结核培养中有关污染的几点看法

改良罗氏培养基制作过程中的几个细节

培养基所用器皿都应清洗干净，高压消毒。尽量避免使用结构复杂的仪器进行操作，例如灌注培养液不适合用可调定量加液器，因其拐角处易滋生细菌。

鸡蛋要一个一个清洗，特别是农家喂养的土鸡蛋。洗净鸡蛋面上的污垢后用75%酒精浸泡20～30分钟，取出，擦干，开口，收集鸡卵液，搅匀。通过消毒的纱布过滤。

培养液中添加孔雀绿溶液要足量，1000ml培养液加2%孔雀绿溶液20ml，它能很好地抑制杂菌生长。另一方面，孔雀绿溶液不能长期保存，如出现沉淀或颜色变浅，应立即停止使用，重新配置新鲜溶液。

制作的培养基要有一个30°斜面，并且培养液不能离管口太近，要保持一定的距离。

房间内提前用紫外线照射数小时灭菌。操作者要着口罩、帽子、工作服、手套严格进行无菌操作。

倒好的培养基放入蒸汽凝固灭菌器内，经85℃凝固灭菌50分钟。

从灭菌凝固器内取出制作好的培养基时，要在灭菌凝固器内再一次塞好每只培养管口(因为凝固过程中大部分培养管中橡皮塞因温度高会脱出管口)。不要把没有塞好的培养管取出待塞。

冷却后的整批培养基或抽取其中一部分，至于37℃孵育24小时进行无菌试验，对质量不合格地培养基，如气泡、干涸、量不足及发生污染等，必须废弃。

培养基放冰箱4℃保存，1次培养的培养基仅供1个月内使用。

培养操作过程中的几个细节

吸取2ml痰标本至无菌试管中，视样本性状，加入1～3倍体积2%H2SO4前处理液，脓性标本处理液一定不能少于3倍。脓性标本前处理不当很容易在今后培养过程中发生污染，造成培养失败。

处理过的标本置涡旋振荡器上振荡1分钟，标本充分混匀，室温放置。整个标本处理时间不得超过20分钟。

之后，取混匀的上液接种(不取管底粘稠大杂菌未完全清除掉的部分)。每只培养管接种量在0.1ml左右，大约1.5滴，不能太多，过多也会造成培养失败。

每周看1次结果都要重复检查培养管口塞是否塞紧，一旦发现管口松动，要立即塞好，以免在培养箱中发生污染。

小 结

早期发现和及时治疗结核病感染患者以及切断传染源是结核病防治工作中的重要环节，结核分枝杆菌培养是结核实验室诊断中最具决定作用的手段。日常工作当中，经常有些污染菌生长会影响其结果的分析，进一步的鉴定及药敏试验，这对于培养时间长的分枝杆菌培养来说会严重影响了患者的及时诊断及治疗。因此，对其导致污染的诸多相关因素必须要有十分清楚的认识，确立有效防范对策确保获得最高的阳性率，以防漏诊。

结核菌的繁殖期比其他细菌长，生长缓慢(一般需2～4周长出肉眼可见的菌落，8周无细菌生长才可以发出无分枝杆菌生长的报告)，在其过程里如果培养中途出现污染，势必造成整个过程失败。

检验工作在方法正确的前提下，更要认真仔细。培养物染率应在2%～5%范围内，污染率过高，提示培养基灭菌不佳，标本前处理、接种等环节有误，应当分析原因，采取相应措施。尽可能的减少污染，及时发出培养报告。