液相色谱—质谱法检测甘蓝中鱼藤酮的残留

摘要：建立了高效液相色谱-质谱法检测甘蓝中鱼藤酮残留量的方法。甘蓝经乙腈提取，过Carbon/NH2柱净化，采用MGШ-C18色谱柱，以乙腈∶0.1%甲酸水溶液（60∶40，V/V）为流动相，运用电喷雾正离子（ESI+）选择离子模式，以m/z 395为定量检测离子，鱼藤酮保留时间在4.8 min。在0.001～1.000 mg/L内呈良好的线性关系，相关系数为0.999 98。在甘蓝样品中添加0.01、0.10、0.50 mg/kg 3个浓度的鱼藤酮，其回收率在70.5%～112.6%，相对标准偏差（n=5）小于20.9%。最低检出量（S/N=10）为2.5×10-11 g。该方法准确度和精密度均能满足检测要求。

关键词：鱼藤酮；残留；液相色谱-质谱

中图分类号：O657.7+2；O657.63 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2012）21-4868-02

Determination of Rotenone Residue in Cabbage by LC-MS

LIU Jun1，LI Xian-bo1，2，SHEN Jing1

（1.Agricultural Quality Standards and Inspection Technology Research Institute， Hubei Academy of Agricultural Science， Wuhan 430064，China； 2.College of Science， Huazhong Agricultural University， Wuhan 430070，China）

Abstract： A method for determination of rotenone residue in cabbage was established by LC-MS. Rotenone residue was extracted from sample with acetonitrile， cleaned up by ProElut Carbon/NH2 SPE to achieve sample preparation， and separated on the MGШ-C18 column using a mixture of acetonitrile and 0.1% formic acid solution （60∶40） as mobile phase. Determination was performed by using ESI+ and under the mode of SIM. Quantitative detection of ions at m/z 395， the retention time of rotenone was about 4.8 min. Linearities were held in the ranges of 0.001～1.000 mg/L with the correlation coefficient for 0.999 98. The average recoveries of rotenone in cabbage at the spiked amounts of 0.01、0.10、0.50 mg/kg were 70.5%～112.6%， and the relative standard deviation was lower than 20.9%（n=5）. The limit of detectable amount （S/N=10） was 2.5×10-11 g. The accuracy and precision of this method could meet the detection requirements.

Key words： rotenone； residue； LC-MS

鱼藤酮是豆科藤本植物鱼藤根部的一种天然杀虫剂，具有高效、低毒、广谱、杀虫快、对农作物不产生药害和不易产生耐药性等优点，对防治果树、蔬菜、茶叶、花卉和粮食作物上的数百种害虫及蚊、蝇等卫生害虫有良好效果。但过量使用会造成环境污染，对人类健康带来危害，特别是其对中枢神经的毒性作用日益引起社会各界的关注[1]。因此，鱼藤酮在得到广泛应用的同时，开展鱼藤酮的残留检测方法研究就显得非常重要。目前，有报道采用液相色谱、液相色谱-质谱、液相色谱-串联质谱以及气相色谱-质谱检测鱼藤酮在蜂蜜[2，3]、鱼肉[4]、河水[5]、果蔬[6]、食品[7]、血浆[8]、鱼藤[9]以及水产品[10]中的残留。但甘蓝中鱼藤酮的残留检测方法未见报道，本研究建立了高效液相色谱-质谱法检测甘蓝中鱼藤酮的残留量，该方法快速、准确，准确度和灵敏度均能满足残留检测要求。

1 材料与方法

1.1 仪器及试剂

LC 210ADvp高效液相色谱仪（日本岛津公司），配有LC-MS 2010 EV质谱检测器和电喷雾离子源，自动进样器，LC-MS工作站。

鱼藤酮标样（99.0%，德国Dr. Ehrenstorfer公司），甲醇和乙腈均为色谱纯（J. T. Baker公司），甲酸（99.0%，Acros Organics公司），氯化钠（分析纯，国药集团化学试剂有限公司），超纯水用 Barnstead超纯水机制备，其他试剂均为分析纯。

1.2 样品前处理

称取经捣碎处理的甘蓝样品10.00 g于100 mL离心管中，加入20 mL乙腈，以21 000 r/min匀质2 min，加入3.0 g氯化钠，再匀质1 min。以3 500 r/min离心5 min，吸取上清液5 mL（相当于2.5 g样品）于100 mL烧杯中，于80 ℃水浴蒸发近干，加入2 mL乙腈∶甲苯（3∶1，V/V）待净化。

1.3 样品净化

用5 mL乙腈∶甲苯（3∶1，V/V）预淋洗Carbon/NH2柱（6 mL，500 mg），待淋洗液接近固体层面时迅速倒入上述待净化液，同时收集淋洗液，再用6 mL乙腈∶甲苯（3∶1，V/V）分两次淋洗，合并上述淋洗液，于45 ℃水浴中旋转蒸发近干，2.5 mL甲醇定容，待质谱检测。

