时间：2023-11-02 19:31:26
中图分类号：R285
文献标识码：B
文章编号；1007－2349(2007)06－0030－02
黄芪为豆科植物荚膜黄芪和内蒙黄芪的干燥根，具有补气升阳，益气固表，托毒生肌，利水消肿等功效。化学成分包括含黄芪多糖、多种氨基酸、黄芪皂苷、维生素及硒、硅、钴、钼等微量元素。现代医学发现它具有调节免疫、增强细胞代谢、强心、利尿、降压、降血糖等作用。本文就黄芪的免疫调节作用机制及其在呼吸系统疾病中的应用做一概述。
1 黄芪的免疫调节作用
1．1黄芪对巨噬细胞调节作用 黄芪能增强网状内皮系统的吞噬功能，使血白细胞数、巨噬细胞吞噬指数显著升高。
1．2黄芪对T淋巴细胞调节作用黄芪注射液可明显增加肿瘤的T细胞总数(TLC)与辅助细胞数(Th)，同时外周血a－醋酸奈酯酶细胞阳性反应增加。体内注射可促进Con．A诱导的T淋巴细胞增殖与转化。体外实验表明，低浓度黄芪可促进T淋巴细胞转化，而高浓度黄芪反而使之活力受抑制，说明黄芪具有免疫增强和免疫抑制的双向调节作用。黄芪对受胰酶损伤的T细胞E受体有明显修复作用，能使损伤，脱落的E受体重新复原。
1．3黄芪对B淋巴细胞调节作用电镜观察，黄芪皂苷能促进B淋巴细胞增殖与分化。研究还发现，黄芪能减轻钻60照射对小鼠脾脏B淋巴细胞的破坏。
1．4黄芪对IL－2产生有促进作用IL－2主要由辅T细胞产生的非特异性细胞因子，作用已活化的T细胞促进增殖并对B细胞有调节作用。黄芪可明显促进小鼠脾细胞产生IL-2的水平，间接增强体液免疫应答。
1．5黄芪能提高病毒诱生和自生干扰素的能力，促进免疫分子生成黄芪不仅能促进环已亚胺、放射菌素D在人肺二倍体细胞上引起IFN―P超诱导反应，而且可诱导小鼠脾细胞产生IFN－γ。
1．6黄芪能促进抗体和补体生成 黄芪水煎剂中的黄芪多糖能使脾脏的浆细胞增殖，促进抗体合成。电镜观察黄芪皂苷甲能促进B细胞增殖、分化和浆细胞抗体生成，不仅浆细胞数量增多，而且胞质内扩张的粗面内质网中也有大量的抗体成分。黄芪水提液可明显升高肝炎患者的总补体(CHso)和分补体(C3)。
2 黄芪免疫调节作用在呼吸系统疾病中的应用
2．1用于防治感冒 黄芪能提高病毒诱生和自生干扰素的能力，增强对病毒抑制作用，促进抗体生成。易感者在感冒流行季节服用黄芪，不仅可使感冒次数减少，而且使感冒症状较轻，病程较短。
2．2用于防治变应性鼻炎变应性鼻炎是IgA介导，T细胞依赖，肥大细胞启动，并以嗜酸性粒细胞浸润为特征的I型变态反应。黄芪能增强T淋巴细胞功能，提高变应性鼻炎患者IgA水平，抑制IgE，调整环核苷酸，改善细胞及细胞器形态与功能，恢复粘膜纤毛功能，减少嗜酸性粒细胞浸润及脱颗粒反应，减少水肿，消除局部免疫复合物沉着，从而使器官恢复正常。
关键词：黄芪;药理作用;副作用
1增强免疫力和抗病毒
黄芪对正常机体的抗体生成功能有明显促进作用，可使抗体形成细胞数即溶血空斑数和溶血素测定值显著高于对照组，可使免疫后早期抗原结合细胞数明显升高。
黄芪有促进病毒诱生和自身诱生干扰素的能力，且黄芪能使脾脏内浆细胞增生，促进抗体合成。黄芪皂甙甲也能明显促进B细胞增殖分化和浆细胞抗体合成，经电镜观察发现不仅浆细胞数量增多，而且胞质内扩张的粗面内质网腔中含有大量的抗体蛋白质。
2对干扰素的作用
黄芪具有增强病毒诱生干扰素的能力。易感冒者在感冒流行季节服用黄芪，不仅可使感冒次数明显减少，而且可使感冒症状较轻，病程较短。
3增强机体耐缺氧及应激能力
黄芪多糖有明显的抗疲劳作用，能显著延长氢化可的松耗竭小鼠的游泳时间和增加肾上腺素重量，对小鼠多种缺氧模型均具有显著的耐受能力，可明显减少全身性耗氧以及增加组织耐缺氧能力。黄芪多糖有明显的耐低温作用，能使正常以及虚损鼠的抗生存时间明显延长。
4促进机体代谢
黄芪可使细胞的生理代谢增强，这可能是通过细胞内cAMP， cGMP的调节作用来完成的。黄芪还能促进血清和肝脏的蛋白质更新，对蛋白质代谢有促进作用，这可能是黄芪扶正作用的另一个重要方面。
5 强心作用
黄芪总皂苷小剂量（2mg）可加重心力衰竭，而中等剂量（4mg）和大剂量（8mg）则有抗心力衰竭作用 .黄芪苷Ⅳ是黄芪正性肌力作用的主要活性成分，在质量浓度为20～50g/mL时对可离体豚鼠乳头肌标本产生正性肌力作用 ，其机理是黄芪抑制心肌细胞内磷酸二酯酶（PDE）的活性剂钙调蛋白，从而抑制PDE活性。
6双向调节血压作用
黄芪对血压具有双向调节作用，具有利尿降压，降低肺动脉压及右心前负荷，扩张周围血管，降低动脉压，从而改善心功能的作用，同时对冠状动脉有直接扩张作用 .黄芪可增加人体总蛋白和白蛋白量，降低尿蛋白，并通过强心增加心脏搏出量或扩张血管而达到升高血压或降低血压的作用.
