超高效液相色谱法测定西洛他唑含量

【摘要】目的：建立了超高效液相色谱法测定西洛他唑含量的方法。方法：色谱柱：Acquity UPLC BEH C18(2.1mm×50mm 1.7μm)；流动相：甲醇-水（70：30）；流速：0.4mL・min-1；柱温：25℃；进样量：1μL；检测波长： 257nm。结果：西洛他唑与其他物质分离良好，线性范围为0.1～250 μg・mL-1（r=0.9999），检测限为10ng・mL-1。结论：该方法快速、准确、灵敏,可为西洛他唑生产和质量控制提供参考依据。

【关键词】超高效液相色谱；西洛他唑；含量测定

西洛他唑（cilostazol）临床上主要用于改善慢性动脉闭塞症引起的缺血性症状如溃疡、肢痛、发冷及间歇性跛行[1]。

超高效液相色谱（UPLC）仪ACQUITY是美国Waters公司于2004年的匹兹堡会议上最新研制推出的，其采用1.7μm细粒径的新型固定相，可获得超高的柱效，全面提升了液相色谱的检测速度、灵敏度和分离度，使得液相色谱仪在性能上有了质的飞跃和进步，促进分离科学新型领域的形成和发展[2]。

经查阅相关文献及国家药品标准[3-4]，目前西洛他唑测定含量的方法采用高效液相色谱法（HPLC）进行测定，以甲醇和水作流动相，分析检测时间较长；利用超高效液相色谱仪转化参数换算，将测定西洛他唑的HPLC方法转换并优化为UPLC方法，可以快速、灵敏、低损耗的对该药品进行检测，为西洛他唑的生产和质量控制提供参考依据。

1 仪器与试药

Waters Acquity UPLC 超高效液相色谱仪 配PDA检测器、自动进样器和二元溶剂泵；Empower 工作站；

西洛他唑原料由苏州中化药品工业有限公司提供，西洛他唑标准品由中国药品生物制品检定所购买（批号：100363-200301）；甲醇为色谱纯，水为超纯水。

2方法与结果

2.1色谱条件与系统适应性

色谱柱：Acquity UPLC BEH C18( 2.1mm×50mm1.7um)；

流动相：A：水， B：甲醇，梯度洗脱：0～2分钟， B为70%，2～4分钟， B的比例增加至90%，维持2分钟；流速：0.4ml.min-1；柱温：25℃；进样量1μL；检测波长：257nm。理论板数按西洛他唑计算不低于2500。

2.2线性关系 精密称取西洛他唑标准品50mg(精确至0.01mg)于100ml量瓶中，加甲醇-水（70：30）适量，超声使溶解，并用甲醇-水（70：30）稀释至刻度，摇匀，配制成0.5mgmL-1/ml的标准贮备液，取适量贮备液，用流动相配制成0.1，1,5，10，50，100，250μg・mL-1的7种浓度溶液，各取1 ul进样，以西洛他唑峰面积平均值Y对西洛他唑浓度X进行回归运算，回归方程为：Y=6.194×106X+5.038×103 r=0.9999

西洛他唑浓度在0.1～250 ug.mL-1范围内线性良好。

2.3精密度 精密称取对照品适量，制成西洛他唑5，100，250μg.mL-1的3种浓度溶液，每个浓度连续进样5次，考察日内精密度，高、中、低三种浓度的峰面积RSD分别为0.28%，1.2%，1.9%。平均5天连续测定，考察日间精密度，高、中、低三种浓度的峰面积RSD分别为2.1 %，1.5%，3.2%。

2.4 溶液稳定性配制10μg .mL-1的西洛他唑的流动相溶液，在室温下放置，分别在0，2，4，6，8，10，12h时进样测定含量，计算其RSD为1.8%，西洛他唑溶液在室温下放置稳定。

2.5检测限与定量限 在上述色谱条件下，平行测定5次的西洛他唑检测浓度为10ng.mL-1（S/N=3），峰面积的RSD为2.5%；平行测定5次的西洛他唑的定量浓度为50 ng.mL-1（S/N=10），峰面积的RSD为4.3%。

2.6 含量测定精密称取供试品10 mg，置 100mL量瓶中，加甲醇-水（70：30）适量，超声使溶解，并用甲醇-水（70：30）稀释至刻度，摇匀,即得供试品溶液。取供试品溶液1μL注入液相色谱仪中，记录色谱图。采用标准曲线法以峰面积计算供试品中的西洛他唑含量。测得3批样品中西洛他唑的含量分别为99.85%,99.98%,100.12%。

3讨论

3.1检测波长的选择分别取适宜浓度的对照品溶液在190～400nm 波长范围内进行扫描，结果西洛他唑在257nm处有最大吸收，故选择257nm作为检测波长。

3.2流动相选择 分别用不同比例的甲醇-水（70：30）、乙腈-水（45：55）[5]测定西洛他唑的含量，两种方法的分离度、塔板数均能达到要求，但考虑到检测成本、环境的影响，最终选择了甲醇与水作为流动相。

3.3通过对西洛他唑HPLC与UPLC两种方法检测条件和检测结果的比较,HPLC流速为1mL/min,进样量为20μL，主峰出峰时间为6分钟，分析检测时间为29分钟；UPLC流速为0.4mL/min,进样量为1μL，出峰时间不到1分钟，样品检测时间8分钟内完成；两种方法的检测结果无明显差异，但UPLC方法可以大幅度缩短检测样品时间,提高工作效率，便于生产和质量控制，同时可节约大量的溶剂。

参考文献

[1] 陈会校，齐书英，李俊峡，何振山 .西洛他唑在心血管疾病中的应用[J].中国循证心血管医学杂志,2009,2:119-122.

[2] 郝桂明,唐素芳,超高效液相色谱在药物分析中的应用[J].天津药学,2009,6:64-69.

[3] 王存芳,严启新,李勇.HPL法测定西洛他唑含量[J].中华医学研究杂志,2006,1:21-22.

[4] 国家食品药品监督管理局 西洛他唑标准(试行) YBH05382004 .

[5] 郑一美.反相高效液相色谱法测定西洛他唑中有关物质[J].中国药业,2006,14:20-21