超高效液相色谱法(UPLC)测定苯磺酸氨氯地平片含量方法学验证

【摘 要】 本方法采用超高效液相色谱法（UPLC）进行苯磺酸氨氯地平片含量测定，并进行了方法学研究，线性关系（线性方程为y=20870x +731，r=0.9999）、 仪器精密度（RSD为0.3%）、回收率（100.41%，RSD为0.5%）、专属性（空白辅料对测定没有干扰）、定量限（1.74ng）、稳定性（于6小时内稳定）、重复性（五次测定结果RSD为0.57），结果表明，苯磺酸氨氯地平含量测定方法可行。

【关键词】 超高效液相色谱法 UPLC 苯磺酸氨氯地平片

苯磺酸氨氯地平片国家标准[1]中，含量测定方法为高效液相色谱法，本文拟对超高效液相色谱法方法进行考察，以期获得更高效的含量测定方法。

1 仪器设备

WATERS ACQUITY UPLC色谱系统（详见“4、色谱系统”）

2 试剂试药

2.1 对照品

苯磺酸氨氯地平对照品（Amlodipine Besylate，060195-QCS-13），辉瑞制药有限公司（大连-中国）提供。

2.2 供试品

苯磺酸氨氯地平片5.0mg，辉瑞制药有限公司（大连-中国）提供。

2.3 试剂试药

KH2PO4（分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号090507）。

甲醇（色谱纯，天津康科德科技有限公司，批号20080714）

2.4 色谱系统

泵：Binary Solvent Manager

自动进样器：Sample Manager

检测器：TUV Detector

色谱柱：ACQUITY UPLC HSS C18（1.8μm）

流动相：A：0.015mol/LKH2PO4；B：甲醇（梯度系统见表1）

3 苯磺酸氨氯地平含量测定方法学验证

3.1 线性关系考察

精密称取苯磺酸氨氯地平对照品约35mg，置200ml量瓶中，加溶剂（0.015mol/LKH2PO4：甲醇=45：55）溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取1ml、5ml、10ml、15ml、20ml，置100ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为系列标准溶液，各取5μl注入液相色谱仪中。以苯磺酸氨氯地平浓度（x，μg/mL）为横坐标，以其对应的的峰面积（y）为纵坐标，绘制标准曲线y=20870x +731线性方程相关系数r=0.9999，结果表明苯磺酸氨氯地平在该浓度范围内，线性关系良好。

3.2 提取回收率

按比例分别精密称取苯磺酸氨氯地平对照品及空白辅料适量，制成处方比例80%、100%、120%的供试品，加溶剂适量，振摇30分钟，加溶剂定容至刻度，摇匀；3000rpm离心15min，精密量取上清液5ml至25ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，0.22μm滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液，平均回收率为100.41%，9份样品回收率RSD（%）为0.5%。

3.3 精密度

将“线性关系考察”项下对照品溶液进样5针，记录峰面积。RSD为0.3%，结果可见精密度良好。

3.4 专属性

取空白辅料200mg，置于100ml量瓶中，加水10ml分散后，加溶剂稀释至刻度，摇匀，于3000rpm离心15min，取上清液5ml置25ml量瓶中，加溶剂至刻度，混匀，摇匀，0.22μm滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液，结果见图2。另取线性关系项下图谱，见图1，由图1、2对比可知，本方法专属性良好。

3.5 定量限

将对照液稀释至色谱峰信噪比为10：1，其定量限为：1.74ng

3.6 重复性

取本品（批号：95805053）5片，置500ml量瓶中，加水50ml使溶散后，加溶剂50ml，振摇30分钟，加溶剂至刻度，混匀，3000rpm离心15分钟，取上清液5ml，置于25ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，混匀，0.22μm滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液，重复操作6次，记录峰面积，RSD为0.57%，结果表明本方法重复性良好。

3.7 稳定性

取对照品溶液，在室温放置0、2、4、6小时分别进样测定，记录峰面积，RSD为0.55%结果可知溶液在室温放置6小时基本稳定。

4 结语

本方法测定苯磺酸氨氯地平片含量快速、简便，且精密度良好，适合大批量样品的检测工作。

参考文献：

[1]WS1-（X-010）-2002Z，苯磺酸氨氯地平片国家药品标准[S].