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[1] [2]
bsp; 降低血糖作用
据报道，黄芪可降低正常大鼠血糖，改善糖耐量，促进血清胰岛素释放，但对正常小鼠血糖无降低作用，对链脲霉素所致实验性糖尿病大鼠有明显的降低血糖作用，可改善糖耐量，提高血清胰岛素含量，并可调节实验性糖尿病大鼠的血糖代谢 .
对肾脏、肝脏的影响
黄芪通过调节肾小球疾病蛋白质代谢紊乱，提高血浆白蛋白水平，降低尿蛋白量，在肾小球疾病中发挥积极作用。黄芪可保护并增加肝脏粗面内质网，增加细胞内rRNA和mRNA的含量，抑制核糖核酸的活性，促进蛋白合成。
抗癌作用
黄芪有对抗毒素B诱发癌变的作用，可增强环磷酰胺(CT X) 的抗癌活性，并促进因CTX所致机体造血功能损伤的恢复。
抗氧化、抗衰老及免疫调节作用
金若敏等通过口服给药，观察了黄芪毛状根对D-半乳糖所致衰老小鼠记忆力的影响及抗氧化作用；制备大鼠肾缺血-再灌注模型，测定黄芪毛状根对肾组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛（MDA）含量的影响；测定CTX所致免疫功能低下小鼠口服黄芪毛状根后自然杀伤（NK）细胞活性。结果表明，黄芪毛状根能改善衰老小鼠记忆力，提高脑、肝细胞SOD活性并降低肝脏MDA含量，能降低缺血-再灌注大鼠肾MDA含量及血肌酐浓度，还能提高免疫功能低下小鼠NK细胞活性。说明黄芪毛状根具有抗衰老、抗氧化及免疫调节作用。
美容作用
添加黄芪提取物的化妆品因含有甜菜碱，故性质柔和，又含有微量元素，适合儿童和婴幼儿使用.将黄芪提取物制成沐浴露，可营养皮肤，增强皮肤对疾病的抵抗能力;与蒲公英提取物合用，可治疗儿童及婴幼儿的湿疹及尿布疹.
从中医临床看，黄芪是一味好药，作用强大且独特，一般临床使用数十克后患者的脉象马上就会有反应，精神和体力会有改善，正确合理地使用则收效明显。但必须注意的是，它的副作用同样强大。
对三种肾虚，必须慎用黄芪肾病属阴虚，湿热、热毒炽盛者用黄芪一般会出现毒副作用，应禁用。因为黄芪性味甘、微温，阴虚患者服用会助热，易伤阴动血；而湿热、热毒炽盛的患者服用容易滞邪，使病情加重。如果必须服用黄芪，一定要配伍运用。
阴虚患者使用黄芪，必须配伍养阴药使用，如生地、熟地、玄参、麦冬、天冬、玉竹等。湿热患者必须配伍清利湿热药，如黄连、茵陈、黄芩等。热毒炽盛的患者必须配伍清热解毒药，如黄连、栀子、大黄、败酱草等。
黄芪提取物是一种名贵中药的有效部位,具有免疫调节､抗炎､镇痛以及抗氧化等作用｡为进一步探索黄芪提取物的药理作用,探讨其在防治心脑血管疾病和延年益寿方面的应用,我们观察了黄芪提取物的耐缺氧和抗疲劳作用｡
1材料
1.1药品黄芪提取物 南京药物研究所提供,用时以0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)制成混悬液;绞股兰(Gynostemma Pentaphyllum Mak 下称GPM)[1]由安徽医科大学药物研究所提供;氰化钾(KCN):为上海试剂一厂产品｡
1.2动物昆明种小鼠,雌雄兼备,体重20±2g,由安徽医科大学实验动物中心提供｡
2方法和结果
2.1常压缺氧模型[2]取鼠50只,随机分为5组:CMC-Na对照组､GPM阳性对照组､黄芪提取物三个剂量组(25､50､100mg•kg-1),每组10只,ig,1次/d,连续7d｡最后一次用药后2h,分批将小鼠(每次8只)放入容积为200ml装有钠石灰120g的密闭干燥器内,观察小鼠存活时间｡结果见表1｡
表1结果表明,与对照组比较,黄芪提取物(50､100mg•kg-1)明显延长常压缺氧条件下小鼠的存活时间｡
2.2KCN中毒缺氧模型[3]取鼠50只,随机分为5组:CMC-Na对照组､GMP(100mg•kg-1)､黄芪提取物三个剂量组(25､安徽医科大学临床药理研究所(陈敏珠)50､100mg•kg-1),每组10只｡ig ,1次/d,连续7d,最后一次给药后2h,尾静脉注射KCN(4mg• kg-1)｡并立即用秒表记录小鼠存活的时间｡结果见表2｡
2.3小鼠负重游泳实验[4-5]取鼠50只,随机分为5组:CMC-Na对照组､GMP(100mg•kg-1)､黄芪提取物三个剂量组(25､50､100mg•kg-1),每组10只｡ig ,1次/d,连续7d｡最后一次给药后2h在小鼠尾部距尾尖1/3处负重(重量为小鼠体重的10%),将小鼠放入20℃水中游泳,以小鼠沉入水底,静止不动为游泳停止时间｡结果见表3｡
3结论
本文结果表明,黄芪提取物可延长常压缺氧小鼠的存活时间,也可延长KCN中毒小鼠存活时间,且具明显的抗疲劳作用,呈现一定的剂量依赖性｡其作用机理尚待进一步研究,但上述黄芪提取物在防治心脑血管疾病和延年益寿方面具有较广阔的前景｡
