医学实践论文范文
时间：2023-03-15 02:15:04
医学实践论文范文第1篇
ExpressionandbiologicalactivityofmouseWnt3ageneinNIH3T3cells
【Abstract】AIM:ToexpressrecombinantmouseWnt3asignalproteinwithbiologicalactivity.METHODS:Therecombinanteukaryoticexpressionplasmid,pSecTag2/HygroBWnt3a,wastransfectedintoNIH3T3cellsbyliposome,thentheexpressedproteinwasdetectedbyWesternBlot.ThesaturationdensityandthecapabilityofsuppressingapoptosisinWnt3a/NIH3T3cellswereevaluated.RESULTS:TheWnt3asignalproteinwasstablyexpressedinWnt3a/NIH3T3cells.ThesaturationdensityandthecapabilityofsuppressingapoptosisinWnt3a/NIH3T3cellsweremarkedlyincreased.CONCLOUSION:WesuccessfullyconstructtherecombinantWnt3asignalproteinwithbiologicalactivity.
【Keywords】Wnt3a;eukaryoticexpression;contactinhibition;apoptosis
【摘要】目的：表达具备生物活性的重组小鼠Wnt3a信号蛋白.方法：应用脂质体转染试剂将重组真核表达载体pSecTag2/HygroBWnt3a转染并筛选稳定表达的NIH3T3细胞，WesternBlot鉴定重组Wnt3a蛋白的表达，并对Wnt3a/NIH3T3细胞的融合密度及抗凋亡能力给予检测.结果：Wnt3a信号蛋白在Wnt3a/NIH3T3细胞中获得稳定表达，Wnt3a信号蛋白能够明显提高NIH3T3细胞的融合密度及抗凋亡能力.结论：在NIH3T3细胞中表达的重组Wnt3a信号蛋白具备生物活性.
【关键词】Wnt3a；真核表达；接触抑制；细胞凋亡
0引言
小鼠Wnt3a基因是Wnt基因家族中的重要成员，其编码表达Wnt3a信号蛋白.Wnt3a信号蛋白可以激活经典的Wnt/βcatenin信号通路.Wnt3a信号蛋白对神经干细胞表现出明显的促神经元分化的作用.我们应用基因重组的方法，从小鼠胚脑中克隆Wnt3acDNA，构建真核表达载体，通过阳离子脂质体试剂将目的基因导入NIH3T3细胞中，建立稳定表达Wnt3a信号蛋白的NIH3T3细胞株，并对其生物学活性进行初步分析.
1材料和方法
1.1材料真核表达载体pSecTag2/HygroBWnt3a由本研究室构建.NIH3T3细胞株由安徽医科大学病理教研室吴强教授惠赠.多聚赖氨酸购自博士德公司；胎牛血清及DMEM购自Gibco公司.潮霉素及LipofectamineTM2000转染试剂盒、购自Invitrogen公司.质粒小量提取试剂盒WizardPlusSVMiniprepsDNAPurificationsystem,ReverseTranscriptionSystemRTPCR试剂盒购自Promega公司；鼠抗mycmAb、鼠抗βcateninmAb购自SantaCruz公司，FITC标记的兔抗鼠二抗、TRITC标记的兔抗鼠二抗购自北京中山公司；台盼蓝购自sigma公司.其他试剂均为进口分装或国产分析纯.
1.2方法
1.2.1NIH3T3细胞的培养将冻存的NIH3T3细胞复苏后用含100g/L的胎牛血清的DMEM培养液，在37℃50mL/LCO2培养箱中培养，3d换液1次,传代3至4次使细胞达到良好的生长状态.
