新型AT1受体拮抗剂的降压活性研究

【摘要】目的 研究新型AT1受体拮抗剂的降压活性。方法 利用放射性受体结合实验和降压实验评价化合物对AT1受体亲和力大小以及体内降压活性。结果 与阳性对照氯沙坦相比，1号化合物有更好的AT1受体亲和力。结论 1号化合物具有较好的降压效果。

【关键词】高血压；细胞；新型AT1

高血压是一种常见的心血管疾病，在人群中有相当高的致病率和死亡率。我国当前有1.6亿高血压患者，而且每年还以300万人新发病递增，每年因心脑血管合并症而死亡的有260万人，严重影响了人民的生命和健康。自从第一个血管紧张素II受体拮抗剂―氯沙坦在瑞典问世以来，人们对沙坦类药物的作用机制、药理作用、临床效果的认识不断更新，在心脑血管疾病的防治中应用越来越广泛，而且越来越受到临床上的重视。最新研究报告显示，长期服用沙坦类药物的高血压患者，患癌症的几率远低于不服用沙坦类药物的人群，从而揭开了沙坦类药物具有抗肿瘤作用的新篇章。

世界卫生组织（WHO）建议的血压测量标准是：正常成人收缩压应小于或等于140 mmHg（18.6kPa），舒张压小于或等于90 mmHg（12kPa）。如果成人收缩压大于或等于160 mmHg（21.3kPa），舒张压大于或等于95 mmHg（12.6kPa）则为高血压；血压值在上述两者之间，为临界高血压。全球高血压的患病人数逐年增加，调查表明高血压的发病年龄逐渐趋于年轻化。据2009年国际高血压学会第21届年会报道，目前全球大约有9.72亿人患高血压或血压偏高，相当于成年人口的26.4%，发达国家高血压患者有3.33亿人，发展中国家有6.39亿人。预计到2025年，这一数字将增加到15.6亿。目前庞大的市场被国外产品垄断，国内沙坦类降压新药的研发还需突破和发展。

血管紧张素II受体拮抗剂（沙坦类药物）是一类特异性高、耐受性好、而且副作用小、安全可靠的新型抗高血压药物。本文以BMS-180560为先导化合物，通过构效分析、生物电子等排和结构拼合等药物设计基本方法，设计合成了化合物1，并进行了活性评价。

关键词：血管紧张素II 受体1，拮抗剂，高血压，

1 实验动物

雌性SHR（中国科学院斯莱科上海实验动物中心）。

2 材料

2.1 材料与仪器

新型化合物：东华大学生物医药研究组；EP214C型电子分析天平： SW-CJ-1FD型超净工作台：苏州净化；SN―682型γ计数器：上海日环厂；上海一恒科学仪器有限公司； ZH-HX-Z无创尾动脉血压测量分析系统：淮北正和生物公司；二氧化碳细胞培养箱：Thermo Scientific。

3 实验方法

25I-Ang II溶液配制：取0.012g（12mg）125I-AngII，加1ml PBS溶解，得到浓度10-2M。

细胞铺板：取血管平滑肌细胞3-7代铺于24孔板中（1×107/孔），贴壁后用于试验。

3.1 结合反应：每个浓度采用3个复孔。细胞板每孔依次加入浓度逐渐增加的125I-Ang II溶液，使其终浓度分别为0nM；0.02nM；0.04nM；0.08nM；0.16nM；0.32nM；0.64nM；1.5nM，为了扣除非特异性结合，每个浓度的第三个平行复孔加入未标记的Ang II（终浓度为1×10-6 M）和浓度递增的125I-Ang II溶液，每孔的最终体积为1000μL（其中500μL为细胞培养液），4℃反应150 min，反应结束后去除多余的反应液，用PBS洗涤3次，加入0.1mol/L NaOH溶液消化细胞10min，将细胞消化液移入塑料管，用γ计数器测量每管内溶液的γ计数。经GraphPad Prism4饱和曲线拟合程序处理得到125I-Ang II受体结合饱和曲线。

3.1 竞争性实验：

药物溶液：取一定量的化合物溶于1 mL的DMSO溶液，浓度为10-2 M，再10倍稀释成不同浓度的溶液（1×10-10 M ～1×10-4 M）。

细胞铺板（1×107/孔）后，每孔加入0.1 nM 125I-Ang II以及不同浓度的新化合物（终浓度1×10-6 ～ 1×10-12 mol/L），总体积为1000 μL，4℃反应150 min，反应结束后去除游离的125I-Ang II，用PBS洗涤3次，加入0.1 mol/L NaOH溶液消化10 min，将细胞液移入塑料管，用γ计数器测量每管内溶液的γ计数。经GraphPad Prism 4竞争结合曲线拟合程序处理即可得出新型化合物抑制与膜蛋白结合的半抑制常数和IC50值。

3.2 体内降压实验

低剂量组（10mg/kg）、高剂量组（15mg/kg、阳性对照组（洛沙坦 10mg/kg）、阴性对照组。

方法：（1）大鼠加温和固定：采用全身加温加温。固定采用有机玻璃固定器。2）确定起始脉搏水平：将鼠尾依次穿过尾套和脉搏换能器，调整尾巴位置和仪器增益，使尾动脉脉搏信号足够大。（3）测定血压：用橡皮球充气加压，使尾套内压力升高至脉搏完全消失，再加压20-30mmHg（2.66～3.99），然后缓慢放气减压直至脉搏信号恢复起始水平，这时从测压仪的显示屏上就可读取收缩压、舒张压、平均动脉压和心率，连续测3次，取其平均值作为测定值。

4 统计学处理

数据采用GraphPad Prism 4作图软件和Excel2007软件作统计学分析，并制作图表，组间差异比较采用方差分析，数据采用x±s表示。

5 实验结果

5.1 经过GraphPad Prism 4竞争结合曲线拟合软件处理后得出IC50值，其中，氯沙坦和新型化合物的IC50分别为 1.27±0.23，3.98±1.21，可见两者的数据具有显著性差异（P

5.2 经过无创微动脉血压仪测出了新型化合物的最大降压值，低剂量组中新化合物给药后在1-3h里血压出现明显降低趋势，在第三个小时达到最大降压值28 mmHg，随后血压保持平稳，直至24小时后低剂量组与阴性对照相比仍有显著性差异。而在高剂量治疗组中，新化合物给药后在1-3h里血压出现明显降低趋势，在第三个小时达到最大降压值30 mmHg，随后血压保持平稳。

6 讨论

从受体结合试验的和体内降压实验中可以看出，新型化合物1具有较好的降压效果，降压时间长，效果稳定，可以作为新药进行进一步的研究。