免疫治疗不明原因习惯性流产对封闭抗体表达的影响及意义

[摘要] 目的 探讨免疫治疗不明原因习惯性流产（URSA）对封闭抗体（BA）表达的影响及临床意义。 方法 设110例URSA患者为治疗组，选择健康对照组90例及妊娠对照组80例，检测和比较三组BA、IL-6、IL-10、CD4+CD25+highTreg，采用免疫治疗BA阴性URSA患者。 结果 治疗前治疗组BA阳性率、IL-6、IL-10、CD4+CD25+highTreg显著低于健康对照组、妊娠对照组（P＜0.05）；治疗后治疗组BA阳性率显著高于治疗前（P＜0.01）；IL-6、IL-10、CD4+CD25+highTreg与健康对照组无显著差异（P＞0.05）；治疗组96例BA阳性者中94例（97.92%）成功妊娠，显著高于BA阴性患者（P＜0.01）。 结论 URSA与免疫因素有关，通过免疫治疗能够有效提高URSA患者BA阳性率及妊娠成功率。

[关键词] 不明原因习惯性流产；封闭抗体；免疫治疗

[中图分类号] R714.21 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2012）02-0027-02

Significance and effect of immunotherapy on blocking antibody expression in unexplained recurrent spontaneous abortion

DING Li ZHOU Lei

Department of Obstetrics and Gynecology, People's Hospital of Beilun District in Ningbo City in Zhejiang Province, Ningbo 315806, China

[Abstract] Objective To investigate the significance and effect of immunotherapy on blocking antibody (BA) expression in unexplained recurrent spontaneous abortion (URSA). Methods Study group (A) had 110 cases of URSA, healthy group (B) had 90 healthy women, and pregnant group (C) had 80 healthy pregnant women. The BA, IL-6, IL-10, CD4+CD25+highTreg of 3 groups were detected and compared. The cases of BA negative URSA were treated by immunotherapy. Results Before immunotherapy, the BA, IL-6, IL-10, CD4+CD25+highTreg of A group were significantly lower than B and C (P＜0.05). After 3 courses, the BA of A were significantly higher than before treatment (P＜0.01), IL-6, IL-10, CD4+CD25+highTreg of A group were similar to B (P＞0.05), but were higher than before treatment (P＜0.05). There were 96 cases of BA positive in A after treatment,94 cases (97.92%) were successful pregnancy, and the pregnancy success rate was significantly higher than the cases of BA negative (P＜0.01). Conclusion URSA is related to immune factors. Immunotherapy could improve the BA positive rate and the pregnancy success rate of women with URSA.

[Key words] Unexplained recurrent spontaneous abortion; Blocking antibody; Immunotherapy

复发性自然流产病因复杂，其中40%~60%是不明原因习惯性流产（unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA）。目前认为URSA与免疫因素相关，封闭抗体（blocking antibody，BA）是维持正常妊娠的关键，约80%的URSA患者存在BA缺乏[1]。本研究通过观察URSA患者BA表达及血清学指标，并采用主动免疫的方式进行治疗，观察URSA患者妊娠结局，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2009年1月～2010年9月我院收治的URSA的患者110例为治疗组，年龄24～41岁，平均年龄（31.45±5.28）岁；选择同期体检健康非妊娠妇女90例为健康对照组，既往均有1次妊娠史，年龄23～40岁，平均年龄（29.67±6.39）岁；选择同期我院收治正常早孕要求人工流产妇女80例为妊娠对照组，孕周8～12周，年龄22～38岁，平均年龄（27.95±5.97）岁，本次妊娠无先兆流产征象。三组均无自然流产、死胎、死产史，排除染色体、生殖器解剖结构、内分泌异常，感染等，排除自身免疫性疾病，一般资料差异无统计学意义（P＞0.05），具可比性。

1.2 研究方法

治疗组及健康对照组、妊娠对照组于治疗前后清晨空腹抽取肘静脉血5mL，别用采酶联免疫吸附法测定BA、IL-6、IL-10；FACSCalibur流式细胞仪检测CD4+CD25+highTreg。BA、IL-6、IL-10试剂盒由美国Biosource公司生产，CD4+、CD25+指标荧光抗体由美国Becton Dickinson公司生产。

1.3 治疗方法

在无菌条件下将配偶肘静脉血30 mL提取、洗涤淋巴细胞并浓缩为（20～40）×106/mL。将1 mL配偶淋巴细胞悬液于患者手臂分6～10点接种，2～3周接种1次，4次为1个疗程。每个疗程后检测BA，阳性者鼓励其于6个月内受孕，确定受孕后维持治疗至孕20周，阴性者进行下一疗程治疗，3个疗程后BA阴性患者指导受孕。

1.4 统计学处理

数据采用SPSS16.0软件包进行分析，计数资料采用χ2检验，计数资料以均数±标准差（χ±s）表示，采用方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组BA检测结果比较