1、黄芪有补气升阳、益卫固表、利水消肿、托毒生肌的作用，本品味甘，主入脾经，是补气的良药，饮食不规律或贪吃冷饮会损害脾胃，而导致食欲不振、腹胀、乏力、面色萎黄，可配合党参、厚朴。
2、黄芪甘温偏升，既能补中益气又能升阳举陷，可以治疗气虚下陷导致的脱肛、子宫脱垂、胃下垂等脏器下垂，可以跟白术配合使用。
3、黄芪补气，治疗皮肤疏松导致的自汗，配伍白术、防风。甘温补气、健脾益肺、利水消肿，可以治疗气虚导致的乏力、尿少、下肢浮肿。中医认为气为血帅，有形之血生于无形之气，配合当归可以治疗血虚。黄芪善于升阳，头晕、舌苔厚腻不能单独使用。
（来源：文章屋网 ）
1、补气升阳、固表止汗。 黄芪具有补气升阳、固表止汗、托毒生肌、利水消肿的作用。
2、茯苓具有健脾除湿、利水消肿、除烦安神的作用，二者配伍煮水喝，作用相互协调补充，其作用明显增强。
3、黄芪通过补气而利水，茯苓通过健脾而利水，主要用于治疗神疲乏力、气短懒言、下肢浮肿、面目浮肿、水肿、咳嗽痰多、心悸气短、腹泻便溏并伴有不消化食物、头晕目眩、舌淡胖且有齿痕、脉沉或弱，可用于治疗慢性肾炎、肾病综合征、水肿辨证为气虚者，可以增加尿量、减轻水肿、减少尿蛋白、提高免疫功能。
（来源：文章屋网 ）
【关键词】 黄芪蛰虫合剂；HepG2.2.15细胞；肝炎病毒,乙型
【Abstract】 AIM: To evaluate the inhibitive effects of Astragalus and Thoroughfare decoction against hepatitis B virus（HBV） in vitro. METHODS: HepG2.2.15 cells, as target cells, were exposed to different concentrations of Interferon α (IFNα) or Astragalus and Thoroughfare decoction respectively. Realtime PCR was applied to quantify extracellular HBV DNA and enzymelinked immunosorbent assay (ELISA) was used to assess HBsAg and HBeAg. RESULTS: The 50% inhibitory concentration (IC50) of Astragalus and Thoroughfare decoction against HBsAg, HBeAg, and extracellular HBV DNA was 1.35, 1.92 and 2.19 g/L respectively, and treatment index (TI)>3.56-5.79. αIFN had weak inhibitory effects against HBV. CONCLUSION: Astragalus and Thoroughfare decoction can inhibit HBV replication in vitro to some extent.
【Keywords】 Astragalus and Thoroughfare decoction; HepG2.2.15 cell; Hepatitis B Virus
【摘要】 目的： 观察黄芪蛰虫合剂体外抗乙型肝炎病毒 (HBV) 的作用. 方法： 以HepG2.2.15细胞为靶细胞，分别加入不同浓度的黄芪蛰虫合剂和α干扰素. 采用ELISA法及荧光定量PCR法，测定药物对细胞培养上清HBsAg, HBeAg及细胞外HBV DNA的抑制作用. 结果： 黄芪蛰虫合剂具有一定程度的抗HBV的作用，其抑制HBsAg, HBeAg及细胞外HBV DNA的50 %抑制浓度(IC50)分别为1.35, 1.92, 2.19 g/L. 治疗指数（TI）>3.56~5.79. αIFN也有抑制HBV的作用，但抑制作用较弱. 结论： 黄芪蛰虫合剂具有一定的体外抗HBV作用.
【关键词】 黄芪蛰虫合剂；HepG2.2.15细胞；肝炎病毒，乙型
我国为乙型肝感染的高发区［1］. 目前，尚没有理想的治疗慢性乙型肝炎的药物. 我国有数千年应用中草药治疗疾病的传统和经验，从中已发现了不少抗乙型肝炎病毒（HBV）的有效单方和复方制剂. 黄芪蛰虫合剂是基于理论研究和临床观察，将黄芪、蛰虫、党参、白术、炙甘草及枸杞这六味中药按君、臣、佐、使进行配伍而自制的复方合剂. 在临床初步试用中发现其具有恢复肝功能、提高机体免疫力、抗肝纤维化和抑制病毒复制的作用. 动物实验表明，黄芪蛰虫合剂对肝纤维化有良好的抑制作用［2］. 我们采用含HBV基因转染的2.2.15细胞株为靶细胞，观察不同浓度黄芪蛰虫合剂体外对HBV的抑制作用.
