微生物实验室纯培养实验教学设计

摘 要：微生物实验室培养是进行微生物研究和利用的基础，其基本操作技术是学生必备的技能之一。通过实验使学生能更好地掌握无菌接种技术及纯化培养等知识，具有极为重要的公共卫生学意义。本文在此重点探讨微生物实验室纯培养实验教学设计。

关键词：微生物培养 教学目标 实施设计

微生物实验室纯培养在生物技术中是一个重要的操作实验，课题涉及内容多、范围广，实验难度很大。为了使学生更好地了解实验中的许多工作，包括仪器使用、菌液稀释、菌株移植、接种等，都要在无菌的或不被污染的条件下进行，才能保证做到纯粹培养成功，笔者结合教学实际谈谈对本课题的教学设计。

一、教学目标确立

依据课程内容要求，确立本课题教学目标见表1。

表1

二、教学实施设计

1.制订实验计划

依据课程内容要求，确立本课题教学安排见表2。

表2

2.纯化大肠杆菌的原理

微生物的纯培养，选用平板划线法或稀释涂布平板法，在牛肉膏蛋白胨培养基上操作，经培养后可分离得到单个细胞繁殖而来的、有一定形态结构的子细胞群体，即菌落。

3.准备实验材料

本课题所用材料、仪器及药品见表3。

表3

实验材料 大肠杆菌 配制系列稀释菌液

实验仪器和设备 培养皿、试管、酒精灯、试管架、移液管、胶头滴管、接种环、涂布器、恒温箱、无脂棉、玻璃棒、消毒棉球、超净工作台 培养皿、试管、移液管、接种环、涂布器等灭菌（已灭菌备用）

实验药品 牛肉膏、蛋白胨培养基200ml、无菌水150ml 提前配制（灭菌备用）

4.实验操作

（1）指导实验操作。本课题实验可按照下面实验流程进行操作：

超净工作台倒平板、接种培养箱纯化培养。

（2）接种法。一般是无菌培养基在水浴锅加热融化后冷却至50℃左右倒平板。操作必须始终在酒精灯火焰旁进行，每皿倒入15ml左右并且不要将皿盖完全打开，冷却后的平板要倒置。

平板划线法（图1）：即用接种环将菌体沾在平板培养基上。微生物细胞随画线次数的增多而减少，将微生物单个地分离，并最终形成标准的菌落。在画线操作时应注意：一是用接种环取菌种之前、每次画线之前和画线结束都要进行灼烧灭菌，灼烧后要在酒精灯附近冷却后再操作；二是画线时不要划破培养基，如果采用分段画线法操作从第二次操作应总在上一次画线末端开始，首尾区不能相连；三是操作必须始终在酒精灯火焰旁进行。

稀释涂布平板法（图2）：即先将菌液用无菌水进行一系列梯度为（如10-1，10-2，10-3）稀释液，用无菌玻璃涂棒将不同稀释度的菌液均匀地涂布在平板上。聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。在涂布操作时应注意：一是配制系列梯度稀释液必须用无菌水配制；二是配制系列梯度稀释液和转移菌液以及涂布过程等必须都在酒精灯火焰旁进行。

（3）培养操作。 将接种后的培养基和一个未接种的培养基（空白）放入37℃恒温箱中，培养18～24h后，观察并记录。这期间安排学生代表或实验小组长进行定期观察，并做好记录，以便及时让其他学生观察到自己的实验成果。

三、问题讨论

引导学生理解在微生物的培养中应保持培养物纯净的关键性。让学生在体验实验操作中，体会无菌操作在实验中的重要性。让学生认识要在理解实验原理的前提下再进行操作实验的必要性。让学生观察、展示实验成就，分析实验结果，并指导学生回顾实验中的成败原因，进行讨论总结。

（作者单位：海南省技师学院生物制药工程系）