血清HE4和CA125联合检测在卵巢癌早期诊断的临床价值

[摘要] 目的 探讨HE4、CA125单独和联合检测，在卵巢癌诊断及疾病转归中的价值，探讨HE4水平与卵巢癌病理分型的关系，而且与肿瘤分期的相关性。方法 应用ELISA法检测血清中HE4水平，应用电化学发光法检测血清CA125水平，其中卵巢癌的妇女40例、卵巢良性肿瘤30例、卵巢子宫内膜异位囊肿30例、健康妇女40例，比较各组的水平差异。 结果 在卵巢癌组血清HE4及CA125水平明显高于其他各组，差异均有统计学意义（P

[关键词]人附睾蛋白4；CA125；卵巢癌；早期诊断

[中图分类号] R737.31 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）10-23-03

卵巢癌起病隐匿，预后差，死亡率高。随着肿瘤细胞减灭术及有效化疗的使用，其5年存活率有一定提高，但仍维持在30%左右，而早期卵巢癌患者治疗后5年存活率高达90%。因此，早期诊断是改善卵巢癌预后的关键。目前，最常用于早期诊断卵巢癌的血清指标物是CA125，但其在盆腔炎症、子宫内膜异位症等疾病以及任何刺激到腹膜的损伤均可出现升高[1]，故应用CA125诊断卵巢癌假阳性率较高，有时还会导致不必要的手术。新型肿瘤标志物――人附睾蛋白4（human epididymis gene product 4，HE4）被认为是一个对卵巢癌的早期诊断和鉴别具有重要价值的血清指标，是近年研究热点，本研究通过监测不同病理类型及临床分期卵巢癌患者术前、术后血清HE4及CA125的水平变化。探讨HE4、CA125单独和联合检测，在卵巢癌诊断及疾病转归中的价值，可以评估HE4在汉族人群中诊断卵巢癌的敏感度和特异度，并与欧美国家数据对比。为早期诊断卵巢癌及治疗监测选择敏感的肿瘤标志物提供理论基础。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2010年12月～2012年10月在福建医科大学附属第一医院妇产科初次住院手术治疗的盆腔肿物患者，所有患者均无明显影响肿瘤标志物的合并症存在，且术前未经放化疗等治疗。根据术后石蜡病理分为卵巢恶性肿瘤组40例、卵巢良性卵巢瘤30例，卵巢子宫内膜异位囊肿30例。卵巢癌组手术病理分期按照国际国际妇产科联盟（FIGO）标准：Ⅰ期11例，Ⅱ期6例，Ⅲ期19例，Ⅳ期4例。高分化6例，中分化11例，低分化23例。包含浆液性卵巢癌21例，黏液性卵巢癌13例，透明细胞癌2例，卵巢子宫内膜腺癌4例。卵巢恶性肿瘤患者年龄11～69岁，（47.57±13.45）岁，非卵巢恶性肿瘤患者年龄16～71岁，平均（40.57±14.45）岁，取材前患者均未接受任何相关治疗。并选择本院同期体检的健康妇女40例，抽取肘静脉血检测HE4和CA125。以上病例采血时均非月经期，无甲状腺、乳腺疾病及其他肿瘤病史。

1.2 方法

1.2.1 标本收集 所有血液标本取自术前2、3 d及术后第7天（其中10例卵巢恶性肿瘤患者经全面分期手术）空腹肘静脉全血3 mL，置于未加抗凝剂的试管中，标本采集后在室温下静置1 h，离心机离心后（3000 r/min）取上清，保存在-80℃冰箱待测。健康妇女组标本采集同患者组。

1.2.2 实验方法 血清HE4采用ELISA法测定，其试剂盒购自瑞典Conag公司严格按照说明书操作。酶标仪：伯乐550，HE4测定值>150 pmol/L为阳性。血清CAl25采用电化学发光方法定量测定仪器：罗氏e601，试剂：罗氏配套试剂，严格按照说明书操作，CAl25测定值>35 U/mL为阳性，

1.3 统计学处理

采用SPSS13.0软件进行统计学处理。HE4和CA125水平以中位数（M）表示，以病理诊断为标准，绘制ROC曲线，计算灵敏度和特异度。多组间比较采用非参数Kruskal-Wallis检验，两两比较采用Mann-Whitney检验。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 各组血清HE4、CA125水平比较

