论述高效分子排阻色谱法测定头孢西丁钠中高分子杂质的含量

[摘 要]目的：本文对应用高效分子排阻色谱法测定头孢西钠中高分子杂质的含量进行了论述。方法：本组实验采用了TSK-G2000SWxl（7.8mm×30cm，5μm）柱，流动相采用了磷酸盐缓冲液-乙腈（95：5），检测波长为235nm，流速为0.8mL・min-1，还采用头孢西丁对照法，对头孢西丁钠中高分子杂质的含量进行了检测与计算。结果：头孢西丁对照品的浓度为0.0544～0.0011mg・min-1时，其峰面积呈现出了良好的线性关系，采用高效分子排阻色谱法测定头孢西丁钠中高分子杂质的含量有着较高的效率。结论：采用高效分子排阻色谱法测定头孢西丁钠中高分子杂质的含量，具有操作简单、定量准确等优点，而且这种测定方法的重现性较高，在头孢西丁钠高分子杂质含量测定中值得大力推广。

[关键词]高效分子排阻色谱法 头孢西丁钠 高分子杂质

中图分类号：S158 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2015）16-0347-01

头孢西丁钠属于第二代头孢菌素，这种药物的作用机制主要是通过抑制细菌细胞壁合成实现的，其对抑制ESBLs细菌的滋生有着较强的效果，所以，在临床中有着广泛的应用。头孢西丁钠属于β-内酰胺类头孢菌素，这类药物是临床中一种常用的抗感染药物，但是在使用头孢西丁钠这种药物时，有时会使患者出现过敏反应，经过研究发现，这主要是因为头孢西丁钠中高分子杂质含量超标，为了提高该药物的质量以及使用的安全性，必须控制好头孢西丁钠中的高分子杂质。本文采用了高效分子排阻色谱法这一高分子杂质测定法对头孢西丁钠中的杂质进行检测，以供参考，希望可以提高头孢西丁钠的生产质量。

一、仪器与试药

1、仪器

Agilent1200DAD液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司，安捷伦1200工作站）、SartoriusCPA225D型十万分之一天平（德国赛多利斯仪器公司）。

2、试药

磷酸二氢钠（广州化学试剂厂，分析纯）；磷酸氢二钠（广州化学试剂厂，分析纯）；头孢西丁对照品（中国药品食品检定研究院，批号：130572-201102，IDKF6T-9VRT，纯度：95.1%）；头孢西丁钠原料药（深圳信立泰药业股份有限公司，批号：11101005）；注射用头孢西丁钠（海口市制药厂有限公司，批号：110917，规格：0.5g/瓶；海口市制药厂有限公司，批号：100630，规格：1.0g/瓶；加拿大Novopharm制药有限公司，批号：568053，规格：1.0g/瓶；广州白云山制药总厂，批号：120201、120202、120203，规格0.5g/瓶；广州白云山制药总厂，批号：120204、120205、120206，规格：1.0g/瓶）；乙腈（美国Merck，色谱纯）；水为超纯水。

二、方法与结果

1、色谱条件

TSK-G2000SWxl（TOSOH，7.8mm×30cm，5μm）色谱柱，以磷酸盐缓冲液[0.005mol・L-1磷酸氢二钠溶液-0.005mol・L-1磷酸二氢钠溶液（61：39）]-乙腈（95：5）为流动相，流速为0.8mL・min-1，检测波长为235nm，进样量20μL，柱温为室温。

2、溶液的配制及测定方法

2.1供试品溶液。在制作供试品溶液时，需要取适量的头孢西丁钠原料，利用精确的仪器对原料进行精密的称取，然后加适量水，将其制成1mL的溶液，还要保证每毫升溶液中含头孢西丁1mg。

2.2对照溶液。在制作对照溶液时，需要称取适量头孢西丁钠，采用精密的仪器进行称定，然后加水进行稀释，将其制作为1mL溶液，还要保证1mL溶液含溶质（头孢西丁钠）10μg。在测定的过程中，实验人员需要分别称取20μL的供试品溶液以及对照品溶液，然后将其注入液相色谱仪，做好记录，制作出色谱图，这样可以为测定头孢西丁钠中高分子杂质的含量提供重要的参考依据。

