时间：2022-02-17 09:31:38
摘 要：目的：建立青叶胆片中齐墩果酸的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱（HPLC）法，Sapphire C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.2%冰醋酸溶液（85∶15）；检测波长：210 nm；柱温：30℃。结果：齐墩果酸进样量线性范围为46～230 ng，y=5487x+39280，R2=0.9991，平均加样回收率为100.00%，RSD为1.24%（n=6）。结论：HPLC法简单可行、结果可靠，可用于定量控制青叶胆片的质量。
关键词：青叶胆片 齐墩果酸 高效液相色谱法
中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2013）01（c）-0244-01
青叶胆片收载于中国药典2010版一部中，由为青叶胆经加工制成的片，主治清肝利胆，清热利湿。用于黄疸尿赤，热淋涩痛。该标准采用薄层色谱法只对青叶胆片中的齐墩果酸进行了定性鉴别。本文建立了高效液相色谱法的外标法对青叶胆片中齐墩果酸进行含量测定，结果表明本文方法简便、准确、可靠，可作为该制剂的含量测定方法。
1 仪器与试药
日本岛津全自动高效液相色谱仪，型号：LC-20AT，配备LC工作站；UV—2600型紫外分光光度计。齐墩果酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110709-200505，供含量测定用）；青叶胆片（云南白药集团丽江药业有限公司，产品批号为20120901、20120906、20120907）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Sapphire C18柱（200 mm×4.6 mm，5 mm）；流动相：甲醇-0.2%冰醋酸溶液（85∶15）；检测波长：210 nm；柱温：30℃；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL。按外标法以峰面积计算含量。
2.2 溶液制备
对照品溶液的制备：取齐墩果酸对照品约10 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。
供试品溶液的制备：取重量差异项下的样品，研细，细粉末约3.5 g，精密称定，置锥形瓶中，精密量取100 mL甲醇，加入锥形瓶中，称定重量。加热回流30 min，放冷，称定重量，以甲醇补充失去的重量，摇匀，滤过，取滤液作为供试品溶液。
阴性对照溶液的制备：按青叶胆片处方比例制成不含青叶胆的阴性对照品，按供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。
2.3 方法学考察
2.3.1 阴性干扰试验
取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照品溶液，按拟订的色谱条件测定。供试品溶液与对照品溶液色谱图中具有相同保留时间的色谱峰，而阴性无干扰。
2.3.2 线性关系考察
精密称取齐墩果酸对照品11.50 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，精密吸取对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL，分别置25 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系列对照品溶液，分别吸取10 mL，按2.1项下色谱条件测定，以进样量（ng）为横坐标、峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线。（表1）
得回归方程y=5487x+39280，R2=0.9991。结果表明齐墩果酸进样量线性范围是46～230 ng。
2.3.3 精密度试验
取齐墩果酸对照品约10 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。精密吸取对照品溶液10 mL，连续进样6次，依法测定。结果的RSD=0.44%（n=6），表明仪器精密度良好。
2.3.4 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液，在放置0，2，4，6，8 h时分别进样测定。（表2）
结果含量的RSD=1.27%（n=5），表明供试品溶液在8 h内稳定。
2.3.5 重现性试验
分别称取同批号20120901重量差异项下样品6份，研细，细粉末约3.5 g，精密称定，置锥形瓶中，精密量取100 ml甲醇，加入锥形瓶中，称定重量。加热回流30 min，放冷，称定重量，以甲醇补充失去的重量，摇匀，滤过，取滤液作为供试品溶液。按供试品溶液制备方法制备溶液，依法进样测定。结果含量的RSD=1.21%（n=6），表明方法重现性良好。
2.3.6 加样回收试验
在已知含量的样品粉末中，加入一定量的齐墩果酸对照品，按供试品溶液制备方法制备溶液，依法测定并计算回收率。由结果可见，回收率在95%～105%之间，RSD值为1.24%。测定方法回收率良好。
2.4 样品含量测定（表3）
3 讨论
取齐墩果酸对照品适量，用流动相溶液溶解，在200～400 nm波长范围内扫描，结果齐墩果酸在210 nm处有最大吸收，故选210 nm作为检测波长。
在试验过程中，曾采用乙腈-水（20∶80）、甲醇-0.3%磷酸酸溶液（80∶20）等多种流动相，结果色谱峰分离效果均不理想而未被采用。文中选用的流动相甲醇-0.2%冰醋酸溶液（85∶15）分离效果较好，且保留时间较短。实验中还考察了不同柱温（10、25、35、40℃）对色谱分离效果的影响，结果各柱温对分离效果、保留时间的影响有明显区别，柱温为30℃分离效果好。因此确定以柱温为30℃。
HPLC法简单可行、结果可靠，可用于定量控制青叶胆片的质量。
参考文献
[1] 中华人民共和国药典[M].化学工业出版社，2010，一部.