HPLC法测定钩藤中钩藤碱和异钩藤碱含量

【前言】HPLC法测定钩藤中钩藤碱和异钩藤碱含量由文秘帮小编整理而成，但愿对你的学习工作带来帮助。Henan Province Zhumadian Institute for Food and Drug Control，Zhumadian 463000，China [Abstract] Objective Establish the HPLC method to determine the contents of rhynchophylline and isorhynchophylline in Uncaria rhynchophylla and provide scientific...

[摘要]目的 建立中药钩藤中钩藤碱和异钩藤碱含量的高效液相色谱检测方法，为中药钩藤中有效成分的含量测定提供科学的参考。 方法 高效液相色谱条件为：色谱柱 Phenomenex C18 （250 nm×4.0 nm， 5μm），流动相：甲醇-水（55∶45），紫外检测波长：254 nm，流速：1.0 mL/min，柱温：28℃， 进样量：20μL。 结果 以峰面积为纵坐标浓度为横坐标，计算得到钩藤碱和异钩藤碱回归方程分别为Y=0.999 E + 6x-21 133，R2=0.9998和Y=1.008 E+ 6x-13 556，R2=0.9999。结果显示钩藤碱和异钩藤碱分别在0.244～1.534 μg和0.226～1.288 μg浓度范围内其浓度与峰面积具有良好的线性关系。另外本法在精密度、稳定性、重复性上均取得了较好结果。 结论 高效液相色谱法测定钩藤中藤碱和异钩藤碱含量，具有快速、简便、重复性好的特点，值得在中药含量测定上大力推广应用。

[关键词] 钩藤；钩藤碱；异钩藤碱；含量检测；高效液相色谱法

[中图分类号] R284.1 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2013）13-97-02

Study of the content determination of rhynchophylline and isorhynchophylline in Uncaria rhynchophylla by hplc

ZHAO Xiaoli MA Yan

Henan Province Zhumadian Institute for Food and Drug Control，Zhumadian 463000，China

[Abstract] Objective Establish the HPLC method to determine the contents of rhynchophylline and isorhynchophylline in Uncaria rhynchophylla and provide scientific guidance for determining the contents of active ingredient in Uncaria rhynchophylla. Methods Contents of rhynchophylline and isorhynchophylline was measured by HPLC. Column of Diamonsi （250 nm×4.0 nm，5μm），solvent system：MethanolH2O（5545），UV wave：254 nm，Flow rate：1.0 mL/min，column temperature：28℃，Injection volume：20μL. Results We established the regression equation of rhynchophylline and isorhynchophylline Y=0.999 E+6x-21133，R2=0.9998 and Y=1.008 E+ 6x-13556，R2=0.9999，by making peak area as the ordinate and concentration as abscissa. Moreover this method got good results in precision，stability and repeatability. Conclusion The method that determining the contents of rhynchophylline and isorhynchophylline in Uncaria rhynchophylla by HPLC has the advantage on quick，simple，reproducible，and has a huge value in determining the contents of Chinese traditional Medicine.

[Key words] Uncaria rhynchophylla；Rhynchophylline；Isorhynchophylline；Content determine；HPLC

钩藤（Uncaria rhynchophylla）是一种具有降血压、镇静、抗惊厥作用的传统中药[1]。它属于茜草科，主要可分为大叶钩藤、毛钩藤、无柄果钩藤三大类[2]。随着现代分离鉴定技术的进步，目前人们已从钩藤中分离鉴定得到30多种化合物，其中生物碱为其主要的活性成分[3]。传统的测定钩藤中生物碱含量的方法为薄层色谱法，但是随着现代分析技术的进步，高效液相色谱技术已成为中药中有效成分检测的最精确、有效的手段[4]。本研究利用高效液相色谱技术确定了钩藤碱和异钩藤碱在中药钩藤中含量的测定方法，此方法具有准确度高、重复性好、快速、简便的优点，便于在鉴定工作中推广应用，现将测定方法报道如下。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（大连伊利特分析仪器有限公司）；甲醇（阿拉丁股份有限公司，色谱纯）；去离子水（阿拉丁股份有限公司，色谱纯）；其他试剂均为分析纯；钩藤碱和异钩藤碱对照品（上海有机药物研究所）；中药钩藤（华东医药股份有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性

色谱柱：Diamonsil C18（150 nm×4.6 nm，5μm），流动相：甲醇-水（55∶45），紫外检测波长：254 nm，流速：1.0 mL/min，柱温：28℃，进样量：20μL。

