病理制片过程的几点体会

[关键词] 病理制片；脱水；浸蜡；包埋

[中图分类号] R446.8 [文献标识码]C[文章编号]1673-7211（2009）01（b）-160-01

在病理技术领域中，HE染色是最常规和最基本的操作技术，一张优质的HE切片，是病理诊断、教学和科研中一个不可缺少的环节。病理制片技术是病理学的一项重要组成部分。一位病理技术工作者，首先要求能懂得组织的石蜡包埋和HE染色的机制，熟练石蜡切片和HE染色技术的操作。几十年来，病理技术有了较大的发展，新设备的问世使病理技术工作者大大减少了繁琐的手工操作，新技术的应用充实了病理诊断的方法，提高了诊断的准确性。尽管如此，最常规、最基本、最重要的仍然是石蜡切片和HE染色，因为它的质量与病理诊断的准确性休息相关。一张优质的HE染色切片，可以清晰地观察到各种不同的组织结构作为病理诊断上的确切依据。制备一张优质的HE染色切片，绝非仅指染色，它包括很多方面：

1 固定

固定应及时。采用10％的甲醛溶液固定组织，组织固定是制片的关键。新鲜的组织经过适当的固定，才能保持细胞和组织的固有形态，否则，细胞内的各种酶在缺氧时将细胞内的蛋白质分解破坏，导致组织自溶。因此，手术切除的组织标本一定要及时固定。固定液的选择、固定液的量、组织块的大小、固定的时间及固定温度相当重要的。Mallory曾经说过：“若是你能取到新鲜的组织能切片不超过2～3 mm的切块和记得固定液是10倍于组织块的总体积，你的诊断的正确性已得到了80%的保证。”固定的作用可见一斑。

2 脱水

脱水要彻底。脱水常用乙醇，要由低浓度逐级至高浓度，逐步置换组织内水分。一般组织内含有大量水分，所以在石蜡包埋前，必须脱去组织内的所有水分。脱水剂的选择，经与水在任何比例下能混为一体，使组织内的水分逐步减少，脱水必须干净、彻底，组织脱水是关键，脱水不尽，影响以后的透明和浸蜡。如脱水不尽的蜡块，切片后组织一经与空气接触，即干燥收缩，蜡块切面出现凹陷，甚至裂缝，切片时虽勉强切片，而染色时切片容易脱落。保留的蜡块，遇到下次再切片时就会相当困难。所以，无水乙醇中应保持绝对无水，无水乙醇要定期和适时更换。

3 透明、浸蜡和包埋

透明宜充分，浸蜡需足够，包埋应恰当。乙醇不是石蜡的溶剂，所以组织块在浸蜡前要经过一种既溶于乙醇又溶于石蜡的媒剂，这种媒剂就是二甲苯，它是检验脱水是否干净的一种手段，脱水不好透明则不能达标，透明用的二甲苯要定时更换。浸蜡多用纯净而熔点稍低的石蜡，软硬适中（选蜡要依季节和地域的温差而酌情考虑），浸蜡不充分或蜡温不当均影响染色质量。包埋的蜡温，一般以超过石蜡熔点2℃为宜，笔者认为，包埋的蜡温要略高于浸蜡的温度为好。否则包埋冷凝后组织与包埋蜡块分离，导致组织与石蜡融合不好而影响切片。我们常用的切片石蜡，由于其中含有杂质，这样的石蜡既浸蜡不好又易伤刀，因此，有条件的可用枫蜡。也可将普通石蜡高温煮沸3次，这样可以增加石蜡的密度，又可将石蜡提纯，有利于组织块的浸蜡、包埋和切片。

4 切片刀

制成一张优质切片，切片刀一定要锋利，随着科技的不断发展，使用一次性刀片已经逐步取代以前的切片刀，由于诸多因素，一些规模较小的医院还没有普及应用。以前在工作中一直认为磨刀时间越长越好。笔者认为，手工磨刀和自动磨刀机磨刀时间应在0.5～1.0 h，切片刀是否锋利，常以拇指轻摸刀刃，如有细密针刺的感觉，说明刀口已经锋利或以显微镜镜下观察，锋利刀口呈现一排极为细密而又均匀锯齿状即所谓的锋芒。磨刀后在用木块镶皮条制成的皮革砖来褙刀，效果会更好。

5 切片

切片要薄，贴片、烤片有讲究。常规切片的水温，一般以低于蜡温的10～12℃为宜。水温低，细小的皱褶无法撑开，水温高会引起组织细胞散开，如浸蜡中的二甲苯混入蜡块展片会出现蜡溶解现象。因此，可先在95%乙醇中飘浮，再转入温水，以增加其表面张力，更好地保持切片的平整无痕，烤片的温度也很重要，常规在温箱中60℃，30 min，烤片时间过长，会引起组织收缩；时间过短，容易脱片。不同的组织对烤片的时间的要求又不完全相同，这就要求病理技术工作者在实践中不断地总结和研究。

6 染色

一组良好的染色试剂决定着染色效果，但是，固定、脱水、浸蜡等诸多因素也是非常关键的。切片脱蜡需干净，未完全脱蜡的组织切片，染色后组织和细胞模糊不清，形成地图形，脱蜡时间宁可长些，不应过短。苏木精染液要配好，苏木配制的好坏，决定染色的优劣。盐酸乙醇的分化要适度，这是一个重要环节，若切片不分化或分化不足，组织着色过深使核浆的境界不清楚；若分化过度，胞核过淡不清晰。伊红染色要适宜，伊红作为对比染色，染色时不应染的太红。染色的标准是颜色鲜艳，核浆红蓝对比鲜明，也就是我们通常所说的红是红，蓝是蓝。一张优质的切片对染色步骤的时间掌握相当重要，如果说染色的前几步，如：固定是否完全、脱水是否彻底、切片刀是否锋利，可以说并不一定完全能人为控制和掌握，而染色步骤的时间就需要自己在工作中积累经验。染色试剂也因季节温度、使用时间的长短、染色剂的浓度而酌情增减染色时间，所以时间要灵活掌握，有机结合。

综上所述，优质蜡块、优质切片、优质染色三大步骤我们严格按操作规程去做，任何一个环节的操作不当都会导致功败垂成。制作一张优质的HE切片从接收到组织标本开始，就是一个由诸多因素和环节组成的处理过程，无论是仪器本身所固有的局限，还是人为水平的差距都会影响切片的质量。除了认真、严谨的态度和一丝不苟的责任心，更要严格遵守操作规程，虚心向前辈学习，互相交流，结合自己的工作环境和实际工作条件，善于总结摸索，形成自己的一套好经验、好方法，避免人为因素导致制作不了优质切片。

（收稿日期：2008-09-16）