各5份，按“2.3”项下处理；取阿昔洛韦对照品适量，分别配制成低、中、高浓度的阿昔洛韦溶液各5份，取上述溶液进样分析，记录峰面积，以前者峰面积比上后者峰面积，计算回收率。结果阿昔洛韦的绝对回收率为96.23%-98.76%。

3 讨 论

目前，测定人血浆中阿昔洛韦浓度的方法主要有紫外法和LC/MS法[2]等。但紫外法的杂质干扰较大，且灵敏度低，而LC/MS法的选择性虽好，灵敏度高，但其检测价格昂贵，因而也在一定程度上限制了其应用。本文建立的高效液相色谱-荧光检测法，简单易行，特异性强，杂质干扰少，准确度高，灵敏度好，适用于血浆中阿昔洛韦浓度的测定，可作为核苷类药物体内分析的一种手段，值得在临床药学中推广应用。

参考文献

[1] 孙丽红，董吉，缪丽燕.高效液相色谱-荧光检测法测定人血浆中阿昔洛韦的浓度[J].中国临床药理学杂志，2013，29（3）：219-221.

[2] 钟世敬，施爱明.高效液相串联质谱联用法测定人血浆中阿昔洛韦的浓度[J].抗感染药学，2008，5（4）：228-230.