白芍、赤芍及芍药苷、芍药内酯苷对综合放血法致血虚小鼠补血作用的比较研究

[摘要] 目的：研究白芍、赤芍及其有效成分芍药苷、芍药内酯苷对血虚小鼠的补血作用。方法：采用综合放血法复制小鼠血虚模型，灌胃给予白芍水提物、赤芍水提物，检测小鼠外周血象，根据实验结果和白芍、赤芍水提物中芍药苷、芍药内酯苷的含量，进一步采用同一实验方法进行芍药苷、芍药内酯苷补血作用比较研究。 结果：造模第7天，2 g·kg-1白芍和2 g·kg-1赤芍对红细胞和血红蛋白升高作用明显（P

[关键词]白芍；赤芍；芍药苷；芍药内酯苷；血虚证；红细胞；血红蛋白

白芍[1]为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根，是中医常用补血药，苦、酸，微寒，归肝、脾经，具有养血调经，敛阴止汗，柔肝止痛，平抑肝阳的功效，用于血虚萎黄，月经不调，自汗，盗汗，胁痛，腹痛，四肢挛痛，头痛眩晕。赤芍[2]为毛茛科植物芍药P. lactiflora Pall.或川赤芍P. veitchii Lynch的干燥根，是中医常用活血药，苦、微寒，归肝经，具有清热凉血，散瘀止痛的功效，用于热入营血，温毒发斑，吐血衄血，目赤肿痛，肝郁胁痛，经闭痛经，瘕腹痛，跌扑损伤，痈肿疮疡。市场调查表明[3]流通的赤芍主要为芍药P. lactiflora野生品的根，与白芍来源一致。二者在临床上不混用，白芍长于养血敛阴，赤芍长于凉血活血。

白芍有补血之效，常与当归、熟地黄等配伍，可以治疗血虚诸证；赤芍具有清热凉血，活血散瘀之功，临床应用中赤芍亦可以用于补血，当患者血虚有瘀时，可将白芍替换为赤芍，或者赤芍与白芍同用，利用赤芍能活血祛瘀并有补血作用，使患者瘀血去而新血生，以达到补血和祛瘀的功效。但临床上常主要以白芍为补血药，可能与赤芍能活血散瘀而耗血有关。

现代研究表明，赤芍和白芍含有单萜类物质，包括芍药苷、芍药内酯苷等[4-5]，芍药苷具有明确的补血作用[6]，但对芍药内酯苷的药理作用研究较少。本实验通过赤芍、白芍和芍药苷、芍药内酯苷补血作用的对比研究，探讨白芍补血作用的有效成分。

1材料

1.1动物 雄性昆明种小鼠，体重（22±2） g，由北京维通利华实验动物有限公司提供，许可证号SCXK（京）2012-0001。

1.2药品 受试药：白芍水提物、赤芍水提物、芍药苷、芍药内酯苷。白芍水提物制备：取白芍饮片加水12倍，浸泡2 h，加热煮沸，水提1.5 h，过滤，滤渣再加水10倍，加热煮沸，水提1 h，过滤，合并滤液，浓缩，烘干，称重，得白芍水提物，出膏率为30%。经HPLC测定，含芍药苷7.35%，芍药内酯苷4.18%。赤芍水提物制备：取赤芍饮片同上法制备得赤芍水提物，出膏率为36%。经HPLC测定，含芍药苷7.62%，含芍药内酯苷为0。芍药苷、芍药内酯苷制备：自制，纯度均高于96%。阳性药：四物颗粒，吉泰安（四川）药业有限公司，批号1206064。经HPLC测定，芍药苷质量分数为0.536%。

1.3仪器与试剂 Beckman Coulter Ac. T 5血细胞分析仪，Ac. T 5diff Rinse（批号03202C21926），Ac. T 5diff WBC Lyse（批号16502B02838），Ac. T 5diff Fix（批号17602E07007），Ac. T 5diff Hgb Lyse（批号04802A0170），以上均由美国Beckman Coulter. Inc生产。

