益智宁方煎剂改善SHR大鼠冲动行为的实验研究

摘要：目的：观察益智宁方煎剂对ADHD动物模型――自发性高血压大鼠(SHR)冲动行为的影响。方法：按随机摸球法将大鼠分为3组：益智宁方煎药液的高剂量组、益智宁方煎药液的低剂量组和空白对照组，采用“五项选择的连续反应时间任务”(Five-choice serial reaction time task)。方法：检测灌药前后大鼠持续性主动注意力和冲动行为的变化情况。结果：自发性高血压大鼠36只均进入结果分析。益智宁方煎剂高、低剂量组大鼠灌药后不成熟反应率分别为(5.04±1.04)％，(7.23±1.22)％，低于灌药前[(9.85±2.50)％，(9.40±1.73)％，P

关键词：注意缺陷多动障碍；自发性高血压大鼠；冲动行为；益智宁

中图分类号：R-33

文献标识码：A 　文章编号：1673-7717(2007)12-2569-02

注意缺陷多动障碍(Attention Deficit Hypemetivity Dis-order，ADHD)，又名儿童多动症，以注意缺陷、多动、冲动为主要表现，是常见的儿童行为精神障碍，患病率高，且常伴有学习障碍、品行障碍、抽动障碍及某些情绪障碍，严重危害儿童的身心健康，但目前现代医学尚缺乏治愈方法。迄今已有不少中医药治疗ADHD取效的临床报道，但动物实验方面的研究还较少。笔者利用“五项选择的连续反应时间任务”(5-choice serial reaction time task，CSRTT)的方法，检测临床观察疗效较好的益智宁方煎药液对ADHD的动物模型一自发性高血压大鼠(Spontaneous HypertensiveRat，SHR)的冲动行为的影响，现报道如下。材料与方法

1.实验材料

1.1实验动物　实验开始时大鼠周龄为8周，体重为245～290g，以前均未接受过任何实验。每只大鼠均生活在空间为41cm×25cm×15cm的动物笼内，实验开始前可自由饮水及摄食。

1.2实验药品 (1)益智宁方煎剂：益智宁方由龟板、生龙骨、远志、石菖蒲、夜交藤、熟地、党参、云苓、浮小麦、五味子等组成。生药由广州中医药大学附属医院门诊部药房提供，制备成水煎剂后，含生药1.154g/mL，贮存于4℃冰箱中备用。(2)0.9％生理盐水，100mL/瓶。

1.3实验装置　(1)实验箱构造：实验箱大小25cm×25cm×25cm，箱顶可在放人大鼠后封闭，前壁正中通过一有机玻璃活动门连接一饲料盒，由一个通过程序控制的投放装置供给饲料颗粒，大鼠可以推开活动门在饲料盒内觅得饲料。箱顶悬挂一照明灯，可以通过程序控制其开关。实验箱后壁为弧形，壁上等距设置五个小孔，各孔距离前壁正中线的距离相等，孔内各设置一信号灯，作为大鼠的视觉刺激光源，可通过程序控制其开关，各孔前各设置一红外感应器，大鼠用鼻触小孔时可触发感应，自动记录并在相应条件下控制饲料投放装置投放饲料。(2)相关电脑配件及控制软件。

2.实验方法

2.1持续性主动注意力和冲动行为的检测方法(5-CS-RTT)(1)实验条件：在以下实验阶段，每只大鼠均于禁食16～18h后开始训练或检测，并于完成30min后喂给18g饲料颗粒，水可自由获取。

(2)观测指标：大鼠的冲动行为以不成熟反应率衡量，不成熟反应率=不成熟反应次数/实验总次数(正确反应次数+不正确反应次数+遗漏次数+不成熟反应次数)。

(3)实验步骤：①适应训练：共3天，每只大鼠每日训练15min。将禁食16～18h后的SHR大鼠放人实验箱中，让其熟悉箱内的环境，并通过程序使饲料投放装置每15s供给饲料1粒。此阶段训练的目的是让大鼠熟悉饲料盒的位置及饲料通过投放装置供给饲料颗粒的方法。

②预备训练：共7天，每只大鼠每日训练15min。在此训练阶段，将禁食16～18h后的大鼠放入实验箱中，5个信号灯中的某一信号灯亮(按随机顺序)，若大鼠至该信号灯前触发红外感应，则饲料投放装置自动投放饲料1粒，大鼠可通过活动门从饲料盒获取饲料，否则饲料投放装置不会投放饲料。此阶段训练的目的是让大鼠在光源信号与饲料颗粒的投放之间建立稳定的条件反射。

