高效液相色谱仪自动进样器校准方法及不确定度评定

摘要：高效液相色谱仪自动进样器校准方法一直是国际上主流科研队伍使用的方法之一，其准确性和对事物的分析的透彻性，在目前看来，是其他任何方法都难以比拟的，国内在早些时期因为资金技术等的限制难以普及使用高效液相色谱仪自动进样器的校准方法来达到检测的效果，这就限制了各种研究事业向更深入的层次去发展，基于这样的情况，我国科研队伍在国家政府的支持下排除万难，积极引进高效液相色谱仪自动进样器校准方法以及不确定度评定的评定标准，在近年来已经取得了长足的发展，基于这样的先决条件，本文在对高效相色谱仪自动进样器校准方法进行具体的分析和解释，以求达到普及这种方法的目标。

关键词：高效液相色谱仪自动进样器校准方法；不确定评定；测量方法

一、高效液相色谱仪自动进样器校准方法

1.高效液相色谱仪自动进样器校准方法的引进条件

众所周知，测量始终是分析某物质不可避开的方法，并且也是确定物质各项指标是否合格，以及各成分，还有个成分之间如何发生反应以及之后的各项指标的重要方法，但是单一的测量方法存在着很多的不足之处，而在测量之中任何一点小的纰漏都有可能造成最后的巨大损失，所以在现实的严峻条件之下，为了更好更全面地发挥测量的效果和应有的准确度，引进了高效液相色谱仪自动进样器校准方法。在此之前，国际标准化组织（ISO）曾于1993了《测量不确定度表示指南》，这样的标准曾是国际上用于测评物品的最低准则，而高效液相色谱仪自动进样器校准方法也是在严格依据指南上的说明来进行创造发明的方法，也正是因为这样的标准使得高效液相色谱仪自动进样器校准方法在起点之处的效果就高于普通的校准方法。此外，国家质量技术监督局也曾于1999年批准颁布过JJF1059-1999《测量不确定度评定与表示》。而这之中德CNAL/AC01∶2005《检测和校准实验室认可准则》（等同于ISO/IEC17025∶2005）中5.4.6对有关不确定测量的相关方法进行了明确的规定，包括对实验室中应有的用于测量的设备配套设施，还有在测量之中应该遵循的程序守则。也正是因为这种测量效果的有效性和权威性，在基本的测量方法被普及之后，各大报告中均要求在最后提交的时候附上关于高效液相色谱仪自动进样器校准方法及不确定评定的评价结果，举一个明显的例子，在参加能力验证和比对中，就要求附上不确定评定的最后结果。

2.高效液相色谱仪自动进样器校准方法的具体操作原理

高效液相色谱仪自动进样器校准方法一般采用的方法，是根据液体的最小浓度来进行差量检测，而根据国家的的对于液体的最新研究显示，液体中的浓度的测量时液体中最敏感的地方，其敏感度超过了所有的其他指标，是能够准确得出测量结果的标杆，也因此成为了测量的最重要的指标之一。在测量中，利用高效液相色谱仪自动进样器校准方法来进行基本的测量，然后再通过对测量的结果进行分析合成，就能得到初步的结果。试验条件之下对液体的最小浓度的检测，在达到了一个极点之后，整体上就会成为一个饱和的状态，在这种饱和状态之下的液体很难检测出所想要的数据和效果，所以在液体到达饱和状态之前就必须要能够测量出有效地的结果，这就对测量的时间效应有了严格的要求，而高效液相色谱仪自动进样器的优势之一就是其对时间的把握度能够高于普通的仪器，这样不仅能够节省相应的时间，也能够在保证试验效果的同时，尽量避免对检测物品的浪费，（因为一旦物品至于空气之下，则会很开与空气产生化学反应，在这样的化学反应之下，不仅是液体的纯度会发生变化，需要检测到的液体的相关数据也会因为化学反应产生质的变化，这样便会导致最后的测量结果出现差错）