1材料和方法
1.1材料黄芪蛰虫合剂为自行煎煮，水浴蒸发浓缩至生药浓度为1000 g/L. 尼龙网过滤后经2000 r/min离心，过滤除菌后备用. 实验时用培养液稀释，分别配制成10, 5, 2.5, 1.25, 0.625 g/L共5个浓度梯度. αIFN由深圳市海王生物工程有限公司提供，实验时分别用培养液稀释成5×105, 2.5×105, 1.25×105 IU/L. 噻唑蓝（MTT, Sigma公司）；二甲基亚砜（DMSO, Sigma公司）；HBsAg和HBeAg的ELESA检测试剂盒（上海华泰生物工程公司），DG5031型酶联免疫检测仪（国营华东电子管厂）；HBV DNA提取及扩增荧光检测试剂盒（广州中山大学达安基因股份有限公司），PE7700型自动荧光PCR检测仪（美国Perkin Elmer公司）；HepG2.2.15细胞由第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心张岩博士惠赠；DMEM、胰蛋白酶、L谷氨酰胺(Gibco公司)； 胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；G418 (Sigma公司)；青、链霉素（华北制药厂）.
1.2方法
1.2.1细胞培养［3］用含200 mL/L胎牛血清、400 mg/L G418, 1.0×105 U/L青、链霉素及0.3 g/L L谷氨酰胺的DMEM培养液培养细胞，56 g/L碳酸氢钠调pH值到7.2. 用2.5 g/L胰蛋白酶消化传代. 取对数生长期状态良好的细胞，调整细胞数为1×107/L，接种于96孔板，每孔0.2 mL，于37℃, 50 mL/L CO2培养箱培养48 h，待细胞贴壁后进行试验. 两种药物按配制不同浓度分组，每一浓度设3个复孔，同时设仅加细胞培养液的空白对照. 每3日换同样浓度含药培养液及对照培养液1次. 各孔用药第3, 6, 9日将吸去的上清液置于-20℃冰箱保存待检.
1.2.2药物对细胞毒性试验采用MTT法. 于加药第9日吸去上清液，每孔加5 g/L MTT 20 μL, 37℃培养4 h，弃上清液后每孔加入150 μL DMSO，震荡10 min，测A490 nm值. 计算细胞存活率，按下列公式计算半数中毒浓度（TC50）［4］. 细胞存活率（%）=（实验组A490 nm值/阴性对照组A490 nm值）×100%. TC50=Anti log［logB+(50-B)的抑制百分率〖〗(A-B)的抑制百分率×C］. （A=＞抑制50%药物浓度，B=＜抑制50%药物浓度，C=log稀释倍数）.
1.2.3HBsAg, HBeAg测定使用双抗体加心ELESA法. 根据试剂盒说明测定培养上清液HBsAg, HBeAg，记录P/N值，按下列公式计算50%药物抑制浓度（IC50）. 抗原抑制率（%）=（对照孔P/N值-实验孔P/N值）/（对照孔P/N值-2.1）×100%. IC50=Anti log［logB+(50-B)的抑制百分率〖〗(A-B)的抑制百分率×C］（A=＞抑制50%药物浓度，B=＜抑制50%药物浓度，C= log稀释倍数）.
1.2.4细胞培养上清HBV DNA检测采用Taq man荧光定量PCR法检测. 按照HBV核酸扩增荧光检测试剂盒说明操作. 引物序列为P1: 5′ATCCTGCTGCTATGCCTCATCTT 3′; P2: 5′ACAGTGGGGGAAAGCCCTACGAA 3′；荧光探针序列为: 5′TGGCTAGTTTACTAGTGCCATTTG 3′. 各反应管放入PCR仪，按下列条件扩增： 93℃ 2 min预变性，然后93℃ 45 s到55℃ 1 min循环扩增10个循环，再按93℃ 30 s到55℃ 45 s循环扩增，共30个循环. 反应结束后由计算机自动分析出HBV DNA定量结果. 计算HBV DNA抑制率. HBV DNA抑制率（%）=（阴性对照组HBV DNA拷贝数-实验组HBV DNA拷贝数）/阴性对照组HBV DNA拷贝数×100%.
1.2.5治疗指数的计算HBsAg和HBeAg的治疗指数(TI)=半数毒性浓度(TC50)/半数有效浓度(IC50). 其中TI≥2为有效低毒；1
2结果
2.1药物对HepG2.2.15细胞毒性测定黄芪蛰虫合剂不同浓度组的细胞存活率显示，黄芪蛰虫合剂对细胞的毒性作用非常小，其10, 5 g/L的抑制率分别为59.7%, 32.3%, TC50为7.8 g/L. αINF仅在浓度达5×105 IU/L时细胞存活率为48%，其余浓度对细胞生长未见明显毒性.
2.2药物对HepG2.2.15细胞培养上清HBsAg, HBeAg的抑制作用黄芪蛰虫合剂的不同浓度对HBsAg, HBeAg分泌均有一定的抑制作用，且随剂量的增加、治疗时间的延长对HBV的抑制也随之增强. 计算第9日HBsAg的IC50为1.35 g/L, HBeAg的IC50为1.92 g/L. αINF抑制HBV分泌抗原的能力较弱（表1）.
