高效液相色谱法测定肠泰颗粒中齐墩果酸含量

作者：万元松，杨，黄一平

【摘要】

目的建立肠泰颗粒中齐墩果酸的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,以kromasil kr100-c18 柱( 4.6 mm ×250 mm ,5 μm)为分离柱, 甲醇∶水∶冰乙酸∶三乙胺( 85 ∶15∶0.04∶0.02)为流动相,检测波长为220 nm。结果齐墩果酸进样量在在2.04～10.2μg 范围内线性关系良好，相关系数为0.999 2,平均回收率为98.60%，rsd=1.76%。结论方法可靠、简单可行,为控制肠泰颗粒的质量提供了科学依据。

【关键词】 肠泰颗粒； 齐墩果酸； 高效液相色谱

abstract：objectiveto develop a method for determination of oleanolic acid in changtai granule. methodshplc was carried out on a kr100-c18 ( 4. 6 mm ×250 mm ,5 μm) using meoh-h2o-hoac-tea ( 85 ∶15∶0. 04 ∶0. 02 ) as the mobile phase, and the detection wavelength 220nm. resultsthe standard curve was linear in the range of 2.04～10.2. μg. the average recovery and rsd% were 98. 60% and 1.76%. conclusionthis method is accurate, reliable and provides a scientific index for the quality control of changtai granule.

key words：changtai granule； oleanolic acid； hplc

肠泰颗粒是江苏省中西医结合医院王小宁院长的临床经验方，由白花蛇舌草、薏苡仁等7味中药材组成,用于大肠癌的术后辅助治疗，效果显著。本制剂的有效成分齐墩果酸具有护肝、解肝毒、降糖降脂、抗炎抗病毒、抗癌等作用［1］，齐墩果酸的抗癌作用几乎贯穿了肿瘤发展的各个阶段，包括抑制肿瘤的生成、诱发以及诱导细胞的分化，能有效地抑制肿瘤血管的生成、肿瘤细胞的侵袭和转移［2］，可作为衡量制剂质量的指标之一。用于齐墩果酸的含量测定方法很多，较早应用比色法、中和法,操作复杂,显色误差较大,对酸性杂质无分辨力和选择性,所以近年来已少应用。薄层扫描法应用广泛,高效液相(hplc)法有操作快速和准确性高的优势,正在取代其它方法。本文采用高效液相色谱法测定方中齐墩果酸的含量,为肠泰颗粒的质量标准研究奠定基础［3］。

1 仪器与试药

1.1 仪器agilent 1100 高效液相色谱仪（美国agilent公司）；hh-6数显恒温水浴锅（金坛市丹瑞电器厂）；ab135s 十万分之一天平（mettler公司）；dhg-9240型电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科技有限公司)；re-52aa旋转蒸发器(南京金正数字仪器有限公司)。

1.2 试药齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110709 -200304)，乙醇(分析纯，南京化学试剂厂），95%医用乙醇，水为乐百氏纯净水，乙腈、甲醇(色谱纯，美国天地公司）。肠泰颗粒(江苏省中医药研究院中药制剂室自制)。

2 方法与结果

2. 1 色谱条件［4］

色谱柱为kromasil kr100-c18 柱( 4. 6 mm ×250 mm ,5 μm)（带保护柱）， 流动相为甲醇∶水∶冰乙酸：三乙胺( 85 ∶15∶0.04∶0.02) , 流速0. 5 ml ·min - 1 ,检测波长220 nm ,柱温20 ℃,进样15 μl。图谱见图1 。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取齐墩果酸对照品2.04 mg ,置10 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每毫升含齐墩果酸0.204 mg）。

2.3 供试品溶液的制备

取肠泰颗粒（批号071224）6 g,置于具塞三角瓶中，加甲醇50 ml,密闭超声30 min,补足重量，滤过，取续滤液25 ml,水浴挥干溶剂，残渣用甲醇溶解并定容至5 ml，摇匀，0.45 μm滤膜滤过。

2.4 阴性对照品溶液的制备

取处方中缺白花蛇舌草等含齐墩果酸的药材,制成阴性对照颗粒,取阴性对照颗粒按供试品溶液制备法制得阴性对照溶液。

2.5 线性关系考察

精密吸取对照品溶液10 ,15 ,20 ,25 ,40，50 μl分别进样测定。以对照品进样量(μg) 为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线得回归方程y= 363.19x - 74.10,r = 0.999 2,齐墩果酸在2.04～10.2 μg范围内线性关系良好。

2.6 精密度实验

精密吸取齐墩果酸对照品溶液重复进样5次。峰面积积分值rsd为1. 27 %，表明仪器精密度良好。

2.7 重复性实验

取肠泰颗粒（批号071224）5份,每份6 g,按供试品溶液制备方法,制得供试品溶液, 按上述色谱条件进行测定,测得供试品中含齐墩果酸含量rsd=1.31,表明重复性较好。

2.8 稳定性实验

取同一供试品溶液，分别在0，3，6，9，12 h进样，峰面积积分值rsd为2.37 %，表明样品稳定性良好。

2.9 回收率测定

取肠泰颗粒（批号071224）6份，每份3 g,分别加入精密称取的齐墩果酸1.035 mg ,按“2.3”项下同法处理。按上述色谱条件进行测定。计算其回收率。结果见表1。表1 齐墩果酸回收率实验结果（略）

2.10 含量测定

取4批样品,按上述“2.3”方法操作,制备供试品溶液 ,按上述色谱条件进行测定。结果见表2。表2 齐墩果酸含量测定结果（略）

3 讨论

流动相曾选择乙腈-磷酸盐缓冲液体系、甲醇-水体系［5］、分离效果均不好，最后选用甲醇-水-冰乙酸-三乙胺体系，分离效果最好，达到基线分离。

实验过程中，曾比较了索氏提取与超声提取，结果含量基本一致，但索氏提取耗时较长，超声提取时间较短，易操作，所以采用超声提取的方法。

【参考文献】

［1］田丽婷，马龙，堵年生.齐墩果酸的药理作用研究概况［j］.中国中药杂志，2002，12（27）：884.

［2］杜瑜,李焕德.齐墩果酸的研究进展［j］.中国药房，2006，17（4）：304.

［3］王德仁.齐墩果酸研究新进展［j］.天津药学，2003，15（3）：56.

［4］兰保强, 邱宏聪,覃 潇.hplc法测定复方护肝颗粒中齐墩果酸的含量［j］.中医药学报,2007,35(1):47.

［5］邹盛勤.,rp-hplc法同时测定不同采收期连翘中乌索酸和齐墩果酸的含量［j］.沈阳药科大学学报,2007,24(3)：164.