1.2.2NIH3T3细胞的转染按LipofectamineTM2000试剂说明书操作进行.转染前24h用胰蛋白酶消化贴壁的NIH3T3细胞，再以无血清及无双抗的DMEM培养基重悬，并按1×105的细胞密度接种于6孔培养板，培养24h后，当细胞生长至85%～90%融合度时，取纯化的重组质粒pSecTag2/HygroBWnt3a2μg，溶于250μL无血清的DMEM培养基中，得到A液.取3μLLipofectamineTM2000加于97μL无血清的DMEM培养基中，得到B液.将A,B液混匀，室温放置30min后加入0.8mL含100g/L胎牛血清的DMEM培养基，轻轻混匀，均匀滴加于经无血清培养基洗涤的贴壁细胞表面，于37℃50mL/LCO2培养箱中培养24h.弃去转染液，加2mL完全培养液继续培养.转染后48h，待细胞生长至接近融合时收集上清，并按1∶3的密度传代.继续培养至细胞密度达50%～70%.弃去培养液，更换浓度为600mg/L的潮霉素培养液进行筛选.转染时，设置转染空载体pSecTag2/HygroB的组和正常细胞阴性对照组.约14d后，可见有阳性克隆形成，继续扩增培养.稳定表达Wnt3a蛋白的细胞株命名为Wnt3a/NIH3T3（W/3T3），转染空载体的细胞株命名为empty/NIH3T3（E/3T3），正常细胞阴性对照组命名为control/NIH3T3（C/3T3）.
1.2.3重组Wnt3a蛋白鉴定转染48h后，分别收集C/3T3,E/3T3和W/3T3细胞各约1×106及其培养上清液.以SDS煮沸法裂解细胞并收集上清，并将其与细胞培养上清液真空冷冻干燥，浓缩至1/2体积，以鼠抗mycmAb为一抗，HRP标记的山羊抗兔IgG为二抗，使用WesternBlot方法行重组Wnt3a蛋白的鉴定.
1.2.4βcatenin的表达鉴定分别在转染后6,12,24h收集W/3T3,E/3T3及C/3T3细胞各约1×106，以SDS煮沸法裂解细胞并收集上清，以鼠抗βcateninmAb为一抗，HRP标记的山羊抗兔IgG为二抗，使用WesternBlot方法进行鉴定.
1.2.5Wnt3a/NIH3T3细胞增殖特性的鉴定以密度约1×105接种W/3T3,E/3T3及C/3T3细胞于24孔培养板，隔日观察，台盼蓝染色并使用血细胞计数板计数活细胞.
1.2.6Wnt3a/NIH3T3细胞抗凋亡实验以密度约1×105接种W/3T3,E/3T3及C/3T3细胞于24孔培养板，24h后台盼蓝染色并使用血细胞计数板计数活细胞数，同时更换含10g/L胎牛血清的DMEM培养液，定时观察并台盼蓝染色并使用血细胞计数板计数活细胞，计算存活细胞与原始细胞数的比值.
统计学处理：用SPSS11.5统计软件进行单因素方差分析.
2结果
2.1重组Wnt3a蛋白在的NIH3T3细胞中获得表达WesternBlot鉴定发现转染Wnt3a基因的NIH3T3细胞裂解液中有一Mr约为45×103的特异性条带，在转染Wnt3a基因的NIH3T3细胞培养上清液、E/3T3及C/3T3细胞裂解液和细胞培养上清液中，均未发现相应条带(图1).
1:W/3T3组细胞裂解液；2：W/3T3组细胞培养上清液；3：E/3T3组细胞裂解液；4：C/3T3组细胞裂解液.
图1WestemBlot鉴定Wnt3a信号蛋白的表达（略）
2.2Wnt3a/NIH3T3细胞中βcatenin的表达上调对Wnt信号通路中的重要信息分子βcatenin的表达情况进行WesternBlot鉴定，在Mr约90×103处出现特异性条带(图2)，但无时间依赖性.
1~3:培养6,12,24h.
图2各实验组βcatenin表达（略）
2.3Wnt3a/NIH3T3细胞融合密度明显增高经台盼蓝染色计数活细胞，以密度约1×105接种的E/3T3及C/3T3细胞3d后生长至融合密度，此时细胞融合密度约4.6×105，但W/3T3细胞继续生长至第6d，细胞融合密度约13×105，与另外两组相比，W/3T3细胞融合密度明显增高（P<0.01）(图3，4).
A：W/3T3；B：E/3T3；C：C/3T3.
图3各实验组细胞融合密度观察(倒置×100)（略）
2.4W/3T3细胞抗凋亡能力明显增高经台盼蓝染色计数活细胞，更换含10g/L胎牛血清的培养液48h后，E/3T3及C/3T3细胞大量凋亡，细胞数明显减少，但W/3T3细胞数无明显减少，抗凋亡能力明显提高（P<0.01）(图5，6).