2.3药物对HepG2.2.15细胞培养上清HBV DNA的抑制作用黄芪蛰虫合剂的不同浓度对HBV DNA的分泌均有一定的抑制作用，且随剂量的增加、治疗时间的延长对HBV的抑制也随之增强. 第9日计算HBV DNA的IC50为2.19 g/L. αINF也可在一定程度上抑制HBV DNA的分泌，其第9日HBV DNA的IC50为4.54×105 IU/L（表1）.
3讨论
近年来，一批中药经过实验研究及临床应用证实有一定的抗病毒作用. 如刘天灯等［5］用苦参素治疗慢性乙型肝炎28例，发现苦参素组HBeAg, HBV DNA的阴转率均与干扰素相近. 同样，吴清和等［6］用血清药理学的方法研究了三黄乙肝胶囊对HBsAg的体外抑制作用，发现由黄芩、柴胡、黄芪、五味子、大黄、甘草等药组成的三黄乙肝胶囊，对家兔血清HBsAg具有明显的抑制作用，并随血清中药浓度的升高、作用时间的延长而增强.
HepG2.2.15细胞株是一种在染色体上整合了HBV基因组的肝肿瘤细胞株，可以向培养液中稳定持久的分泌HBsAg, HBeAg和HBV DNA，根据培养液上清或胞内病毒DNA拷贝数的变化为体外筛选抗HBV药物提供了细胞模型［7］，为开发新型抗HBV中药提供了手段. 晏雪生等［8］用HepG2.2.15研究海珠益肝胶囊对HBeAg，HBsAg的抑制作用. 发现海珠益肝胶囊在体外具有明显的抑制HBeAg和HBsAg表1药物对HepG2.2.15细胞培养上清HBsAg，HBeAg及HBV DNA的抑制作用，并且各浓度间存在着量效关系，其中对HBeAg的作用优于对HBsAg的作用. 邹宇宏等［9］研究了黄芪提取物抗HBV的作用，发现黄芪总苷及黄芪多糖对HBsAg，HBeAg的分泌均有抑制作用.
在黄芪蛰虫合剂中，其复方成分互相辅助，通过药理学的相互作用，达到了增强效果或减少副作用的目的. 黄芪含糖、苷、生物碱、黄酮类、多种氨基酸及微量元素，可产生多种生物学活性，包括抗病毒、调节机体免疫、促进干扰素系统的功能及延长细胞体外存活等作用，对乙肝表面抗原阳转阴有一定作用，是临床常用的抗肝炎药物. 蛰虫具有逐瘀、破积、通络的作用，常用于症瘕积聚、血瘀经闭等病证的治疗. 枸杞提取物可提高免疫系统功能，党参和黄芪一样，均可提高机体免疫力. 我们的实验结果也表明，黄芪蛰虫合剂的各个实验浓度组均对HBsAg，HBeAg及HBV DNA的分泌有不同程度的抑制作用，其可能机制： ① 抑制HepG2.2.15细胞的增殖；② 抑制了HBV基因的复制；③ 对其相关酶类或受体活性的抑制，而产生抑制这种DNA病毒的作用，但其机制还有待于进一步研究.
【参考文献】
［1］ 陈云茹，袁利超，党双锁. 黄芪多糖治疗慢性病毒性乙型肝炎［J］. 世界最新医学信息文摘, 2004,3(3):1130-1131.
［2］ Dang SS, Jia XL, Cheng YA, et al. Inhibitory effect of Huangqi Zhechong decoction on liver fibrosis in rat［J］. World J Gastroenterol, 2004,10(15):2295-2298.
［3］ 党双锁. 医学常用实验技
2.3药物对HepG2.2.15细胞培养上清HBV DNA的抑制作用黄芪蛰虫合剂的不同浓度对HBV DNA的分泌均有一定的抑制作用，且随剂量的增加、治疗时间的延长对HBV的抑制也随之增强. 第9日计算HBV DNA的IC50为2.19 g/L. αINF也可在一定程度上抑制HBV DNA的分泌，其第9日HBV DNA的IC50为4.54×105 IU/L（表1）.
3讨论
近年来，一批中药经过实验研究及临床应用证实有一定的抗病毒作用. 如刘天灯等［5］用苦参素治疗慢性乙型肝炎28例，发现苦参素组HBeAg, HBV DNA的阴转率均与干扰素相近. 同样，吴清和等［6］用血清药理学的方法研究了三黄乙肝胶囊对HBsAg的体外抑制作用，发现由黄芩、柴胡、黄芪、五味子、大黄、甘草等药组成的三黄乙肝胶囊，对家兔血清HBsAg具有明显的抑制作用，并随血清中药浓度的升高、作用时间的延长而增强.
HepG2.2.15细胞株是一种在染色体上整合了HBV基因组的肝肿瘤细胞株，可以向培养液中稳定持久的分泌HBsAg, HBeAg和HBV DNA，根据培养液上清或胞内病毒DNA拷贝数的变化为体外筛选抗HBV药物提供了细胞模型［7］，为开发新型抗HBV中药提供了手段. 晏雪生等［8］用HepG2.2.15研究海珠益肝胶囊对HBeAg，HBsAg的抑制作用. 发现海珠益肝胶囊在体外具有明显的抑制HBeAg和HBsAg表1药物对HepG2.2.15细胞培养上清HBsAg，HBeAg及HBV DNA的抑制作用，并且各浓度间存在着量效关系，其中对HBeAg的作用优于对HBsAg的作用. 邹宇宏等［9］研究了黄芪提取物抗HBV的作用，发现黄芪总苷及黄芪多糖对HBsAg，HBeAg的分泌均有抑制作用.