在卵巢癌、卵巢良性肿瘤、卵巢子宫内膜异位囊肿及健康妇女血清中，HE4的中位数分别是103.00（77.85，175.91），24.75（7.56，45.00），36.05（28.75，50.93），44.90（34.25，54.00） pmol/L。CA125的中位数分别是76.48 （15.48，433.03）、22.73（11.65，30.89）、86.51（48.65，312.38）、21.00（11.50，31.00）U/mL；血清HE4水平在卵巢癌组明显高于其他各组，差异均有统计学意义（x2=79.792，P0.05）。

血清CA125水平在卵巢癌组与良性肿瘤组、正常组有差别（x2=46.891，P0.05），异位囊肿组与良性肿瘤组、正常组有差别（P0.05）。

2.2 卵巢恶性肿瘤组术前血清HE4水平与年龄、病理类型、病理分级、临床分期之间的关系

血清HE4与年龄相关，差异有统计学意义（r=0.324，P

2.3 经过满意的卵巢癌全面分期手术患者术后血清HE4水平

10例经过满意的卵巢癌全面分期手术患者术后血清HE4水平32.19（21.67～293.40）pmol/L明显低于术前血清水平63.37（29.10～444.80）pmol/L，差异有统计学意义（Z=-2.310，P=0.021）.

2.4 血清HE4的诊断阈值

以健康妇女、卵巢良性肿瘤及卵巢子宫内膜异位囊肿作参考人群，血清HE4水平在67 pmol/L时，为最佳界值点。HE4诊断卵巢恶性肿瘤的ROC-AUC为0.969，敏感度为92.5%，特异度98%。见图1。

在早期（Ⅰ、Ⅱ期）卵巢恶性肿瘤中，HE4的检出率83.33%，CA125检出率38.8%，在晚期（Ⅲ、Ⅳ）卵巢恶性肿瘤中HE4的检出率100%，CA125检出率72.72%，联合HE4及CA125检测，敏感度95.4%，特异度96.8%。按HE4试剂盒提供的参考值，>150 pmol/L，诊断卵巢恶性肿瘤的敏感度为27.5%，特异度为100%，两者比较，差异有统计学意义（P

3 讨论

3.1 血清HE4的表达及意义

HE4基因最早是Kirchoff等[3]在人附睾远端上皮细胞中发现的，为WFDC2基因的编码产物，是一酸性和半胱氨酸丰富的多肽为特点的分泌蛋白。HE4基因定位在染色体20q12～q13.1，包括5个外显子和4个内含子，约12 kb长。Wang等[2]研究显示，HE4在正常的卵巢组织和癌旁组织中不表达，而在卵巢癌组织中高表达。近年来有研究者提出[4]，HE4在消化系统、淋巴结、肌肉组织中不表达；在近端气管上皮、男性附睾和女性生殖道中高表达。以上研究表明HE4是卵巢癌的相关基因，可以作为一种有效的卵巢肿瘤标志物。Moore等[5]提出：特异性为95%前提下，HE4诊断卵巢癌的敏感性最高；尤其对于鉴别良性肿瘤和I期卵巢癌患者方面，联合检测HE4和CA125对卵巢癌的诊断效能最高，进一步为HE4早期预测卵巢癌提供了依据。

本研究显示血清HE4水平在卵巢癌组明显高于其他各组；卵巢良性肿瘤、内膜异位囊肿及健康妇女两两比较，差异无统计学意义。血清CA125在卵巢癌及卵巢内膜异位囊肿患者均会出现升高，对卵巢肿瘤的诊断引起混淆，而血清HE4有更好的鉴别作用，减少误诊，对于患者可以避免不必要的手术和过度治疗。而且CA125 水平仅在约50%的早期卵巢癌患者中升高[6]。本研究显示不论在早期还是晚期卵巢癌，HE4检出率均高于CA125，这与刘亚南等[7]研究结果一致，进一步证实HE4在对卵巢良恶性疾病的鉴别及早期诊断方面优于CA125。

有研究[8-9]表明血清CA125水平及年龄都是影响卵巢癌患者预后的因素。本研究显示卵巢癌组术前血清HE4水平与年龄相关，与病理分级、临床分期密切相关。考虑随着卵巢癌病情进展，HE4表达水平增高，提示HE4蛋白可能参与了肿瘤细胞的侵袭和转移，HE4可能是卵巢癌预后不良的标记物。Drapkin等[10]通过免疫组化研究发现，HE4在大多数非卵巢肿瘤组织中不表达或低表达，在卵巢癌组织中的表达与组织类型相关，HE4在93%的浆液性卵巢癌和100%的子宫内膜癌中表达，在透明细胞癌中仅有50%表达，黏液性癌中未见表达。本研究显示血清HE4在浆液与黏液性卵巢癌水平不同，由于研究病例有限，可能与总体存在差异，提示黏液性卵巢癌与非黏液性卵巢癌在发生机制、信号传导途径及激活、基因表达等存在差异，这提示HE4的表达与卵巢癌病理类型相关。

