高效液相色谱法测定大豆异黄酮片中的大豆异黄酮的含量

[摘 要]目的：建立测定大豆异黄酮片中大豆异黄酮的含量的方法。方法：样品采用80%甲醇溶液提取，液相色谱条件：C18色谱柱，流动相：甲醇：0.05mol/L乙酸铵，流速1.0ml/min，紫外检测器，波长260nm[1]。结果：该方法测得黄豆苷、染料木苷、黄豆苷原、金雀异黄素的平均回收率为99.73%、100.47%、98.62%、98.78%，RSD为0.91%、0.87%、1.23%、1.17%。结论：该方法样品提取简便，测定结果准确高，精密度好，适合大豆异黄酮片中大豆异黄酮的检测。

[关键词]大豆异黄酮片 大豆异黄酮 高效液相色谱

中图分类号：TD353.5 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）02-0326-02

大豆异黄酮是一类从大豆中分离提取的具有抗氧化、抗肿瘤、改善心血管功能的主要活性成分，具有防止骨质疏松、降低胆固醇、免疫调节、改善妇女更年期综合症等药理作用。随着人们保健意识的加强，大豆异黄酮将成为医药、保健品、食品等方面多功能产品。目前，大豆异黄酮的重要生理功能和广泛应用前景已受普遍关注。

一、材料和方法

1.材料

黄豆苷（Daidzin，D）、染料木苷（Genistin，G）、黄豆苷原（Daidzein，De）、金雀异黄素（Genistein，Ge）标准品：上海同田生物技术有限公司，甲醇 （HPLC）：默克公司，醋酸铵、冰醋酸均为分析纯，大豆异黄酮片（样品，批号：S001、S002、S003），水为重蒸馏水。

2.仪器

戴安高效液相色谱仪：P680泵、UV170u紫外检测器，超声波清洗器。

3.色谱条件

3.1 色谱柱：不锈钢柱，内径4.6mm，长250mmC18柱，填料粒径10μm。

3.2 流动相：甲醇+0.05mol/L乙酸铵，pH4.6（46+54，V/V）。

3.3 流量：1.2ml/min。

3.4 进样量：20.0μL。

4.样品制备

取20片大豆异黄酮片，用研钵研碎，准确称取1.0g试样，加50ml的80%甲醇溶液超声提取30min，上清液抽滤，残渣再用80%甲醇溶液洗，洗液一并抽滤，定容至100.0mL，过0.45μm滤膜，待测。

5.混合标准曲线的制备

5.1混合标准储备液 称取黄豆苷、染料木苷、黄豆苷原、金雀异黄素对照品用甲醇溶解并定容至10mL。

5.2混合标准曲线溶液 分别取混合标准储备液0.01、0.05、0.10、0.30、0.50、1.25mL，用甲醇定容至10mL。计算各自的浓度。

二、结果和数据

1.混合工作曲线 分别吸取一系列浓度范围的对照品混和溶液，进样量20μ L，按1.3项色谱条件注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

2.精密度试验 分别精密吸取对照品溶液20μL，按1.3项色谱条件注入液相色谱仪，测定峰面积，结果显示：黄豆苷、染料木苷、黄豆苷原、金雀异黄素的RSD（n=5）分别为1.07%、0.98%、1.41%、1.95%，表明仪器的精密度良好。

3.稳定性试验 精密吸取供试品溶液20 μL，每隔4 h按1.3项色谱条件进样一次，共5次，测定峰面积，结果显示：黄豆苷、染料木苷、黄豆苷原、金雀异黄素的RSD分别为1.74%、1.45%、1.56%、1.93% ，表明20h内测定结果稳定性良好。

4.重复性试验 取同一样品5份，按1.3项色谱条件进样，测定4种大豆异黄酮含量，得出黄豆苷、染料木苷、黄豆苷原、金雀异黄素的RSD分别为1.85%、1.61%、1.94 %、1.87%，表明本方法的重复性良好[3]。

5.回收率试验 向已知浓度的样品溶液中等量加入黄豆苷0.2mg/mL、染料木苷0.4 mg/mL、黄豆苷原0.1 mg/mL、金雀异黄素0.1 mg/mL的混合标准品溶液（n=5），进行测定计算回收率，测得5次黄豆苷、染料木苷、黄豆苷原、金雀异黄素的平均回收率为99.73%、100.47%、98.62%、98.78%，RSD为0.91%、0.87%、1.23%、1.17%。

6.样品的测定 按1.4的方法对样品进行处理制备供试品溶液并测定，测定结果见表3

三、讨论

实验结果表明，本法快速、简便、准确性好，灵敏度高，样品不需要特殊处理，能够准确的测定大豆异黄酮片中大豆异黄酮的含量，适合大豆异黄酮片中大豆异黄酮的检测。

参考文献：

[1] 胡晓娟 苏惠.保健品原料中大豆异黄酮的HPLC法测定.光谱实验室.2007，24（2）：268―270

[2] 王万能，全学军，付玉洁，等.超声波循环提取大豆异黄酮的研究[J].西南农业大学学报：自然科学版，2005，27（4）：554-556，564.

[3] 吴周和，周丽明.反相高效液相色谱法测定豆制品中两种异黄酮苷元的含量[J]. 分析科学学报，2006，22（3）：303―305.