在黄芪蛰虫合剂中，其复方成分互相辅助，通过药理学的相互作用，达到了增强效果或减少副作用的目的. 黄芪含糖、苷、生物碱、黄酮类、多种氨基酸及微量元素，可产生多种生物学活性，包括抗病毒、调节机体免疫、促进干扰素系统的功能及延长细胞体外存活等作用，对乙肝表面抗原阳转阴有一定作用，是临床常用的抗肝炎药物. 蛰虫具有逐瘀、破积、通络的作用，常用于症瘕积聚、血瘀经闭等病证的治疗. 枸杞提取物可提高免疫系统功能，党参和黄芪一样，均可提高机体免疫力. 我们的实验结果也表明，黄芪蛰虫合剂的各个实验浓度组均对HBsAg，HBeAg及HBV DNA的分泌有不同程度的抑制作用，其可能机制： ① 抑制HepG2.2.15细胞的增殖；② 抑制了HBV基因的复制；③ 对其相关酶类或受体活性的抑制，而产生抑制这种DNA病毒的作用，但其机制还有待于进一步研究.
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目的观察黄芪党参蘑菇煎在大肠癌患者化疗时的协同作用。方法将51例大肠癌病人随机分为实验组（黄芪党参蘑菇煎加lfp方案）和对照组（单纯lfp方案），将两组的疗效、毒性、对化疗的耐受性、生活质量改善情况进行对比。结果提高生存质量，提高kps评分，提高率、稳定以上率分别是55.6%，92.6%。一般症状改善，尤其食欲增加、睡眠改善实验组更为明显。增加化疗药物的疗效，受益率（cr+pr+sd）比较有意义。保护骨髓，维护造血功能，治疗后白细胞的数量为（4.19±0.45）×109/l，治疗前后白细胞的数量增长的比较有意义。结论黄芪党参蘑菇煎治疗大肠癌，可以抵御化疗的副作用，增加食欲改善体质、保护脏器功能，缓解肿瘤的不适症状等。 【关键词】 黄芪党参蘑菇煎； 植物多糖； 大肠癌； 中西医结合
黄芪党参蘑菇煎剂是多种植物多糖复合物，多糖是水溶性的葡聚糖，属于免疫增强剂或称生物反应调节剂，参与免疫多环节活动，能抵御许多损伤因子对机体的破坏，有双向免疫调节的作用，促使因癌症或感染引起的体内平衡失调的恢复，并增强患者对化疗的敏感性、耐受性，减低化疗的毒副反应［1］。我们对51例大肠癌术后患者，进行随机对照研究，以比较植物多糖复合物加lfp方案与单纯lfp方案的疗效、毒性、对化疗的耐受性、生活质量改善情况。现报道如下。
1 材料与方法
1.1 病例选择
200401～200605我们将收治的大肠癌术后病人（均有病理学证实）随机分成实验组（黄芪党参蘑菇煎剂辅助化疗）和对照组（单纯化疗）；术后15～40 d开始首次化疗；肝肾功能及血常规正常；karnofsky评分：>60分。实验组27例，男15例，女12例;年龄20～72岁，平均年龄50岁。组织学类型：乳头状腺瘤3例，管状腺瘤4例，粘液腺癌3例，未分化癌7例，腺鳞癌8例，鳞状细胞癌2例；临床分期：a期8例，b期11例，c期8例。对照组24例，男13例，女11例;年龄30～68岁，平均45岁。组织学类型：乳头状腺瘤 3例，管状腺瘤4例，粘液腺癌3例，未分化癌5例，腺鳞癌6例，鳞状细胞癌3例；临床病理分期:a期5例，b期10例，c期9例［2］。
1.2 给药方法
对照组全部采用lfp方案:cf 150 mg,1次/d，连用5 d；5-fu 500 mg/m2,1次/d，连用5 d；pdd 30 mg/m2 ,1次/d，连用3 d。此方案为每4周为1周期，重复2个周期。实验、对照两组均用上述相同方案，实验组另加黄芪党参蘑菇煎。以1 000 ml开水浸泡250 g普通蘑菇30 min浸泡液，煎煮黄芪50 g，党参30 g，茯苓20 g，枸杞20 g，女贞子20 g，40 min取汁口服，1/d，连用两个月。两组均于每日输注能量合剂＋门冬氨酸钾镁，化疗前15 min静脉注射恩丹西酮。
1.3 近期观察
主要观察治疗效果（以自我感觉为主），化疗毒副反应的程度，患者对化疗的耐受情况。每次化疗前后记录症状、体征、大小便的改变，查血尿常规和肝肾功能心肌酶、心电图，毒副反应根据who制定的常见抗癌药物急性评及亚急性评分标准进行分度。
1.4 可行性分析
年龄、临床分期、病理类型，两组间差异均无显著性(p>0.05)。结果见表1～3。表1 性别与年龄分布情况例（略）表2 肿瘤种类、肿瘤病理类型及临床分期例（略）表3 卡氏评分例（略）
2 治疗效果
2.1 近期效果
2.1.1 一般状况见表4。表4 一般状况改善情况例（略）
2.1.2 kps的评分 见表5。表5 kps的评分（略）
2.1.3 两组化疗结果见表6。表6 两组化疗结果（略）
2.2 毒副反应以患者各疗程前后血常规结果作为观察依据，结果见表7。可见减轻白细胞的降低程度，耐受化疗损伤，完成化疗。表7 周围血细胞计数（略）
3 讨论
大肠癌病人的生存期是诸多肿瘤类型较长的，但是患者大肠癌术后复发和转移是治疗失败、病人死亡的主要原因，化疗是预防复发和转移的主要手段，据中医药的文献报道的治疗效果，中医药不仅限于生物调节范畴，中医药在治疗机理有着积极的一方面，寄托着治愈肿瘤的希望。为求延长肿瘤患者的生存期限、生存质量的目的，设计实验观察治疗组采用黄芪党参蘑菇煎联合lfp；对照组单纯应用lfp［3，4］进行研究。
