番茄红素对刀豆蛋白诱导的小鼠肝纤维化的影响

[摘要]目的 观察对刀豆蛋白诱导鼠肝损干预前后的肝纤维化半定量计分（SSS计分）变化和小鼠肝脏大体形态及病理学HE染色结果变化，探讨番茄红素对刀豆蛋白诱导的小鼠肝纤维化的影响。 方法 昆明小鼠64只，随机分为4组：正常组8只、模型组8只、预防组8只及治疗组40只，治疗组按治疗时间（1～5周）分为5组，每组8只。刀豆蛋白A（Con A）经腹腔注射8周建立肝纤维化小鼠模型。预防组在建模的同时、治疗组在建模成功后予番茄红素20 mg灌胃给药，每天1次，观察肝纤维化半定量计分变化水平，同时观察小鼠肝脏大体形态及病理学HE染色结果，并与正常组及模型组比较。 结果 预防组及治疗组肝病理学染色结果好转明显。 结论 番茄红素能有效对抗实验小鼠肝纤维化，抑制了肝纤维化的发展速度，并可能逆转肝纤维化。

[关键词]番茄红素；肝纤维化半定量计分；小鼠肝脏病理学；HE染色

[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）09-30-03

肝硬化（hepatic cirrhosis）是临床常见的慢性进行性肝病，由一种或多种病因长期或反复作用形成的弥漫性肝损害，肝硬化的主要发病机制是进行性纤维化。刀豆蛋白诱导的小鼠肝纤维化模型已经被许多研究证实与HBV致肝纤维化的发病机制类似，本研究试图探讨在刀豆蛋白诱导的小鼠肝纤维化模型下用番茄红素干预治疗，探讨番茄红素预防和治疗肝纤维化的作用。

1 材料与方法

1.1 实验材料

（1）实验用昆明小鼠：体重分别在18～22 g的小鼠64只，来自江苏大学医学院动物实验中心，均在实验中心短期喂养1周适应后开始试验。（2）番茄红素及Con A试剂：购自上海英轩医药有限公司的番茄红素纯度为99%；购自sigma公司实验用的Con A。

1.2 实验方法

1.2.1 实验小鼠分组 所有实验小鼠随机分为正常对照组（N组8只）、模型组（M组8只）、建模同时即给予番茄红素灌胃组简称预防组8只和建模后给予番茄红素灌胃组简称治疗组40只一共四大组；治疗组分别按番茄红素灌胃时间分为1～5组，每组8只。

1.2.2 实验小鼠的处理 正常对照组每周1次腹腔注射PBS；模型对照组每周1次腹腔注射Con A-PBS溶液20 mg/kg；预防组按模型组造模，同时予番茄红素20 mg灌胃给药，每天1次；治疗组按模型组造模8周后停止注射Con A，然后每天1次给予番茄红素20 mg灌胃。

1.2.3 实验小鼠的处死 所有小鼠的处死方法均为摘除眼球取血，将取血后的小鼠给予颈椎脱臼方法处死，正常对照组、模型对照组及预防组于第8次注射后处死然后取出肝脏。治疗组分别于治疗1、2、3、4、5周后每次处死8只小鼠（灌胃后24 h）。

1.3 试验小鼠观察指标及检测

（1）半定量计分系统（SSS）：分析肝纤维化半定量计分（2）肝组织病理学检查：采用HE染色、进行病理学检查。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 小鼠的一般情况

在正常对照组和预防组小鼠日常饮食、活动正常，没有明显变化；模型对照组及治疗组小鼠在建立肝纤维化模型阶段即出现日常饮食、活动减少，而治疗组随着番茄红素灌胃时间（治疗时间）的延长，试验小鼠逐渐恢复饮食、活动增加。治疗期间未出现小鼠死亡发生和明显不良反应。

2.2 各组肝纤维化半定量计分变化

3 讨论

肝硬化是我国的常见病、多发病，乙型肝炎病毒（HBV）的慢性感染是造成肝硬化的主要原因。肝纤维化是发展为肝硬化的必由阶段，是肝硬化的前期表现。肝纤维化是指由各种致病因子所致肝内结缔组织异常增生，导致肝内弥漫性细胞外基质过度沉淀的病理过程它不是一个独立的疾病，而是许多慢性肝脏疾病均可引起肝纤维化。目前研究表明肝纤维化可以逆转，因此对肝纤维化治疗的研究，具有重要的现实意义和社会意义。

在我国乙型肝炎病毒（HBV）的慢性感染是造成肝硬化的主要原因，肝纤维化是发展为肝硬化的必由阶段。Con A诱导小鼠肝纤维化与HBV致肝纤维化的发病机制类似[1]。用Con A诱导小鼠肝纤维化来研究乙型肝炎病毒导致肝纤维化是一种理想选择。肝细胞炎症坏死是肝纤维化与肝硬化的启动因素，又是其向前进展的推动因素，其中脂质过氧化在肝细胞损伤诱导的肝纤维化病理中有重要作用。

我们已经观察到番茄红素能有效对抗实验小鼠肝纤维化，本实验结果显示番茄红素预防组及治疗组肝纤维化程度明显减轻，治疗组随着治疗时间的延长，纤维组织增生和炎细胞浸润逐渐改善。

番茄红素是一种是所有类胡萝卜素中最有效的单线态氧淬灭剂[2]，其中尤以抗氧化，防止心血管疾病，提高免疫力和抗癌作用突出，目前认为：（1）番茄红素具有清除活性氧及抗脂质过氧化作用，特别是番茄红素能够使肝微粒体还原型辅酶Ⅱ，细胞色素P450，还原型辅酶Ⅱ等活性下降 [3]；并可能通过抑制肝脏的脂质过氧化反应达到保护肝脏功能的作用[4]。从而减轻了肝细胞和肝脏结构的破坏，抑制肝纤维化的发展；（2）一些研究提示肝细胞凋亡可能是许多肝病肝细胞死亡的共同通路，凋亡细胞的死亡可能与肝纤维化或硬化发生有关[5]，并明确了肝纤维化的细胞学基础在于肝星状细胞（HSC）活化，肝细胞损伤尤其是肝细胞凋亡小体直接刺激HSC 活化等[6]，成为肝纤维化治疗的热点。番茄红素是否可能以通过改变肝细胞异常凋亡率或改善肝细胞凋亡失衡，从而抑制了肝纤维化的发展速度，目前还没有明确结论，我们将进一步检验和讨论。

总之，番茄红素作为一种有益营养成分，经济实用，有望作为人群抗肝纤维化食品或药物加以推广。

[参考文献]

[1] 李鸿立，田聆，魏于全，等.刀豆素蛋白A诱导小鼠肝纤维化模型的建立[J].免疫学杂志，2004，20（5）：390.

[2] 杨甲平，齐宝宁.番茄红素对CCl4致大鼠慢性肝损伤的保护作用[J].现代中医药2009，29（6）：64-66.

[3]潘红志，常东，那立欣，等.番茄红素对镉损伤大鼠氧化应激影响[J].微量元素与健康研究，2007，24（2）：6-7.

[4] 张炜，范钰，朱丽群，等.番茄红素对小鼠肝纤维化的治疗作用[J].时珍国医国药，2008，14（7）：219-221.

[5] 刘梁英，李孝生，万晓强.川守嗪和大黄酸对肝细胞增殖和凋亡的影响[J].中华肝脏病杂志2006，14（3）：219-221.

[6] 周滔，刘成海.肝细胞凋亡在肝纤维化中的作用[J].肝脏，2007，12（6）：503-505.

（收稿日期：2013-03-27）