治疗前治疗组BA阳性率显著低于健康对照组、妊娠对照组（χ2=7.865，7.213，P＜0.01），两对照组间差异无统计学意义（χ2=1.658，P＞0.05）；治疗3个疗程后，治疗组BA阳性率较治疗前显著升高（χ2=6.974，P＜0.01）。见表1。

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2.2 三组IL-6、IL-10、CD4+CD25+highTreg检测情况

治疗组治疗前外周血IL-6、IL-10、CD4+CD25+highTreg显著低于健康对照组（t=4.738，4.138，3.785，P＜0.05）和妊娠对照组（t=4.865，4.485，4.012，P＜0.01）；两对照组间有显著差异（t=3.146，3.067，3.023，P＜0.05）；治疗后治疗组IL-6、IL-10、CD4+CD25+highTreg与健康对照组无显著差异（t=1.325，1.267， 1.089，P＞0.05），而低于妊娠对照组（t=3.246，3.107，3.086，P＜0.05），高于治疗前（t=4.868，4.368，4.142，P＜0.01），见表2。

2.3 妊娠结果情况

3个疗程后治疗组96例BA为阳性，均在6个月内受孕，其中94例（97.92%）成功妊娠，2例发生早期流产；14例阴性均受孕，2例（14.29%）成功妊娠，12例发生早期流产。两组妊娠成功率间差异有高度统计学意义（χ2=25.894，P＜0.01）。

3 讨论

母体产生的BA能阻断机体内对胚胎的主动免疫作用，保护胚胎免受排斥，成功存活并生长发育。本研究结果发现URSA患者BA阳性率仅为20.91%，显著低于同期健康对照组及妊娠对照组，说明BA缺乏与URSA的发生存在相关性。针对URSA妇女BA的缺乏，通过提纯浓缩后的配偶淋巴细胞，主要是T淋巴细胞，以皮下接种的方式激活患者体内体液免疫功能，对T淋巴细胞产生抗体。患者再次受孕后，抗体能识别来自配偶的抗原并与之结合产生封闭作用，从而起到保护胚胎的作用。本研究进行3个疗程的免疫治疗后有96例患者BA为阳性，阳性率为87.27%，显著高于治疗前，说明免疫治疗能有效提高患者体内BA水平。同时阳性患者妊娠成功率达97.92%显著高于阴性组，证明BA避免因免疫排斥反应造成的早期胚胎的死亡及流产；对BA阴性的URSA患者进行主动免疫治疗可以有效的提高患者的妊娠成功率。

研究认为辅助T淋巴细胞Th1/Th2的调节紊乱与URSA的发生存在相关性[2]。Th1型细胞对T淋巴细胞主导的细胞免疫有激活的作用，Th2型细胞主要介导体液免疫反应，释放IL-6、IL-10等细胞因子。BA的封闭作用属于体液免疫反应，正常妊娠时Th1/Th2向Th2偏移，Th1处于抑制状态，体液免疫作用激活具有保护胚胎的作用。CD4+CD25+highTreg淋巴细胞对调节Th1/Th2向Th2偏移有重要作用[3]，本研究结果发现，URSA患者CD4+CD25+highTreg显著低于对照组，与文献报道的研究结果相似[4]，说明URSA患者体内CD4+CD25+high Treg缺乏，提示在URSA患者受孕后CD4+CD25+highTreg对Th1/Th2的调节作用减弱，体液免疫状态较低。结果中URSA患者IL-6、IL-10显著低于对照组，进一步说明体液免疫被抑制，免疫治疗后IL-6、IL-10、CD4+CD25+highTreg的水平均接近健康对照组，提示免疫治疗可能通过上调体液免疫水平起到保护胚胎的作用，而CD4+CD25+highTreg上调与免疫治疗之间的关系仍需进一步研究证明。

本研究认为URSA的发病原因与免疫反应调节失衡有关，体液免疫的抑制导致细胞免疫的激活，对胚胎产生免疫伤害导致多次妊娠失败。通过检测BA阳性率可以筛查免疫相关因素的URSA患者，通过免疫治疗能够有效提高BA阳性率及妊娠成功率。

[参考文献]

[1] 丁克文，宋燕，刘娟，等. 反复自然流产患者经配偶淋巴细胞免疫治疗后外周封闭抗体水平变化[J]. 中国免疫学杂志，2009，25（2）：157-158.

[2] 彭婀娜. 不明原因复发性流产主动免疫治疗前后封闭抗体的变化及其意义[J]. 实用妇产科杂志，2010，26（10）：773-775.

[3] 夏革清，王泽华，吴超英. Th1/Th2型细胞因子在不明原因早期自然流产绒毛和蜕膜组织中的表达[J]. 实用医学杂志，2009，25（17）：2852-2854.

[4] 高勇，宋月，安万新，等. 外周血Th17及CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞失衡与不明原因反复自然流产的相关性研究[J]. 国际检验医学杂志，2011，32（10）：1036-1038.

（收稿日期：2011-09-29）

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