1.4 液相色谱-质谱条件

色谱柱：MGШ-C18（100 mm×2.0 mm，5 μm）；流动相采用乙腈∶0.1%甲酸溶液（60∶40，V/V）；流速：0.2 mL/min；进样体积：5 μL；柱温：35 ℃；离子源 ESI （+），SIM 扫描模式（m/z 395）；CDL温度：250 ℃； 加热模块温度：200 ℃；雾化气流速（N2）：1.5 L/min；干燥气（N2）压力：40 kPa；检测电压：1.65 V。

2 结果与分析

2.1 定量离子的选择

在上述色谱条件下选择SCAN （+）模式，直接进100 mg/L的鱼藤酮标样溶液，扫描范围m/z 50～450得到全扫描质谱图。由图1可见m/z 395 （M+H）的强度最大，所以选择 m/z 395 为定量离子。以m/z 395为定量离子采用SIM（+） 模式，鱼藤酮的添加和标样图谱以及甘蓝空白谱图见图2。

2.2 线性范围和检出限

配制鱼藤酮标准溶液浓度分别为0.001、0.005、0.010、0.050、0.100、1.000 mg/kg进行检测，以m/z 395质量色谱图峰面积为纵坐标，对应的鱼藤酮质量浓度（mg/kg）为横坐标，绘制标准曲线如图3，其线性回归方程为：y =672 954 0x+112 02，相关系数为0.999 98。按S/N=10计算鱼藤酮最低检出量为2.5×10-11 g。

2.3 方法的回收率、精确度和最小检出浓度

在未施用鱼藤酮的菜地采集空白甘蓝样品，分别添加0.01、0.10、0.50 mg/kg 3个水平鱼藤酮标准溶液，每个水平5次重复，检测结果见表1，添加样品中鱼藤酮加标回收率为70.5%～112.6%，相对标准偏差（RSD）在4.1%～20.9%。鱼藤酮在甘蓝中的最小检测浓度为0.01 mg/kg。回收率、相对标准偏差和最小检测浓度能满足农药登记残留试验的要求。

3 小结与讨论

采用乙腈提取，Carbon/NH2柱净化，液相色谱-质谱检测农药鱼藤酮在甘蓝中的残留，该方法操作方便，其添加回收率、精确度和最小检出浓度均能达到农药登记残留试验的要求。

参考文献：

[1] 黄超培，赵 鹏. 鱼藤酮原药的基础毒性研究[J]. 毒理学杂志，2006，20（3）：205-206.

[2] MARTEL A C， ZAGGANE S. Determination of acaricides in honey by high-performance liquid chromatography with photodiode array detection[J]. Journal of Chromatography A， 2002， 954（1-2）：173-180.

[3] JIMENEZ J J， BERNAL J L， DEL NOZAL M J， et al. Determination of rotenone residues in raw honey by solid-phase extraction and high-performance liquid chromatography[J]. Journal of Chromatography A，2000，871（1-2）：67-73.

[4] YANG F， LIU Z C， ZHEN D P，et al. Determination of botanical insecticides residues in fish by liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry[J]. Food Anal Methods，2011，4（4）：601-607.

[5] HOLM A， MOLANDE P， LUNDANES E， et al. Determination of rotenone in river water utilizing packed capillary column switching liquid chromatography with UV and time-of-flight mass spectrometric detection[J]. Journal of Chromatography A，2003，983（1-2）：43-50.

[6] CABONI P， SARAIS G， ANGIONI A， et al. Fast and Versatile Multi-residue method for the analysis of botanical insecticides on fruits and vegetables by HPLC/DAD/MS[J]. J Agric Food Chem，2005，53（22）：8644-8649.

[7] XU D M，ZHOU Y，LIN L Y，et al. Determination of rotenone residues in foodstuffs by solid-phase-extraction（SPE） and liquid chromatography/tandem mass spectrometry （LC-MS/MS）[J]. Agricultural Sciences in China，2010，9（9）：1299-1308.

[8] CABONI P， SARAIS G， VARGIU S， et al. LC-MS-MS Determination of rotenone， deguelin， and rotenolone in human serum[J]. Chromatographia，2008，68（9-10）：739-745.

[9] 韩凤鸣，李晓东，赖仕均，等.气质联用法检测鱼藤中鱼藤酮[J].刑事技术，2011（3）：35-36.

[10] 杨 方，郑丹萍，刘正才，等. 液相色谱-串联质谱法同时检测水产品中苦参碱和鱼藤酮残留[J].分析化学研究报告，2011， 39（4）：556-559.

收稿日期：2012-06-01

基金项目：农业部农药检定所农药登记试验项目（2011P325）

作者简介：刘 军（1979-），男，安徽寿县人，助理研究员，硕士，主要从事食品中农药残留检测工作，（电话）15387038657（电子信箱）

；通讯作者，沈 菁，副研究员，从事农药登记残留试验工作，（电子信箱）。