化疗对晚期胃癌患者细胞免疫及调节T细胞的影响

【摘要】目的：探讨晚期胃癌患者化疗前后细胞免疫及调节T细胞（Tregs）的变化及其临床价值。方法 采用流式细胞术检测健康志愿者及晚期胃癌患者化疗前后外周血CD4+T、CD8+T细胞及调节T细胞的比例变化。结果 晚期胃癌患者化疗前外周血CD4+T细胞所占比例和CD4+T/CD8+T均较化疗后低，且二者均低于健康对照组（P

【关键词】免疫调节T细胞；胃癌；化疗；细胞免疫；

【Abstract】Objective To investigate the changes of cellular immune function and CD4+ CD25+ regulatory T cells （Tregs） in peripheral blood of patients with advanced gastric cancer before and after chemotherapy and their clinical implications. Methods The proportion of CD4+ CD25+ Tregs among CD4+ T lymphocytes and the proportion of CD4+ and CD8+ T cells of PBMC in peripheral blood of 32 patients with advanced gastric cancer was determined by flow cytometry before 1 day and 1 week after chemotherapy. Results Compared with control group， the levels of CD4+ T lymphocytes and CD4+/CD8+ T lymphocytes decreased in patients with advanced gastric cancer before and after chemotherapy， but the data after treatment was higher than before. The percentage of CD4+CD25+ T cells and Tregs among CD4+ T lymphocytes significantly changed after chemotherapy as compared with that before chemotherapy， the difference was significant between the patients and the healthy subjects. Conclusion chemotherapy can improve the immune function of patients with advanced gastric cancer.

【key words 】immunoregulatory cells ； gastric cancer； chemotherapy； cellular immunity

【中图分类号】R735.2 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2014）04-0004-01

胃癌是我国发病率较高的消化系统恶性肿瘤之一，病死率高；与其他恶性肿瘤一样，胃癌的发生与发展与肿瘤的免疫耐受相关，调节T细胞作为主要的免疫负向调节细胞促进肿瘤的免疫耐受，从而促进肿瘤的发生发展。化疗作为临床治疗胃癌的重要方法之一， 能否影响胃癌患者细胞免疫及调节T细胞，目前报道甚少。本研究从肿瘤免疫角度，初步探讨化疗对晚期胃癌患者调节T细胞及细胞免疫功能的影响，为胃癌治疗的疗效观察提供一定的免疫学依据。

1资料与方法

1.1一般资料

胃癌患者均为川北医学院附属医院2010年9月～2013年4

月就诊的经病理及临床确诊为晚期胃癌患者，共45例，其中男性29例，女性16例，年龄44～80岁，中位年龄59岁。病理组织学类型：状腺癌18例、管状腺癌11例、粘液腺癌9例、印戒细胞癌7例，组织分级：高分化18例，中分化16例，低分化11例。所有患者均无免疫相关性疾病，未使用抗肿瘤及免疫调节治疗。本研究中所有患者均统一采用PLF方案化疗（氟尿嘧啶+亚叶酸钙+奥沙利铂），化疗期间水化，止吐等常规药物辅助治疗。正常对照由我院体检中心提供的健康体检者20例，男性12例，女性8例，年龄22～65岁。分别设化疗前和化疗后为A组和B组，对照组为C组。

1.2 主要的试剂及设备

FITC标记鼠抗人CD4抗体、PE标记鼠抗人CD25抗体、PE-CY5标记的鼠抗人CD8抗体，FITC、PE及PE-CY5标记的鼠抗人IgG1同型对照抗体（均购自美国eBioscience公司）；流式细胞检测仪（P07900102，美国BD公司）。

1.3 实验方法

采用流式细胞技术。用EDTA-K2抗凝剂采血管收集胃癌患者化疗前前1天及化疗后1周和健康志愿者的静脉血3ml，取100μl当天行流式细胞学检测CD4+CD25high调节性T细胞占CD4+T细胞的比例、CD4+T淋巴细胞及CD8+T淋巴细胞占单个核淋巴细胞（PBMC）的比例。

1.4 统计学处理

计量资料均以X±s表示，采用SPSS 13.0统计软件分析处理数据（采用One-way ANOVA，其中两两比较用LSD或Dunnett's T3检验）。

2 结果：

2.1 胃癌患者外周血T细胞亚群变化

3 讨论

胃癌的发生、发展与遗传易感性、环境等诸多因素相关，机体的免疫功能状况在胃癌的促成中亦扮演了重要的角色。机体抗肿瘤免疫以细胞免疫为主， T淋巴细胞的免疫调控、监视作用对防止肿瘤的发生发展尤其重要。CD4+T/CD8+T细胞比值变化反映机体免疫状态的变化，其比值降低，宿主免疫功能低下致抗肿瘤作用减弱，有利于肿瘤的发生、发展。 我们发现，胃癌患者外周血CD4+T及CD4+T/C8+T比值均较正常人明显下降，提示胃癌患者细胞免疫功能降低，利于肿瘤的发生与进展。

引起胃癌患者细胞免疫功能低下原因很多，其中调节性T细胞（CD4+CD25highTreg）的作用日益凸显。调节性T细胞属T细胞亚群，在维持机体免疫自稳、调控免疫应答方面起重要作用，可诱导肿瘤的免疫耐受关系到恶性肿瘤的发生发展及预后[1]。已有研究证明，肝癌

、前列腺癌、肺癌等多种实体肿瘤患者体内Tregs数量显著增加，通过抑制多种免疫细胞的作用导致肿瘤免疫耐受 [2-4]，使肿瘤逃避机体的免疫监视不断生长，亦是导致肿瘤治疗疗效不理想的重要因素。我们通过检测胃癌患者外周血发现，调节性T细胞在胃癌患者体内表达增多，从而诱导肿瘤的免疫耐受；同时CD4+/CD8+比例下降，说明胃癌患者Tregs细胞可能通过抑制CD4+T细胞的增殖， 导致T淋巴细胞亚群之间的比例失调致免疫耐受，从而逃避机体的免疫监视不断生长。

肿瘤生长的局部环境与其发展密切相关，多种恶性肿瘤组织及浸润淋巴细胞中也可以检测出Treg[5]。肿瘤分泌的VEGF、COX-2、TGF-β等因子，可直接或间接地诱导Treg的扩增及转化，使肿瘤组织中Treg显著增多[6-7]，而Treg通过抑制NK细胞等各种免疫活性细胞使恶性肿瘤逃脱宿主的免疫监视而持续生长。由此可见，Treg与肿瘤细胞互为因果形成恶性循环，减少调节性T细胞在肿瘤患者体内的表达可能阻断这一循环从而达到抑制肿瘤生长的目的。已有报道，手术可下调胃癌患者体内调节T细胞的表达，化疗是目前广泛用于晚期胃癌患者的重要治疗方法之一，其能否改善患者免疫状况、能否通过影响调节性T细胞打破肿瘤的免疫耐受，目前并不清楚。我们通过检测胃癌患者化疗前后的外周血，发现经化疗后，胃癌患者外周血Treg明显下降、CD4+T及CD4+T/CD8+T比例不同程度上升，说明化疗可下调胃癌患者体内Treg的表达，减轻肿瘤的免疫耐受，增强机体抗肿瘤免疫，其具体机制有待进一步研究。这一发现，从肿瘤免疫角度对胃癌化疗疗效提供了理论基础，为制定胃癌综合治疗方案提供了新的思路。

参考文献

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