3.2 血清HE4的诊断阈值

本研究应用ROC曲线来寻找HE4诊断卵巢癌的最佳界值点。以健康妇女及卵巢良性疾病为参照，其ROC曲线上最佳界值点为67 pmol/L，HE4诊断卵巢癌的敏感度92.5.%特异度98%，联合HE4及CA125检测，敏感度最高。按HE4试剂盒提供的参考值>150 pmol/L为诊断界值点，诊断卵巢恶性肿瘤的敏感度为27.5%，特异度为100%。由于HE4试剂的研发在欧美人群，诊断界值点的差别可能是由于所选择样本的人种不同，其体质及特性有别所致；同时本研究所使用的血清标本为冻存标本，并非新鲜血清，这可能使血清HE4浓度人为降低。本研究说明应在不同人种不同地域进行大规模临床验证，确立血清HE4最佳诊断区间 。

3.3 血清HE4在卵巢癌患者术后病情监测及预后评估中的作用

Havrilesky等[11]报道，56%患者的血清HE4比CA125提前6～69周出现升高。本研究显示，经过全面卵巢癌分期手术患者术后血清HE4水平明显低于术前血清水平，差异有统计学意义（P

综上，提示HE4与CA125有各自的分布特点，两者具有互补性，血清HE4和CA125联合检测能减少漏诊率及误诊率，提高卵巢癌早期诊断的能力。上述研究提示血清HE4具备作为卵巢肿瘤标志物的优势条件。

[参考文献]

[1] Sjovall K，Nilsson B，Einhorn N.The significance of serum CAl25 in malignant and nonmalignant diseases[J].Gynecol Oncol，2002，85（1）：175-178.

[2] Kirchhoff C，Habben I，Ivell R，et a1.A major human epididymisspecific cDNA encodes a protein with seqence homology to extracellular proteinase inhibitors.Biol Repord，1991，45：350-357.

[3] Wang K，Gan L，Jeffrey E，et al.Monitoring gene expression profile changes in ovariancarcinoma as using cDNA microarray[J].Gene，1999，229：101-108.

[4] Bingle L，Singleton V，Bingle CD.The putative ovarian tumourmaker gene HE4（WFDC2），is expressed in normal tissues and undergoes complex alternative splicing to yieldmuhiple protein isoforms[J].Oncogeue，2002，21（17）：2768-2773.

[5] Moore RG，Brown AK，Miller MC，et al.The use of multiple novel tumor biomarker for the detection of ovarian carcinoma in patients with a pelvic mass[J].Gynecol Oncol，2008，108（2）：402-408.

[6] Bast RC Jr，Badgwell D，Lu Z，et al.New tumor markers：CA125 and beyond[J].International Journal of Gynecological Cancer，2005，15（Suppl）：274-281.

[7] 刘亚南，叶雪，程洪艳，等.人附睾蛋白4联合CA125在卵巢恶性肿瘤与子宫内膜异位症鉴别诊断中的价值[J].中华妇产科杂志，2010，45（5）：363-366.

[8] Osman N，O'Leary N，Mulcahy E，et al.Correlation of serum CA125 with stage， grade and survival of patients with epithelial ovarian cancer at a single centre[J].Ir Med J，2008，101（8）：245-247.

[9] Obermair A，Fuller A，Lopez-Varela E，et al.A new prognostic model for FIGO stage 1 epithelial ovarian cancer[J].Gynecol Oncol，2007，104（3）：607-611.

[10] Drapkin R，Horsten HH，Lin Y，et a1.Human epididymisprotein 4（HE4）is a secreted glycoprotein that is overex.pressed by serous and endometrioid ovarian carcinomas[J].Cancer Res，2005，65：2162-2169.

[11] Havrilesky LJ，Whitehead CM，Rubatt JM，et a1.Evaluation of biomarker panels for early stage ovarian cancer detection and monitoring for disease recurrence[J].Gynecol Oncol，2008，110（3）：374-382.

（收稿日期：2013-04-22）