高效液相色谱在天然药物分析中的应用

【中图分类号】R96 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2014）04-0464-02

高效液相色谱（HPLC）是在经典液相色谱法和气相色谱法的基础上发展起来的新型分离分析技术。由于对挥发性小或无挥发性、热稳定性差、极性强、特别是那些具有某种生物活性的物质提供了非常适合的分离分析环境，因而广泛应用于生物化学，生物医学，药物临床，石油化工，合成化学，环境监测，食品卫生，以及商检，法检和质检等许多分析检验部门。

天然药物的来源有动物、植物和矿物之分，其中以植物类为主。由于天然药物的化学成分复杂，其有效成分，可能有一个，也可以有多个，这对于控制药品质量，建立质量标准来说比较困难。HPLC可通过对天然药物的有效成分进行分离鉴定，再测定有效成分的含量，因此广泛用于对天然药物中复杂成分进行测定，建立药品的质量控制方法。

1在生物碱类药物分析中的应用

生物碱（Alkaloid）是从植物中提取获得的含氮有机化合物，其种类繁多，大多数具有特殊的镇痛生理作用，己在临床医疗上广泛使用。

黄连为毛莨科植物味连的干燥根，具有泻火、解毒、清热、燥湿的功效。其主要有效成分生物碱，具有降血糖、保护缺血心肌、抗消化性溃疡等药理作用，临床应用广泛。黄连药材所含的生物碱主要有小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱和药根碱等小檗碱型生物碱。[1]采用高效液相色谱法测定黄连中5种生物碱的含量，在优化的色谱条件下，5种化合物分离效果好，方法灵敏度高，重现性好。

2 在黄酮类化合物分析中的应用

黄芪为豆科植物，现代药理研究表明，黄芪具有强心降压，降血糖，利尿，抗衰老，抗疲劳，抗肿瘤，抗病毒，镇静，镇痛，增强机体免疫功能等作用，有较高的药用开发价值。[2]利用联用色谱建立了黄芪中黄酮类化合物色谱指纹图谱，用相关化学计量学方法和黄芪黄酮类化合物标准谱对照，定性鉴定出八个黄酮类化合物，进而建立了4个产地黄芪中黄酮类化合物特征色谱指纹图谱，表明不同产地同种药材间的相关性。该方法能用于不同产地中药黄芪的真伪和优劣的鉴别，为以后黄芪活性化合物的定性定量关系研究及质量控制提供基础。

3在皂苷类物质分析中的应用

高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）或高效液相色谱与质谱联用（HPLC-MS），能够分离检测没有紫外吸收或仅为紫外末端吸收的物质，天然产物中的许多成分无疑找到了直接、准确、简便的测定方法。皂苷类化合物无紫外吸收或仅为末端吸收，HPLC-MS或HPLC-ELSD能够对其不经衍生进行检测。采用电喷雾离子化法，将HPLC-MS技术用于分析人参提取物中的人参皂苷，基于分子离子峰和基准物的保留时间等信息，未经衍生的人参皂苷Rg1、Re、Rd、Rc、Rb和Rb1直接被检测出来。HPLC-ELSD法用于皂苷类物质测定的报道较多，除了一次性分离分析天然人参中的人参皂苷外，还用于三七中三七皂苷的含量测定、黄芪中黄芪甲营的分离测定等[3]。

4 在萜类和挥发油类物质分析中的应用

萜类化合物是各类天然物质中最多的一类成分，也是中药中一类十分重要的活性成分[4]。用高速逆流色谱法分离纯化银杏叶中白果内酯和银杏内酯A、B、C，采用HPLC-ELSD法测定了胆固醇、豆甾醇、豆甾烯醇和β-谷甾醇等三萜烯类化合物，其灵敏度优于二极管阵列检测器。采用HPLC-ELSD建立了升麻中萜烯类化合物的含量测定方法，并比较了蒸发光散射检测和紫外检测，发现用蒸发光检测器不仅基线稳定，而且灵敏度也较高。

5 在香豆素和木脂素类物质分析中的应用

香豆素类成分具有抗菌抗炎，止咳、化痰、平喘，促进尿酸排泄，镇痛镇静，调节血液循环，抑制肠蠕动，防紫外线等多种功能。利用HPLC-DAD-ESI/MS，建立了当归药材中9种香豆素的测定方法[5]，建立了同时测定五味子中五味子醇甲、五味子酯甲和五味子乙素的反相高效液相色谱（RP-HPLC）方法，本法准确、快速、灵敏度高，可用于五味子中有效成分的定量分析。

6 在酚酸类化合物分析中的应用

酚酸类物质是酚类物质的一种，多为对羟基苯甲酸和对羟基肉桂酸的衍生物，具有营养和抗氧化等药理活性和药用价值。酚酸类化合物多存在于植物果实或果皮中。利用RPHPLC-DAD-ESI/MS法，通过和标准物质及文献比较，根据它们的保留时间、紫外吸收光谱图和质谱图鉴定了橄榄油中的没食子酸、金丝桃甙等7种酚类化合物。除没食子酸、鞣花酸和金丝桃甙外，其它的化合物都是首次从橄榄油中得到，并用HPLC-DAD法对这些化合物进行了定量测定。

7小结

高效液相色谱法是基于混合物中各组分由于它们在流动相和固定相之间的分配系数的不同而被分离的一种分离分析方法，它是色谱法的一个分支，是现代分离测定的重要手段，它分析速度快、分离效率高、检测灵敏度高、检测自动化、适用范围广、组分易回收、样品处理较简单，因此在各类药物的鉴别、检查和含量测定中能够充分发挥其它分析方法无与伦比的优势，目前已广泛应用于药物分析的各个方面。

参考文献

[1]应懿，何志红，周世文等.测定黄连中5种生物碱含量的高效液相色谱法研究[J].第三军医大学学报，2007，9.

[2]谢显珍，黄兰芳.HPLC-DAD研究黄芪中黄酮类化合物色谱指纹图谱[J].光谱实验室，2009，3.

[3]唐露，李希，冯建安等.HPLC-ELSD法测定舒络颗粒中黄芪甲苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量[J].实用中医药杂志，2012，11.

[4]苏静，谈锋，李连强等.高速逆流色谱法分离纯化银杏叶中白果内酯和银杏内酯A、B、C[J].中草药，2008，11.

[5]张延妮，岳宣峰，王品之.反相高效液相色谱同时测定五味子中五味子醇甲、五味子醋甲和五味子乙素的含量[J].分析科学学报，2007，23（l）：41-44.