我国油菜品种硫代葡萄糖苷含量分析

摘要：转向双低（低芥酸、低硫苷）油菜的改革,芥酸含量由40%-50%降低到1%左右,使食用油的品质发生根本的改变,使油菜硫苷含量由传统油菜中的100μmol/g饼－150μmol/g饼降低到双低油菜的30μmol/g饼以下,甚至更低,使原来不宜直接用作饲料的菜籽饼粕成为了能被动物直接食用的优质饲料,大大提高了菜籽饼粕资源的利用率。

关键词：油菜；硫苷；双低

中图分类号：S5 文献标识码：A文章编号：1672-3198（2011）05-0288-01

1 实验内容

本实验的主要研究内容为：对我国2010年油菜品种硫代葡萄糖苷含量分析。

为了精确的了解我国2010年品种油菜籽硫苷含量状况,本实验采用HPLC法对全国各主要产区的油菜品种硫苷进行了测定。

①主要设备和仪器：Anginent-1100高效液相色谱仪,高速离心器,旋涡混合器,十万分之一天平,超声波发生器,移液枪,培养箱,超纯水。

②主要试剂：色谱甲醇,丙烯基内标,甲酸米唑,超纯水,pH4醋酸钠缓冲液,硫酸酯酶,20%色谱乙腈。

③试样的制备：油菜籽取样按GB5491执行,如果样品中的水分及挥发物含量超过10%,应在45℃左右的条件下通风干燥。参照国家标准GB/T11762-2006筛选干燥的油菜籽样品,使样品干净、均一,在微型粉碎机中粉碎,过0.42mm筛。

④称样：分别称取200mg（精确到1mg）粉碎的样品至A、B两支离心管中。

⑤硫苷提取：将A、B两支离心管置于75℃水浴1min,加入2mL沸甲醇溶液后,立即加入200μL 5mmol/L内标溶液至A管中,200μL 20mmol/L内标溶液至B管中。在旋涡混合器上旋涡混合（约5s）,在50℃条件下超声波5min,取出离心管,旋涡混合器上旋涡混合（约5s）,在5000g的相对离心力下离心3min,分别转移上清液至另外两支A＇、B＇10mL刻度试管中。再加2mL沸甲醇溶液至原A、B管中,旋涡混合器上旋涡混合（约5s）,在50℃条件下超声波5min,再在旋涡混合器上旋涡混匀后,在5000g的相对离心力下离心3min,分别转移上清液至原A＇、B＇管中。用水调节A＇、B＇管中的提取液至5mL,混匀。

⑥离子交换柱的制备：每一个试样的提取液准备一支聚丙烯离子交换柱,垂直置于试管架上。取0.5mL充分混匀的离子交换树脂至每一离子交换柱中,注意不使树脂粘附在管壁。待液体排干,取2mL甲酸咪唑溶液冲洗树脂后,分别用1mL水冲洗树脂两次,每次均让水分排干。

⑦纯化、脱硫酸根：移取1mL提取液缓缓加入至已准备好的微柱,注意不能搅动树脂表面,待液体排干后,再分别加两次1mL醋酸钠溶液,每次加入后让液体排干。加入100？L硫酸酯酶溶液（即配即用）至微柱,在35℃±1℃条件下反应16h±1h。用1mL水冲洗微柱3次,洗脱液收集于小试管中。充分混匀洗脱液,将其定容至5mL,用0.45μm的微孔滤膜过滤,待进样。

2 实验思路

①关键问题：

应用高效液相色谱仪测样品中各种硫苷的含量及其总量。

②解决思路

用甲醇提取油菜中的硫苷,经阳离子交换树脂,加硫酸酯酶在36度培养16小时,再用超纯水洗脱,将洗脱液用微孔过滤膜过滤,收集滤液经高效液相色谱仪测样品中各种硫苷的含量及其总量。

3 结果与分析

表1 油菜中硫代葡萄糖昔的含量

由上表1可知：（1）在不同类型的油菜籽中,甘蓝型油菜含硫代葡萄糖昔总量最高,达87μmolg-1,其次是白菜型油菜,为45μmolg-1,含量最低者是芥菜型油菜,为41μmolg-1。（2）角果形成后,随着不同的成熟阶段,种子中硫代葡萄糖昔的总量迅速增加,愈到成熟的后期阶段,总量增加的速度愈快。这种结果显示,各种类型的油菜在种子成熟的后期,合成速度最快,从而使硫代葡萄昔在种子中迅速积累。

近年来,随着育种技术的不断进步和育种工作的深入开展,我国的油菜品种质量有了大幅度的改善,然而与国外比较,我国还存在很大的差距。加拿大是世界上率先进行双低油菜育种的国家,在1983年就已经基本实现了油菜的双低化,在1985年,当地大部分油菜品种的硫苷含量以降低到20μmol/g,而我国目前的品种质量几乎与加拿大1985年的双低化程度相当,这说明我国油菜双低化育种还存在着很大的空间,有待我们的育种专家和全国的油菜生产者们共同努力来提高油菜品质质量。

参考文献

［1］李锋,张春雷,李光明.油菜硫苷含量组分含量及抑菌活性研究［J］.武汉植物学研究,2006.

［2］李培武,赵永国,张文.中国甘蓝型油菜硫苷含量及组份分析［J］.中国农业科学,2005.

［3］吴谋成,况成尘,黄伟.用液相制备色谱从菜籽中分离、纯化制备硫代葡萄糖苷［J］.色谱,1995.

［4］李培武,杨湄,李光明.油菜硫甙测试技术研究及进展［Z］.