3、系统适用性

取供试品溶液10mL，加0.1mol・L-1盐酸溶液1mL，室温放置10min，再加0.1mol・L-1氢氧化钠溶液1mL，摇匀。取上述配制溶液20μL注入色谱仪，头孢西丁峰与其前相邻降解杂质峰的分离度应>2.0。

4、专属性

取供试品溶液适量，分别以0.1mol・L-1盐酸、0.1mol・L-1氢氧化钠、5%过氧化氢、强光（5000Lx），70℃水浴加热等条件进行强制破坏，并将供试液于室温避光及不避光条件下放置24h后，同时取空白溶剂进样。结果表明，经强制破坏后产生的杂质均能够与头孢西丁峰分离，方法具有专属性。在不同的破坏条件下，强光及高温破坏条件下产生的杂质数较多，酸、碱、强光破坏产生杂质的量较大。室温放置24h的样品溶液中高分子杂质明显增多。

5、线性关系考察

取头孢西丁对照品11.44mg，加水溶解并稀释至100mL，分别精密量取该溶液稀释，制成6份浓度分别为0.0544、0.0218、0.0109、0.0054、0.0022、0.0011mg・mL-1的标准溶液。以峰面积（y）对浓度（x）进行线性回归，建立标准曲线y=4.792×104x+11.66，r=0.9996。结果表明对照品溶液浓度在0.0544～0.0011mg？mL-1与峰面积呈良好的线性关系。

6、稳定性试验

取供试品溶液于室温放置，分别在0、2、4、6、8h按“1”项下色谱条件测定，随进样时间的延长，高分子杂质的峰面积逐渐变大，说明供试品溶液在水中稳定性较差。

三、结语

1、高效分子排阻色谱法的工作原理

应用高效分子排阻色谱法可以有效的测定头孢西丁钠中的高分子杂质含量，其工作原理主要是将球状蛋白亲水硅作为填充剂，这类蛋白亲水硅胶的分离原理与葡聚糖凝胶柱一致，属于分子排阻原理，由于球状蛋白亲水硅胶表面的孔直径差异很大，所以，在药物分子进入色谱柱后，直径大于孔径的分子则无法进入球状蛋白亲水硅胶中，在测定的过程中，这些大分子的药物在色谱过程中也不会被保留，会洗脱到柱外；直径较小的药物会通过孔径流入填充剂内，在柱子中滞留的时间会比较长，所以，高效分子排阻色谱法可以起到分离药物的作用。在测定的过程中，主要是利用TSK-G2000SWx1柱，这种色谱柱的测定成本比较低，而且装填比较均匀，粒径也比较细，分离的效果较佳。

高分子杂质对头孢西丁钠的药效有着较大影响，有时还会引起患者的过敏反应，所以，在制药的过程中一定要控制好质量。高分子杂质是指分子直径以及质量大于药物分子的杂质，药品的相对分子质量是1000～5000，有的甚至达到了10000。在本次试验中，高分子杂质是指位于头孢西丁钠之前的杂质峰，在头孢西丁钠高效液相色谱图中在10.79min之前。

2、检测波长的选择

曾选择210、231、235、254、262nm的波长同时进行检测并在200～400nm进行DAD扫描。结果可见235nm时高分子杂质及头孢西丁峰的峰高与峰面积最大，故选择235nm作为检测波长。

3、流动相的考察

以不同的流动相分析样品分离的影响，结果随流动相中乙腈比例的增大，主峰的保留时间减小，但主峰与前杂质的分离度增大，理论塔板数增大。单独使用磷酸盐缓冲液，高分子杂质与头孢西丁峰的分离度较差，流动相为0.005mol・L-1的磷酸盐缓冲液-乙腈（95：5）的高杂子杂质和头孢西丁的分离度和塔板数均较高。

参考文献

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