我们的组方是按照中西医结合原则，针对肿瘤的病机脾胃阳虚、气血不足，选择温补脾胃、益气血的中药，且富含有多糖的药物如黄芪、党参、枸杞、女贞子、茯苓、麦冬，加含多糖类食用菌蘑菇，这样组方相得益彰，共同发挥疗效。
黄芪党参蘑菇煎剂是多种植物多糖复合物，本研究临床观察结果表明，在大肠癌术后临床辅助治疗中，口服黄芪党参蘑菇煎剂配合化疗试验结果具有以下优点：
①提高生存质量，kps提高、稳定例数分别是15，10例，提高率、稳定以上率分别是55.6％，92.6％。神疲乏力、恶心呕吐、食欲不佳、肿瘤引起的不适缓解、睡眠改善，黄芪党参蘑菇煎组较化疗组为好，尤其食欲增加、睡眠改善更为明显。
②增加化疗药物的疗效，经比较cr（完全缓解）、pr（部分缓解）、sd（无效）、pd（恶化），有效率（cr+pr）达到44%，受益率（cr+pr+sd）达到80%。
③保护骨髓，维护造血功能。治疗前白细胞的数量为（4.81±0.47）×109/l，治疗后白细胞的数量为（4.19 ± 0.45）×109/l，治疗前后白细胞的数量比较有意义。治疗过程中外周血红细胞、白细胞、血小板皆在化疗后下降，粒系细胞周期短易受细胞毒性药物影响而抑制表现下降出现时间早，回升速度快，联合使用黄芪党参蘑菇煎具有促进、保护骨髓、减少细胞毒性药物的损伤，可以在短期内回升见效明显快。
从中医角度分析，大肠癌患者属中医“癥瘕”“肠癖”病范畴，辨证多是邪毒内蕴、脾胃两伤虚实夹杂状态，因此在手术后择期化疗攻邪为主治疗的基础上，加用补益（免疫调节剂）辅助治疗获收裨益，黄芪党参蘑菇煎具有益气养阴的作用，气虚得以补充脾气则健而胃肠消化功能、免疫功能得以调整、逆转免疫抑制状态，调节机体对肿瘤反应性，表现乏力气短缓解、食欲食量改善，体重增加，阴液得以滋润则夜间睡眠延长、低热消除、肿瘤的不舒适状况如大便次数性状趋于正常、改变手术放疗造成机体虚弱，显示了中西医结合扶正祛邪在肿瘤化疗中具有一定的辅助作用［5～8］。
治疗肿瘤以扶正祛邪为总纲贯穿始终：补要择时，即重在早用；补要守法，长期用药；补要勿滞，少加理气药，使补中有通；补忌实实，选用祛邪药物，使正气得以辅助，邪气得以驱除。
抗转移、抗复发有待以后研究长远疗效的观察。
4 结论
中药包括黄芪党参蘑菇煎治疗肿瘤，可以增加食欲改善体质、保护脏器功能，改善肿瘤的不适症状等，故笔者建议肿瘤专家，从中医治疗肿瘤扶正祛邪两方面机理进行多方面、多层次研究，将研究成果综合应用，选择治疗效果相同、所含有效成分不相同的药物，按中医理法方药组成方剂，应用于肿瘤病人的治疗，以取得更佳治疗效果。
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【关键词】黄芪提取物 IgA肾病 异常糖基化 分子机制
Research of the regulation effect of Astragalus extract on abnormal glycosylation of IgA1 of lgA nephrosis patient and its mechanism
GAO Zhi-ming*， SHEN Li， XU Wen， WANG Yu-min
（Zhuhai People's Hospital， Guangdong Zhuhai 519000， China）
ABSTRACT Objective： To investigate the effect of Astragalus extract on abnormal glycosylation of IgA1 in IgAN patients and its mechanism. Methods： In this study， peripheral blood lymphocytes in IgAN and non-IgAN patients were isolated and cultured， and we tried to found out whether and how Astragalus extracts could regular abnormal glycosylation of IgA1 by immunohistochemistry and molecular biology. Results： In IgAN patients， the degree of abnormal glycosylation of IgA1 in Astragalus extracts group reduced significantly（P
Key words： Astragalus extract；IgA nephropathy；Abnormal glycosylation；Molecular mechanisms