2.2 对照品与供试品溶液的制备

对照品制备：将5 mg钩藤碱和异钩藤碱对照品用甲醇溶液溶解，并用容量瓶定容至5 mL，得到钩藤碱和异钩藤碱的原液。再分别取20、40、80μL的原液用加甲醇分别定容到2 mL，得到溶度分别为20、40、80 μg/mL的钩藤碱异钩藤碱对照品。供试品制备：取钩藤粉末2 g，放入200 mL的甲醇中浸泡24 h之后再超声30 min，过滤得到供试液。

2.3 线性关系考察

精密量取20μL浓度分别为20、40、80μg/mL钩藤碱、异钩藤碱对照品进样，并以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制其含量的HPLC标准曲线，得到钩藤碱和异钩藤碱的线性方程分别为Y=0.999 E + 6x-21 133，R2=0.9998和Y = 1.008 E+ 6x-13 556，R2=0.9999。结果显示钩藤碱和异钩藤碱分别在0.244～1. 534 μg和0.226～1.288μg浓度范围内其浓度与峰面积具有良好的线性关系。

2.4 实验方法精密度、稳定性、重复性测试

精密称取供试品溶液5次，按测定对照品线性方程的方法测定其峰面积，结果显示中药钩藤提取液的峰面积RSD为1.15%，这表明本次实验所用的高效液相其精密度良好。之后再取钩藤提取液样品每次间隔2 h按上述方法进样，得到RSD的值为0.84%，表明本实验所用的测定方法具有稳定性。取同一批次钩藤供试品按进样并测定其含量，结果显示钩藤碱和异构碱的含量比分别为1.352% 和1.547%，RSD值为1.18%，表明测定方法重复性良好。

2.5 钩藤、异钩藤含量测定

取9份钩藤供试品，每份20μL，每次3份，分3次进样，测定异钩藤碱、钩藤碱信号值，并将其分别代入线性回归方程，得出中药钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的含量分别为1.352% 和1.547%。

2.6 提取方法的优化

取中药钩藤20 g，分别用等量200 mL的乙醚、乙醇、甲醇、氯仿进行浸提。浸提24 h后，再对样品进行超声震荡30 min，之后对其过滤，并分别取20μL的供试品进样，测定其不同提取方法下中药钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的含量。测试结果表明，甲醇提取液中钩藤和异钩藤碱的含量最高，其含量分别高达1.352%和1.547%，其值与其他溶剂组相比，在统计学上具有显著性差异（P

2.7 统计学处理

实验数据均采用SPSS15.0与DPS7.0统计软件包联合统计，资料符合正态性及方差齐性检验采用单因素方差One-way ANOVA分析，文中计数资料采用x2检验，统计学差异为P

3 讨论

本研究中建立的中药钩藤中钩藤和异钩藤碱含量的高效液相色谱测定法具有精确度、稳定性高、重复性好、简洁、快速的特点，这为之后中药中有效成分的含量测定提供了有效的参考依据。对于浸提溶剂的优化，本研究分别选用了乙醚、乙醇、甲醇、氯仿对中药钩藤进行浸提，结果显示用甲醇做溶剂，得到的钩藤碱（1.352%）和异钩藤碱（1.547%）的含量远远高于其他溶剂，并且具有显著性差异（P

[参考文献]

[1] 胡晓波.复方杜仲片中钩藤的鉴定及其钩藤碱的含量测定[J].中成药，2011，12 （9）：13.

[2] 王晓颖，刘永静，陈丹，等.HPLC法测定不同产地钩藤中钩藤碱的含量分析[J].中国中医药科技，2011，5（11）：115-117.

[3] 仲云，冯瑞芝.钩藤及其同属植物生物碱含量的紫外分光HPLC测定[J].中草药，2011，24（9）：462-465.

[4] 李思蒙，桂新.钩藤药材中异钩藤碱含量的超高效液相色谱和高效液相色谱法测定[J].时珍国医国药，2012，13（5）：104-106.

[5] 王英锋，魏璐雪，王保中.高效液相色谱法测定钩藤中钩藤碱、异钩藤碱含量[J].药物分析杂志，2009，16：56-59.

[6] 郑嘉宁，王定勇.大叶钩藤生物碱类化学成分研究[J].中医药导报，2009，15（1）：18.

（收稿日期：2013-05-07）