浅谈PCR检测流感病毒的室内质量管理

【中图分类号】R440 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2011)11－0393－01

【摘要】探讨流感病毒 PCR 检测中的室内质量控制管理。从实验前、室验中、实验后的各?个环节进行室内质量管理分析。室内质量控制是产生精确和可靠结果的基础和核心，是保证实验室检验工作质量的重要手段，实验操作人员应主动进行自我质控制。

【关键词】流感病 毒质量控制 流感病毒

PCR 检测的室内质量管理是分子生物学检测不可忽视的环节，它可以监测实验室的检测过程，用以评价检验结果是否可靠，并查找和排除质量环节中导致不满意的原因; 是检验人员对检验质量进行自我控制的过程。该文通过结合实际工作对流感 PCR 检测的室内质量管理进行分析探讨，以便在今后的工作中取得检测结果的准确性。

1 实验前的质量管理

1．1 人员:具有相关分子生物学检验背景的检验人员经过严格的培训后持有上岗证，才能进行实验操作。检验人员要不断的学习新技术，掌握新知识，严格遵守操作规程，遵循日常工作中的质量控制流程，严格执行查对制度和考核制度。对于从事该工作的人员基于生物安全的考虑，应定期进行健康状况监测，建立相关记录，包括职业暴露、免疫接种情况等。

1．2 仪器:各实验区域应有专用的仪器设备，同一区域内的仪器设备、物品和工作服应有明显标记，避免与其他区域的仪器设备混用。所有仪器性能均应达到实验的要求，建立仪器档案，严格按照仪器检定周期检定，重要的、特定的仪器还需要进行期间核查; 对于??连续工作的仪器如普通冰箱，超低温冰箱，每天都应进行温度监控和记录并定期维护，以保证仪器处于良好的工作状态。

1．3 实验耗材与试剂:实验所涉及的各种离心管、吸头等耗材使用前必须经高压灭菌处理、不得重复使用；所有实验使用的试剂等级应为不含DNA和 DNase 的分析纯或生化试剂。为保证商品试剂?质量的可靠，必须根据实验需要选用经国家医药行政部门认证的试剂盒，避免使用伪劣或过期试剂，以保证实验结果灵敏特异 、准确可靠。所用试剂溶液宜大体积配制、小体积分装后高压灭菌保存，不宜高压灭菌的试剂应过滤(0．22 μm) 除菌；PCR 主混液、引物、探针应避免反复冻融。

1．4 实验环境:实验室要遵循分区工作原则，不同的区域加以明确的标识，涉及生物安全的检测区域按照相关规范或要求配置相应的生物安全设施。实验室保持洁净，也是实验成功的关键，每天要在进行实验前30min对工作作环境进行消毒，可用300mg / L － 500mg / L 有效氯对操作台、环境表面进行擦拭，抹布专用; 紫外线消毒波长一般选择254/300nm 照射，时间不低于30min。

1．5 流感标本:严格按照《全国流感监测方案(2010年版) 》采集、送检标本，以保证样品在试验全过程中不发生非正常的变质和损坏。

2 实验中的质量控制

2．1 反应体系:配置反应体系，一般为微量化操作，整个实验在超净工作台操作，实验过程应连续．准确、快速进行，不碰离心管或八联杯的管口和盖子，反应体系必须吹打多次，使其均匀分布。在实验室环境中存在大量RNAase，对RNA具有强烈的降解作用，可造成 R?NA测定假阴性。RNAase最主要的污染源常为操作者的手，实验全过程必须戴一次性手套，并要勤更换，以防止手套污染。

2．2 核酸提取:样品的采集和RNA的提取是决定检测结果是否可靠的一步，管家 ( Housekeeping Gerie) RNA酶蛋白( RNAseP) 作为采样和核酸提取的质控指标。在实验中，推荐使用管家基因作为采样和核酸提取参照。

严格按照试剂盒说明书来进行，分析过程中每加一步试剂都必须认真仔细，防止试剂被污染、标本间的相互交叉污染，注意更换吸头，实验操作在二级生物安全柜内进行。

2．3 扩增:扩增仪的主要问题是孔间差，引起扩增失败或扩增效率降低。

2.4 凝胶成像:溴化乙锭必须在避光阴凉处保存。反复溶解能使挥发。影响特异条带的观察。在接触溴化乙锭时应戴一次性腈类手套，实验操作宜固定在一定的区间、使用相对固定的容器。

3 实验后的质量控制

结果的分析: 在实验结果成立的情况下，即阴阳性参考均正常的条件下，判断结果。若阴性对照出现扩增，应考虑环境污染造成假阳性，实验室需通风、擦洗工作台及实验用品; 若阴性对照不出，则考虑RNA 降解和整个反应体系。实验后: 实验完成后需进行消毒，定期的采取有效地预防措施，废弃物必须经过高压灭菌后，按医疗垃圾物处理，含有 PCR 产物的所有液体及废弃物应放入含有1 mol/LHCl 的容器中浸泡，浸泡时间不宜少于6h; 对含有EB 或经 EB浸泡过的琼脂糖凝胶、电泳缓冲液的处理见《分子克隆》第三版。室内质量控制是产生精确和可靠结果的基础和核心，是保证实验室检验工作质量的重要手段。实验操作人员应主动进行自我质控制 ，用双盲法对当天标本随机抽样，要求检测者按原操作程序重新操作，若有异议应重新对所有标本重新测定，为动态监测流感病毒变化趋势提供更准确的信息。

参考文献

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作者单位：200082 上海市虹口区疾病预防控制中心