运用高效液相色谱法分析苜蓿田除草剂残留

摘 要：长残留除草剂大量应用于苜蓿田，对于后茬作物的危害严重。试验运用高效液相色谱法，分析肇东苜蓿田除草剂残留，探讨苜蓿除草剂残留的筛查检测技术，确立快速、有效的筛选方法，为正确评价长残留除草剂对苜蓿根系生长环境的影响提供理论参考。

关键词：肇东苜蓿；高效液相色谱法；除草剂残留

中图分类号 S54 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2013）15-95-02

Analysis of Herbicide Residues Using High-performance Liquid Chromatography（HPLC） in Alfalfa Field

Mu Dan et al.

（Jiamusi University，Jiamusi 154007，China）

Abstract：Long residue herbicides used in alfalfa field in great quantities are serious harm to subsequent crop. The test using high performance liquid chromatography（HPLC） analyzed Zhaodong alfalfa field herbicide residues，discussed screening tests technology of herbicide residue，and established a rapid，effective screening method. It should provide theoretical reference for correct evaluation of long herbicide residues effect on alfalfa root growth environment.

Key words：Medicago sativa L. cv. Zhaodong；High performance liquid chromatography；Herbicide residues

苜蓿是栽培面积最大的豆科牧草之一，我国苜蓿栽植面积达133.3万hm2。随着苜蓿栽植面积的扩大和产业化进程的加快，为了提高其质量和产量，进行苜蓿田杂草防除成为其日常养护管理的关键环节。氯嘧磺隆、咪唑乙烟酸、异恶草酮是北方苜蓿田广泛应用的长残留性除草剂[1-3]。氯嘧磺隆以杀草谱广、高度安全、防效显著等特点，成为苜蓿田杂草防除的常用化学药剂。但由于氯嘧磺隆在土壤中的长残留性，对后茬敏感作物毒害严重，影响苜蓿田的轮作换茬，对苜蓿田环境造成污染。本试验拟运用高效液相色谱法，分析肇东苜蓿田除草剂巨能20%氯嘧磺隆WDG残留，探讨苜蓿除草剂残留的筛查检测技术，确立快速、有效的筛选方法，为正确评价长残留性除草剂对苜蓿根系生长环境的影响程度提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 供试植物 肇东苜蓿（Medicago sativa L. cv. Zhaodong）是20世纪30年代由外省引种到黑龙江省肇东县的紫花苜蓿，在当地栽培驯化多年后定名肇东苜蓿[4-5]。肇东苜蓿植株多直立，花紫色，颜色深浅不一，叶片大小和叶形不整齐[6]。该品种抗寒性强，-33℃低温下仍可露地越冬。

1.2 试剂与设备 试验试剂如下：甲醇、色谱纯、双蒸馏水、磷酸、磷酸二氢钾、析纯、巨能20%氯嘧磺隆WDG、氯嘧磺隆标准品等。巨能20%氯嘧磺隆WDG属内吸性传导型除草剂，主要通过杂草根、芽吸收并迅速传导，控制杂草的生长。

试验设备如下：过滤器（滤膜孔径为0.40μm）、微量进样器、色谱工作站（N3000双通道色谱数据工作站）、超声波清洗机、Prominence LC-20AB型高效液相色谱仪。

1.3 试验方法

1.3.1 提取方法 肇东苜蓿采集样品粉碎标准为通过420μm网筛，称取肇东苜蓿采集粉碎样品10g，加水20mL，加入丙酮100mL，均匀搅拌3min，采用涂布厚硅藻土1cm滤纸，过滤至减压浓缩器中。滤纸上残留物取出，再加入丙酮50mL，搅拌3min，过滤到减压浓缩器中，浓缩（

减压浓缩器残留物中加入正己烷50mL，移入200mL分液漏斗，加入正己烷饱和乙腈80mL，振荡器振荡5min，静置2min，振荡器振荡后乙腈层移入200mL分液漏斗中。余下的正己烷层加入正己烷饱和乙腈50mL，混合均匀，静置2min，分液漏斗中乙腈层移到减压浓缩器中除去乙腈（

1.3.2 净化方法 液相色谱不锈钢色谱管加入合成硅酸镁（悬浮丙酮、甲醇混合溶液）5g，该色谱管上端加入无水硫酸钠5g，液相色谱不锈钢色谱管放出丙酮：甲醇（19∶1），溶至柱上端仅有少量丙酮：甲醇（19∶1）溶液。液相色谱不锈钢色谱管加入高效液相色谱分析试验溶液，加入丙酮：甲醇（19∶1）溶液50mL，流出液弃掉。然后加入丙酮：甲醇（19∶1）溶液100mL，流出液收集到减压浓缩器（