图4实验组细胞数变化（略）
A：W/3T3；B：E/3T3；C：C/3T3.
图5各实验组细胞抗凋亡能力观察(倒置×100)（略）
图6实验组存活细胞比例（略）
3讨论
Wnt信号蛋白为含有23～24个保守型半胱氨酸残基,在人类的基因组中已经发现Wnt基因19种［1-2］.Wnt3a是Wnt基因家族的重要成员，其基因早在1992年就已经被发现，而且多种的真核细胞被用于它的表达，但由于其低溶解度及疏水性等特点，一直未能纯化出具备生物活性的Wnt3a信号蛋白.1998年，Shibamoto等［3］使用L细胞（鼠胸腺激酶缺陷细胞株；LMTK）作为表达细胞时，在培养上清中发现了大量具备生物活性的Wnt3a蛋白，约400μg/L.Willert等［4］所纯化的Wnt3a信号蛋白通过激活Wnt信号通路促使骨髓中的造血干细胞分裂和自我复制，认为Wnt可能在一系列组织的自我更新中起信号作用.
βcatenin是经典的Wnt/βcatenin信号通路中重要的信息分子［5］，其在Wnt信号通路关闭的情况下，βcatenin被磷酸化而迅速降解.Wnt信号通路被激活后，βcatenin在胞内大量聚集，并进入细胞核，启动下游靶基因的转录，产生生物学效应.βcatenin表达的明显上调代表Wnt信号通路被激活.实验中WesternBlot鉴定发现βcatenin表达明显上调，但没有发现与时间有依赖关系.实验中表达的重组Wnt3a信号蛋白带有myc标签，Burrus等［6］认为如果Wnt3a信号蛋白带有标签将影响其活性，甚至失活.但同样有文献［7,8］中应用的Wnt3a信号蛋白带有myc,HA等标签，而且文献中对其活性同样做了详细的描述.本实验够构建的重组Wnt3a信号蛋白具备生物学活性，但未能与野生型（wildtype）Wnt3a信号蛋白活性做详细的比较，其生物学活性的变化有待进一步分析.
Wnt3a蛋白可以促进神经干细胞向神经元分化.在使用含有Wnt3a信号蛋白的条件培养液培养E11.5d的胎鼠前脑神经干细胞发现，神经干细胞大量分化成为MAP2阳性的神经元.去除Wnt3a信号蛋白后，神经干细胞恢复增殖能力，而且当条件培养液中的FGF2去除后，分化的神经元形态更为成熟［8-9］.来源于小鼠大脑皮质的神经干细胞转基因后超表达Wnt信号蛋白，即使在培养液中加入FGF2，依然大量向神经元分化，但阻断Wnt信号通路后神经元的分化被抑制［10］.
Wnt信号通路的生物学作用十分复杂，不同的Wnt基因，不同的细胞，甚至不同的细胞状态都有可能产生不同的作用［11］.在本实验中我们采用pSecTag2/HygroBWnt3a真核表达载体，NIH3T3细胞作为表达细胞，成功表达重组Wnt3a信号蛋白，初步探讨了Wnt3a信号蛋白的生物学活性，为进一步建立用于以治疗为目的的分子移植的方法奠定基础.