2方法[7]

2.1白芍和赤芍补血实验 适应性喂养后，将90只小鼠按体重随机分成9个组，即正常对照组、血虚模型组、四物颗粒组（2.5 g·kg-1）、白芍3个剂量组、赤芍3个剂量组，每组10只。对照组、模型组每天灌胃蒸馏水，白芍组给予白芍2，1，0.5 g·kg-1（按生药量计，下同），赤芍组给予赤芍2，1，0.5 g·kg-1。按每10 g体重灌胃0.2 mL给药，每日1次。

小鼠连续给药7 d，然后进行为期2周的造模。模型组、四物颗粒组、白芍组、赤芍组隔天由眼底静脉丛放血0.3 mL，次日温水游泳20 min，同时每天饲料按75 g·kg-1体重控制，自由饮水，造模期间仍继续给药。于第0，7，14天眼眶采血40 μL，检测血象。

2.2芍药苷和芍药内酯苷补血实验 分组与实验方法同上。其中芍药苷分别给予120，60，30 mg·kg-1，芍药内酯苷分别给予120，60，30 g·kg-1。

2.3统计学方法 实验数据采用SPSS软件进行One-way ANOVA统计学分析，结果用±s表示。

3结果

3.1赤芍、白芍对红细胞数量的影响 造模第7天，与对照组比较，模型组的红细胞数明显降低（P

3.2赤芍、白芍对血红蛋白含量的影响 造模第7天，与对照组比较，模型组的血红蛋白含量明显降低（P

3.3芍药苷、芍药内酯苷对红细胞数的影响 造模第7天，与对照组相比，模型组的红细胞数明显降低（P

3.4芍药苷、芍药内酯苷对血红蛋白含量的影响 造模第7天，与对照组相比，模型组的血红蛋白含量明显降低（P

4讨论

白芍和赤芍是临床常用中药，其功效有别，赤芍长于清热凉血散瘀，白芍长于敛阴补血柔肝。《注解伤寒论》云“芍药，白补而赤泻，白收而赤散也。”[8]赤芍、白芍中含有的成分较相似，二者均含有单萜苷类成分，如芍药苷、氧化芍药苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷等，其中芍药苷是药典[1-2]规定的控制赤芍和白芍质量的成分。赤芍、白芍功效迥异，都用芍药苷控制质量无法明确区分二者。研究[9]发现市售赤芍中含有较多的芍药苷，但芍药内酯苷的含量极少；白芍中含有芍药苷，同时芍药内酯苷的含量较赤芍中多。本研究对赤芍、白芍及其提取物中芍药苷和芍药内酯苷进行含量测定，结果发现赤芍中芍药苷的含量相对较高，但不含芍药内酯苷；白芍中含有芍药苷和芍药内酯苷，与文献报道一致。芍药苷与芍药内酯苷是同分异构体，芍药苷的药理作用已有较多的研究报道，由于芍药内酯苷较难分离纯化[10]，其单一成分药理作用的文献报道较少。已有研究[11]发现，赤芍、白芍对失血法致小鼠血虚模型均有补血作用，而本实验的对比研究也证实了该报道。赤芍与白芍均含有芍药苷，临床补血药常选用白芍，白芍中除芍药苷外的其他成分如芍药内酯苷补血作用的研究就很有意义了。

血虚证是临床常见病症，多由生血无源、失血过多、大病亏虚等不同原因引起。目前关于复制血虚模型的方法主要有放射线辐照法、腹腔注射环磷酰胺法和综合放血法3种。本实验采用综合放血法，模拟大量失血，使小鼠“有形之血不能速生”，并结合温水游泳，每日限食等措施，使得小鼠“无形之气”不能固益，血液亏损且新血化生不足，表现为外周血象血细胞数明显降低，从而复制出血虚模型。综合放血法所致的血虚模型与传统中医理论契合，是补血实验常用模型。