③正式训练：约50天，大鼠在禁食16～18h后放入实验箱，在设定时间后(间歇期)，某一信号灯亮，但亮的时间只持续设定时间(信号期)，大鼠只有在该段时间内及信号灯熄灭后的设定时间内(后续期)，到此信号灯前触发红外感应，才能使饲料投放装置投放饲料；如大鼠在信号灯还未亮(间歇期内)时到某一信号灯前触发红外感应，视其为冲动不成熟反应，该反应将被自动记录并触发照明灯熄灭，一直持续到大鼠打开活动门触发下一次实验。

每只大鼠每日训练1次，每次15min。开始时将信号期设为4s，后续期设为18，后随大鼠对信号反应能力的提高，逐渐将信号期缩短至1s，后续期相应延长到4s。直到大鼠均能够达到如下标准：正确反应率超过50％，遗漏率小于15％，每15min实验时间内(1个实验序列)完成超过20次实验，并表现稳定。

④正式检测：在所有大鼠均达到以上基准后开始正式测试，测试时间为15min，每日测试1次，每次20min。连续记录3天大鼠的不成熟反应率以作分析。

2.2分组方法　将36只雄性SHR大鼠随机分为益智宁高剂量组、益智宁低剂量组和空白对照组，每组12只。

2.3给药方法　每组大鼠在完成上述训练及检测后，于每日上午9：00―10：00灌服药液1次，连续灌服14天，其中，益智宁高、低剂量组分别灌服益智宁方煎剂12.6mL/kg和6.3mL/kg(均稀释为25mL/kg后灌服)；空白对照组灌服生理盐水25mL/kg。灌药14天后，按正式检测方法再次检测大鼠连续3天的正确率和不成熟反应率以作分析。

2.4统计学方法　使用SPSS11.5软件包进行统计分析。治疗前后比较用配对t检验，组间比较用单因素方差分析。结果见表1。

从表l可知，用药前各组间不成熟反应率比较无显著性差异(P>0.05)，具有可比性；灌药后益智宁方煎药液的高、低剂量组大鼠的不成熟反应率均较灌药前显著减少(p0.05)。3组间灌药后比较，益智宁方煎药液的高、低剂量组的不成熟反应率均较空白对照组有显著差异(P

3.讨论

国内多家报道都肯定了中医药治疗ADHD的临床疗效，并发现其疗效与中枢兴奋剂大致相当，虽起效较慢，但长期疗效肯定，且未发现明显毒副反应，反跳少，也无成瘾性形成，因此，中医药治疗儿童多动症引起越来越多的关注。本研究所采用的自发性高血压大鼠(SHR)能同时表现出注意缺陷、冲动、多动等ADHD的核心症状，神经病理、生化和药理研究也支持其作为ADHD动物模型的合理性，是大多数学者公认的目前最好的ADHD动物模型。此外，研究所采用了“五项选择的连续反应时间任务”(5-CSRTT)方法，也是目前同时检测实验动物持续性主动注意力和冲动行为的优秀方案，基于5-CSRTT方法的多项研究已使笔者对ADHD的神经病理机制有了更深刻的认识，故其能作为评价疗效的客观准确的指标。

益智宁方是广州中医药大学李宜瑞教授根据其多年的临床经验拟定的治疗ADHD的成方。该方以补肾平肝、健脾养心、益智宁神为法，是以《千金方》中的孔圣枕中丹加味而成，临床观察其治疗200多例ADHD患儿，疗效甚佳。本项研究的结果表明，益智宁方煎药液能显著改善shr大鼠的持续性主动注意力和冲动行为，首次在动物实验中验证了益智宁方的疗效。实验结果表明，高、低剂量的益智宁方煎药液都能显著减少SHR大鼠的冲动行为，且高剂量的益智宁方煎药液作用较之低剂量更明显。其原因和意义何如，还需更大样本量及进一步的量效关系研究以明确。此外，最近的研究中枢单胺类神经递质的异常，特别是多巴胺对前额叶皮质―基底神经节环路的调控紊乱，可能是ADHD主要的发病机制，故在本项研究的基础上，探讨益智宁方煎药液是否通过提高SHR大鼠中枢纹状体中的多巴胺含量而改善其核心症状。进一步探索中医药治疗ADHD的神经药理机制，将为下一阶段研究的主要方向。