IgA肾病是1968年首次报道的肾病类型，该肾病患者血清、扁桃体以及肾脏组织中均可发现IgA1分子链区糖链结构异常，是导致肾脏衰竭的最常见原因之一。当前针对IgA肾病还没有疗效显著的临床药物，尤其是针对IgA1异常糖基化作用的药物研究较少。黄芪是用于肾病辅助治疗的草本植物，研究显示，黄芪对于IgA肾病中的IgA1异常糖基化具有调节作用[1]。本文从临床角度探讨对黄芪活性成分对IgA1异常糖基化的作用进行研究，探讨其可能的分子机制。
1 资料与方法
1.1 临床资料
以2012年3月到2013年3月在我院肾内科收治的11例IgA患者为研究组进行研究，其中男性患者6例，女性患者5例，年龄为23-45岁，平均年龄31.5±3.5岁，经过肾穿刺免疫荧光以及病理学检查确诊为IgA肾病[2]，病程为3个月到2年。排除标准：（1）肝肾功能不全者；（2）糖尿病肾病，狼疮性肾炎等继发性肾病患者；（3）酗酒或滥用药物，以及精神异常。以同时期的11例非IgA肾病患者为对照组，其中男性患者7例，女性患者4例，平均年龄为23.5±2.8岁，患者肾功能正常，均无血尿和蛋白尿。研究组与对照组患者在性别构成比、血清白蛋白、尿素氮等无统计学意义（P>0.05），研究组的年龄、蛋白尿均高于对照组，具有统计学意义（P
1.2药品与试剂
黄芪提取物（黄芪多糖、黄芪总皂苷、黄芪总黄酮，自提取），测试剂盒（AL，USA），小牛血清；RNA提取试剂（Trizol，Invitrogen公 司）， 反转录酶系、Taq酶系（北京索奥公司），焦碳酸二乙酯（DEPC，美国Sigma公司），三磷酸碱基脱氧核苷酸（dNTPs，上海生物工程公司），RNA酶抑制剂（RNasin，美国 Promega公司）。
1.3 方法
采用血清样本复孔中的吸光度值均值，测试IgA1浓度与糖基化水平。采用荧光定量RT-PCR 反应测定β-1，3半乳糖基转移酶及其伴侣分子Cosmc mRNA水平。
目标引物：β1，3GT 上游5’-GGC TCA CAG CCA GTA GGC ATA-3’；下游5’-GCT GCC CAC CAG ATT CTG A- 3’；Cosmc 上游5’-CTA GAC GCG GAT GAA GTG CAA-3’；下游 5’-CCA ATG GAA TCT GAT TAC TGT TTG G-3’；GAPDH 上游 5’-GAA GGT GAA GGT CGG AGT C-3’；下游 5’-GAA GAT GGT GAT GGG ATT TC-3’；
探针：β1，3GT 5’FAM-AGC GGG AAT GAA AAT CGA GC A C-T AMARA-3’；Cosmc 5’FAM-ACT TCT CCA TAG AGG AGT TGT TGC AA-TAMARA-3’；GAPDH 5’FAM-CAA GCT TCC CGT TCT CAG CC-TAMRA-3’。
1.4 统计分析
将数据输入SPSS19.0进行统计分析，组间比较采用t检验，P
2结 果
2.1 研究组与对照组结果比较
表1 IgA肾病患者和非IgA肾病患者外周血淋巴细胞培养上清液IgA浓度与糖基化程度比较
组别 OD的倒数值 上清液IgA浓度（ ng/ml） 上清液IgA糖基化程度（OD490nm）
空白组 黄芪提取物组 空白组 黄芪提取物组
研究组 5.67±0.53* 790.39±39.24* 798.28±40.05* 0.343±0.017* 0.312±0.005
对照组 6.35±0.48 695.44±47.11 702.59±38.80 0.284±0.013 0.283±0.017
注：与对照组相比，*P
2.2 IgA肾病患者和正常人外周血淋巴细胞培养上清液β1，3GT mRNA和Cosmc mRNA表达水平
表2 IgA肾病患者和非IgA肾病患者外周血淋巴细胞培养上清液β1，3GT mRNA与上清液Cosmc mRNA表达水平（ s， n=10）
组别 β1，3GT mRNA Cosmc mRNA
空白组 黄芪提取物组 空白组 黄芪提取物组
研究组 0.80±0.20 0.78±0.11 0.78±0.16 0.98±0.29
对照组 0.76±0.13 0.79±0.22 0.97±0.23 1.01±0.17
注：与对照组相比，*P
3 讨论
人体IgA有两个亚类：IgA1和IgA2。IgA1的糖基化缺陷导致其自身聚集或与其他糖蛋白分子形成大分子复合物而沉积在肾小球系膜区，引起系膜细胞和基质增生，最终导致I g A肾病[3]。糖基化酶异常，IgA过量合成是低糖基化IgA分子形成的主要原因[4]。本文的研究显示，采用黄芪提取物能够对IgA1的异常糖基化程度进行抑制，并且检测药物干预后外周血淋巴细胞CIGALT1的活性和Cosmc mRNA的表达水平可知，IgA肾病患者的用药组和空白组中的β-1，3GTmRAN 表达没有显著差异，而黄芪提取物的Cosmc mRNA的表达水平与空白组相比有显著提高（P
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