四物汤是中医传统的补血方剂，由当归，川芎，白芍，熟地黄等组成，具有较好的临床疗效，并已经开发研制出中成药四物颗粒。已有研究表明，四物颗粒[12]对综合放血法致血虚小鼠具有补血作用，故本实验采用四物颗粒作为阳性对照药。文献[13]中四物颗粒对小鼠补血实验的用量为9～2.25 g·kg-1，本实验根据四物颗粒说明书的服用量计算出小鼠的用量大约为2.5 g·kg-1；采用HPLC测定四物颗粒中芍药苷的质量分数为0.536%，故2.5 g四物颗粒中含芍药苷13.4 mg。按药典白芍饮片中芍药苷的含量限度1.2%计算，相当于1.12 g白芍，与本研究中1 g·kg-1白芍剂量相似。实验结果也表明2.5 g·kg-1四物颗粒能升高该模型小鼠的红细胞数与血红蛋白含量，具有补血作用。

实验结果显示，2 g·kg-1白芍、赤芍均能在第7天和第14天升高小鼠的红细胞数与血红蛋白含量；1 g·kg-1白芍亦能在第14天升高血红蛋白的含量，而1 g·kg-1赤芍作用不明显；同剂量组相比，白芍组的红细胞数和血红蛋白含量有升高趋势，但无统计学差异；表明赤芍和白芍对该血虚模型均有补血作用，白芍的补血作用略优于赤芍。

芍药内酯苷各剂量组的红细胞数和血红蛋白含量均有升高，芍药苷仅120 mg·kg-1剂量组的红细胞数和血红蛋白含量升高，即芍药内酯苷的起效剂量为30 mg·kg-1，芍药苷的起效剂量为120 mg·kg-1。同剂量组对比发现，芍药内酯苷的红细胞数和血红蛋白含量皆较芍药苷升高（P

本研究首次探讨了芍药内酯苷的补血作用，发现芍药苷和芍药内酯苷对综合放血法模型小鼠均具有补血作用，芍药内酯苷对该模型起效剂量低、作用强，补血作用更好。依据此实验结果推测，芍药苷是赤芍、白芍具有补血作用的共同有效成分；芍药内酯苷是白芍补血作用优于赤芍的物质基础，可作为白芍在补血作用上区别于赤芍的特征有效成分。本实验采用了综合放血法血虚模型，该模型的造模原理符合中医“血虚”的病因，对小鼠外周血象中红细胞和血红蛋白数影响较明显，但是该模型白细胞数量变化不明显，因此，芍药苷和芍药内酯苷其他模型的补血作用还有待进一步研究。

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Comparative study on effects of blood enriching on mouse model of blood

deficiency syndrome induced by compound method of bleeding， starved

feeding and exhausting of Paeoniae Radix Alba and Paeoniae

Radix Rubra， paeoniflorin and albiflorin

ZHANG Jian-jun*， HUANG Yin-feng， WANG Li-li， LI Wei， WANG Jing-xia， WANG Chun， QU Sheng-sheng

（School of Preclinical Medicine， Beijing University of Chinese Medicine， Beijing 100029， China）

[Abstract] Objective： To study the effects of blood enriching on mouse model of blood deficiency syndrome of Paeoniae Radix Alba and Paeoniae Radix Rubra， paeoniflorin and albiflorin. Method： Building the mouse model of blood deficiency syndrome induced by compound method of bleeding， starved feeding and exhausting of swimming， extract from Paeoniae Radix Alba and Paeoniae Radix Rubra were given during modeling. The amount of RBC，HGB were detected after the treatment. Based on the amount results of RBC，HGB and the paeoniflorin content，albiflorin content in Paeoniae Radix Alba and Paeoniae Radix Rubra， the same model and the same method were used to comparatively study the effect of blood enriching of paeoniflorin and albiflorin. Result： At the 7th day， the amount of RBC and HGB in model mice was significantly increased （P

[Key words] Paeoniae Radix Alba； Paeoniae Radix Rubra； paeoniflorin； albiflorin； blood deficiency syndrome； RBC； HGB

doi：10.4268/cjcmm20131928