【参考文献】
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医学实践论文范文第2篇
一、医学类大学生社会实践与志愿服务工作的内容和模式分析
（一）医学类大学生社会实践与志愿服务工作的内容
社会实践与志愿服务工作主要是根据学生所学医学专业的特点，为医院患者或者社区群众开展卫生宣传教育和卫生诊疗服务等，从而提高学生将自身的专业知识运用到实践的能力，以便为社会和群众提供更多的服务。社会实践与志愿服务工作的内容主要为围绕医学知识宣讲和医疗服务等方面开展。
（二）医学类大学生社会实践与志愿服务工作的模式
1.参观教育模式。学校组织医学生到一些大型的医院中进行参观，主要包括医生的诊治过程、手术过程等观察，让医学生充分认识到医疗工作的重要性，切实提高广大医学生的敬业精神。
2.服务奉献模式。组织广大医学生深入敬老院、福利院、孤儿院、儿童聋哑学校等社会福利组织中，为这些人群开展各项医疗和卫生服务工作，从而帮助他们切身感受到这些特殊人群生活的疾苦，不断提高医学生的道德素养。
3.专题调研模式。在导师的带领下，将医学生划分成若干专题研究小组，主要进行对医学的研讨和社会调查活动等等，主要是为了培养广大医学生社会认知能力和科学研究能力[1]。4.其他模式。医学类大学生开展社会实践与志愿服务的模式还包括送药、送医以及送卫生知识下乡等。
二、医学类大学生社会实践和志愿服务工作模式存在的问题
（一）社会实践和志愿服务工作模式单一
当前医学类大学生社会实践和志愿服务工作模式相对单一，主要是以下两个原因：一是个别学生参与社会实践和志愿服务的积极性不高；二是个别医学院还不能充分意识到社会实践和志愿服务工作的重要性，并缺乏针对社会实践和志愿服务考核体系，不能在医学生中产生较大的教育意义。
（二）社会实践和志愿服务脱离实际
从当前个别医学院开展的社会实践和志愿服务工作来看，很多都是根据教学课程安排的需要，缺乏将社会实践和志愿服务跟实际有效结合起来。
（三）社会实践和志愿服务专业性不强
个别医学院的组织者在开展社会实践和志愿服务过程中不能有效将活动内容跟学生的专业、社会热点的话题充分结合起来。
三、提高医学类大学生社会实践和志愿服务区的效果的重要途径
（一）加强社会实践和志愿服务的宣传工作
作为医学院，要充分利用社会媒体加强对医学生社会实践和志愿服务的宣传力度，从而帮助社会及时了解医学生参与社会实践和志愿服务的重要性，进一步为学生参与社会实践和志愿服务创造良好的氛围。另外，医学院还应该充分利用自身的校园网、宣传栏、广播等宣传在社会实践和志愿服务表现突出的团体和个人，从而充分调动学生参与社会实践和志愿服务的积极性和热情。
（二）丰富社会实践和志愿服务的模式
由于低年级的医学生自身的专业知识有限，业余时间少，学校在组织这部分学生参与社会实践和志愿服务时应该进一步创新社会实践和志愿服务的模式，在充分整合社会和校园的各方资源的基础上，为其创造一个相对稳定的医学生实践基地，并建立起具有医学生社会实践和志愿服务特色的创新机制，充分培养医学生的组织、协调以及沟通能力[2]。
（三）加强社会实践和志愿服务制度建设
组织广大医学类大学生参与社会实践和志愿服务不但可以帮其深入基层、了解社会，还可以提高他们的专业知识。因此医学院应该进一步加强医学类大学生社会实践和志愿服务工作的制度建设，争取从动员——申报立项——时间团队资料审批——实践团长安全教育整个过程能够得到有效的监督和指导，提高医学生社会实践和志愿服务工作的效果。
总结
综上所述，医学类大学生社会实践与志愿服务工作在促进医学生专业能力和综合素质上面发挥着重要作用，各个医学院应该将这项工作纳入学校的重要议程中，针对当前自身开展社会实践与志愿服务工作存在的问题及时采取有效措施，保证该工作取得实效。
医学实践论文范文第3篇
（一）加强医学生的思想政治教育对提高医学生个人修养具有重要作用。医学生是祖国未来的白衣天使，是“救死扶伤”的实践者，承担着庄重而神圣的职责。新世纪新阶段我国在建设社会主义和谐社会的过程中，在中国特色社会主义市场经济的转型过程中出现了一系列天价医疗费事件、医疗腐败问题。通过对医学生进行思想政治教育可以加强医学生自身的思想修养和政治理论修养，使医学生正确地理解马克思列宁主义、思想、邓小平理论和“三个代表”重要思想及科学发展观的基本理论问题及实质，加深对党和国家大政方针政策的理解，提高个人的思想政治理论素质，增强贯彻和执行党和国家的路线、方针、政策的自觉性和主动性，同时对于其自身辨明是非和分析重大问题具有重要作用。
