蒙古黄芪愈伤组织诱导及植株再生

摘要：以蒙古黄芪[Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.var.mongholicus（Bge.）Hsiao]种子萌发后的上胚轴、下胚轴和子叶为材料，采用MS培养基附加不同浓度植物生长调节剂进行愈伤组织的诱导，并诱导不定芽的发生，生根后得到完整的再生植株。在该过程中，采用正交试验分析6-BA、NAA、2，4-D、固化剂等条件对蒙古黄芪愈伤组织诱导和不定芽分化的影响。结果表明，下胚轴为诱导愈伤组织的最佳外植体取材部位，最佳愈伤组织诱导培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2，4-D，最佳的不定芽分化培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA，而固化剂采用0.1% Gelrite为最佳。

关键词：蒙古黄芪[Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.var.mongholicus（Bge.）Hsiao]；愈伤组织；植株再生；正交试验

中图分类号：S567.23 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）19-5091-04

DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2016.19.050

Abstract： With the epicotyls， hypocotyls and cotyledons from seed germination of Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge. var. mongholicus （Bge.） Hsiao as explants， MS medium plus different concentrations of plant growth regulators was used to callus inducement and adventitious buds generation for plant regeneration. In this process， orthogonal experiment were used to analysis the impact of 6-BA，NAA，2，4-D and curing agent to callus inducement and adventitious buds differenciation of Astragalus membranaceus. The results showed that hypocotyl was the best site for explant callus inducement. The optimal medium for callus inducement was MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L 2，4-D and for adventitious buds differenciation was MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA. The optimal curing agent was 0.1% Gelrite.

Key words： Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.var.mongholicus （Bge.）Hsiao；callus；plant regeneration；orthogonal experiment

蒙古黄芪[Astragalus membranaceus （Fisch.） Bge.var. mongholicus（Bge.）Hsiao]是豆科（Fabaceae）黄芪属（Astragalus）植物，是中国重要的传统中药材，其药用历史悠久，被誉为“补药之长”，产于黑龙江、内蒙古、河北及山西等地区，生于向阳草坡或山坡上。近年来，国内外学者对黄芪的药用成分、药理作用等进行了广泛的研究。现代医学研究表明，黄芪中的有效药用成分主要为多糖、皂苷、黄酮、蛋白质、生物碱等物质[1，2]，具有抗炎、镇痛、抗血栓形成、抗衰老、抗病毒、抗风湿、免疫调节等多种药理作用[3，4]。随着对黄芪药理作用研究的不断深入及其药用范围的不断拓宽，对其需求量也越来越大。传统上，商品黄芪以野生为主，但由于长期过度采挖，致使野生黄芪资源几近枯竭。同时，在黄芪的人工栽培中，存在种质退化、混杂等现象，以及黄芪根腐病、白粉病等病害、虫害、鼠害等[5]，使黄芪产量和质量均有所下降，严重影响该中药材的持续发展。因此，如何扩大黄芪的产量和质量满足国内外对其的需求是目前亟待解决的问题。本试验利用组织培养方法，诱导蒙古黄芪的愈伤组织，并进行不定芽的增殖，以达到快速繁殖的目的，为蒙古黄芪的种质利用和品种改良提供基础。

1 材料与方法

1.1 材料

供试材料为蒙古黄芪种子，购自甘肃陇西。选取颗粒饱满的种子，在无菌条件下用75%乙醇消毒30 s，消毒过程中用手轻轻搓洗，随即放入2%次氯酸钠溶液处理20 min，无菌水漂洗4次，接种于MS基本培养基上萌发。萌发后，取子叶、下胚轴和茎段作为外植体进行接种。

1.2 仪器

高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、光照恒温培养箱等。

1.3 培养基配方

愈伤组织诱导培养基采用MS基本培养基，附加不同浓度的6-BA和2，4-D，另加3%蔗糖、0.7%琼脂粉或0.1% Gelrite，pH 5.8。

不定芽分化培养基采用MS基本培养基，附加不同浓度的6-BA和NAA，其他同上。

生根培养基采用1/2MS培养基，附加0.1 mg/L NAA、3%蔗糖、0.7%琼脂粉，pH 5.8。

1.4 培养条件

培养过程在光照培养箱中进行，培养温度为25 ℃。愈伤组织诱导时，为24 h黑暗培养；不定芽分化和生根过程，光照周期为16 h光照，8 h黑暗培养。