1.3.3 测定方法 巨能20%氯嘧磺隆WDG试样用色谱纯（HPLC级试剂）甲醇溶解，以甲醇和蒸馏水（新蒸二次蒸馏水，温度25℃真空脱气）为流动相，高效液相色谱仪Prominence LC-20AB使用C18为填料，对巨能20%氯嘧磺隆WDG试样中的氯嘧磺隆进行高效液相色谱分析测定。

2 结果与分析

2.1 巨能20%氯嘧磺隆WDG液相色谱流动相选择 巨能20%氯嘧磺隆WDG分析时测得，流动相：乙腈∶水∶磷酸=50∶50∶0.01（V/V）体积比，流速为1.0mL/min。巨能20%氯嘧磺隆WDG分析时间短，液相色谱出峰对称，保留时间适合，样品加入磷酸促使巨能20%氯嘧磺隆WDG与杂质分开。

2.2 巨能20%氯嘧磺隆WDG液相色谱检测波长选择 巨能20%氯嘧磺隆WDG液相色谱采用峰面积法或峰高法定量测定。采用相关方法确定所测主体是巨能20%氯嘧磺隆WDG；样品纯度高时，采用顶空色谱法测残留溶剂；运用离子色谱测定相关有机酸，巨能20%氯嘧磺隆WDG液相色谱经扫描在240nm有强吸收峰，液相色谱检测波长为240nm。

2.3 巨能20%氯嘧磺隆WDG液相色谱检测方法的线性相关性 巨能20%氯嘧磺隆WDG在液相色谱检测波长240nm处，移取巨能20%氯嘧磺隆WDG标样溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL，配制5个浓度巨能20%氯嘧磺隆WDG溶液稀释至50mL，然后分别进样。获得巨能20%氯嘧磺隆WDG线性方程为y=676.55x+3625.5，相关系数为r=0.999 6。

2.4 巨能20%氯嘧磺隆WDG液相色谱检测加样标回收率 称取巨能20%氯嘧磺隆WDG各样品，加入定量标准品，测定5个样品加标回收率（见表1）。由表1可知，巨能20%氯嘧磺隆WDG标样加入量在线性范围内，巨能20%氯嘧磺隆WDG标样与样品加入量合理，说明液相色谱检测方法可行。

表1 巨能20%氯嘧磺隆WDG液相色谱检测加标样回收率

[编号＼&加入量（mg）＼&实测量（mg）＼&回收率（%）＼&1＼&1.06＼&1.04＼&98.11＼&2＼&1.12＼&1.15＼&102.68＼&3＼&1.24＼&1.23＼&99.19＼&4＼&1.37＼&1.38＼&100.73＼&5＼&1.44＼&1.43＼&99.31＼&]

2.5 巨能20%氯嘧磺隆WDG液相色谱检测方法精密度测定 巨能20%氯嘧磺隆WDG液相色谱平行检测5次，得平均值（X）为0.99；标准偏差（S）为0.065；变异系数（C・V/%）为6.4。巨能20%氯嘧磺隆WDG液相色谱精密度测定结果在允许误差范围，该检测方法得到的定量数据有效。

3 结论

肇东苜蓿田巨能20%氯嘧磺隆WDG残留高效液相色谱分析试验方法有较高的准确度和精密度，呈线性相关。该试验方法操作简便、快速，是肇东苜蓿田巨能20%氯嘧磺隆WDG残留的较为理想的分析方法。

参考文献

[1]叶发兵，王建明，欧阳天贽，等.磺酰脲类除草剂在土壤中的残留研究动态和趋势[J].湖北农业科学，2002（5）：88-90.

[2]李树春，杨芳，王险峰.如何预防和解救长残留除草剂药害[J].现代化农业，2010（10）：34-35.

[3]穆丹，梁英辉，薛勇，等.苜蓿除草剂生物降解的微生物计数培养基配制[J].安徽农学通报，2013，19（8）：13-14.

[4]梁英辉，穆丹，薛勇，等.肇东苜蓿田病害种类及发生流行规律调查与综合防治技术试验研究[J].消费导刊，2009（9）：218-219.

[5]薛勇，吴玉德，李春丰，等.肇东苜蓿除草剂安全性试验研究[J].中国农学通报，2006，22（12）：342-344.

[6]薛勇，穆丹，梁英辉，等.三江平原肇东苜蓿田病害种类及综合防治技术[J].当代畜牧，2009（9）：43-45. （责编：陶学军）