除此之外，最新发表的欧洲《质量控制文件》中也提供了具体的供高效液相色谱仪自动进样器校准方法如何操作和具体的流程做出了详细的解释和说明。在参考控制文件之中，提出了通过高效液相色谱仪自动进样器校准方法在进行测量的时候，应该对被检测的液体的体积，残体，密度等进行具体的测量，而在测量之后还应该进行至少5次以上的重复测量，在这样的测量结束之后，建立相关的体积误差，残液留样的数据分析对比，并且通过重复性检测建立复式校准方法，最后保证经评定之后的效果进样体积误差的相对扩展不确定度为1.8%。通过具体的标准对检测结果进行限定，不仅能够提高检测的效率，还能减少成本的使用你，是一个利益双得的两全之法，同时这样的检测结果标准规定也是为之后的高效液相色谱仪自动进样器的校准进行其他类似的校准时准去的依据保证和方法经验的提供。

二、高效液相色谱仪自动进样器校准方法及不确定度评定的具体效果演示说明

1.测量果冻中环己基氨基磺酸钠中对高效液相色谱仪自动进样器校准方法及不确定度评定的使用

环已基氨基磺酸钠俗称甜蜜素，是一种人工合成的无营养性食品甜味剂。因长期存在甜蜜素是否具致癌性的争议，英国、美国、欧盟、加拿大等国家和地区的食品中甜蜜素的添加均规定了允许的含量，日本则不允许使用。近年来，我国也将甜蜜素列入为限制使用的食品添加剂。它的基本性质效果是能够在水中微溶，但是在甲醇、乙醇、氯仿或二氯甲烷等强酸性物质中几乎不溶。适当的使用中环己基氨基磺酸钠可以达到对产品增味的效果，但是一旦使用过量，就可能会造成严重的急性过敏反应，或者是严重的腹泻，更甚者甚至会威胁人的生命安全，虽然现代医疗技术已经找到相应的方法能够及时处理这样的情况，但是如果一旦事情发生的太过于迅速或者用量过大，就很难能够避免意外情况的发生，因此，对环己基氨基磺酸钠应该在果冻中使用多少何其的具体效果和可能出现的情况进行测量就有了战略性的意义。

2.测定果冻中环己基氨基磺酸钠中使用的具体参数

检测中所需要的化学数据建立在基本的数学模型之上，而使用到的基本公式就是

CX = × ×100% （1）

式中：CX――供试品的含量；

AR――对照品的峰面积

AX――供试品的峰面积

WR――对照品浓度（g）

WX――供试品浓度（g）

这个基本的公式适用于计算产品中检测出的结果时的对具体的产品数据进行分析的时候使用，是在检测之后需要用到的工具。

检测之前需要用到的工具包括电子天平，特定的试管若干，同时还应该注意的是对室内温度的控制，一般在二十五摄氏度左右，同时控制液体在液箱中的流速大概为1.0ml/min ，在做好了基本的设施准备之后，应该注意的就是在实验过程中进行数据的准确计量。在实验中会用到的数据一般有：波长，样品和对照样品的量度，样品和对照样品的浓度，两种样品的平均峰面，对照样品的实际浓度和在掺水之后的产品变量的浓度，供应品的含量，其中对对照品纯度的控制要在：99.5%以内 ；对样品中含水量的控制要在：4.9%以内。在计算之后，除了基本的检查核算以确保测量的结果无误，还应该进行合成标准不确定度的计算，一般来说这样的计算主要是为了计算重度，举一个简单的例子，在各项条件符合标准的状况下，合成标准不确定度的计算结果应该是类似于下面的结果：

uc（Cx）=

= =0.021

uc（CX）=100.41%×0.021=2.1%

最后，在计算结果的基础上扩展不确定度计算，在进行完最后一步之后，按照标准流程提交报告。

参考文献：

[1]王冠杰，季士委，田利，曹守春，邹健，杨洋.高效液相色谱仪自动进样器校准方法及不确定度评定[J].化学分析计量，2013，05：69-71.

[2]李丽萍.高效液相色谱法测定水中莠去津测量不确定度的评定[J].城镇供水，2010，05：45-48.

[3]汤海青，顾晓俊，殷居易，欧昌荣.高效液相色谱法测定葡萄酒中苯甲酸含量的不确定度评定[J].食品工业科技，2013，15：295-298.