（二）加强医学生的思想政治教育，培养合格的医学生对实现最广大人民利益的需求具有重要作用。人民群众是历史的创造者，是历史进步的动力，在我国人民群众也是社会主义国家的主人。而医学生则是掌握医学专业技术知识，即将成为祖国医疗卫生事业主力军，其主要的任务就是服务于广大的人民群众，保障人民群众身心健康和为人民群众解除病痛。加强对医学生的思想政治教育不仅可以使医学生们树立为人民服务的思想，而且可以形成良好的思想道德观念以及职业道德观念，使医学生们更好地服务于广大人民群众，服务于社会。
（三）加强医学生的思想政治教育，培养合格的医学生对构建社会主义和谐社会具有重要作用。民主法治、公平正义、诚信友爱、充满活力、安定有序、人与自然和谐相处是社会主义和谐社会的主题。社会主义和谐社会的建立离不开和谐的医患关系，加强对医学生的思想政治教育，可以使其更好地理解构建社会主义和谐社会的基本理念，并将其内化为自身的行动，投身于构建社会主义和谐社会的实践中。这对于切实解决人民群众看病难看病贵问题，提高疾病预防控制和医疗救治服务能力，合理配置医疗卫生资源，整顿药品生产和流通秩序，构建社会主义和谐社会都具有重要意义。
二、医学生社会实践中思想政治教育存在的不足
（一）社会实践活动与思想政治教育结合不够紧密。真正有意义、有效果的社会实践活动有助于培养学生正确的世界观、人生观和价值观，是开展医德医风教育的良好平台，能够有力地推动医学院校思想政治教育工作的发展，促进医学生的全面和谐发展。然而，目前高职高专医学院校的社会实践活动，没有很好地与医学生思想政治教育结合起来，没有将社会实践内容与学校思想政治教育的目标任务相结合，使得社会实践活动与思想政治教育工作脱节，通过社会实践活动对医学生进行思想政治教育的效果并不明显。
（二）社会实践的专业性不强，缺乏专业指导。组织者不能围绕社会最急需、学校最关心、学生最着急的问题和最能发挥学生作用的地方开展活动，这是以往社会实践过程中一个普遍存在的现象。一方面说明了社会实践的内容绝大多数是与专业无关的，另一方面也反映了目前大学生社会实践的开展没有充分利用教师这一大的优势资源。
（三）获得实践机会少，持续时间短。医学生的社会实践时间主要集中在寒暑假，即假期社会实践，这同医学生日常实践有一定的区别。因时间相对集中，学生只可以在相对独立的基础上运用专业知识在校园外进行专项课题的调查和研究工作，在加强思想教育方面更是显得微不足道。有调查显示，参与社会实践的同学中很小部分是自己组团的，而经学校或学院介绍的居多，而自主联系社会实践地点的占21.34%。但因专业限制，学生社会实践的机会提供方主要通过学院和学生家长在地方医院、学校和基层卫生管理部门落实安排，岗位有限，能够参与其中的学生毕竟是少数，实践效果也不理想。
（四）实践模式单一，内容缺乏多样性。当前社会实践主要以调查访问为主，学生参与积极性受限，参与实践活动相对被动；另一方面，由于学校在学生社会实践工作上缺乏必要的引导和足够的重视，导致实践活动的激励考评体系不够健全，不能在广大学生范围内产生较大的教育影响。当前，高校普遍对就业见习行动、挂职锻炼、社会志愿服务、社区服务、社团活动、科技发明、“红色之旅”学习参观等新型实践形式重视不够，实践活动的领域不宽、内容不丰富、品牌效应不明显，不能满足不同层次、不同个性大学生的实践需要。
（五）实践经费匮乏，物质保障不力。调查显示，社会实践活动经费、活动基地、活动设施得不到落实等不利因素严重制约了大学生社会实践活动的开展。
三、医学生社会实践中思想政治教育的创新探索
勇于创新，就是要冲破一切妨碍发展的思想观念，坚决改变一切束缚发展的规定和做法，坚决革除一切影响发展的体制弊端，为发展进步提供强大动力。医学生是祖国未来的白衣天使，是救死扶伤的实践者，承担着庄重而神圣的职责。随着改革开放和社会主义市场经济进一步发展，医疗卫生行业作为社会文明的重要窗口和社会道德建设的主要阵地，倍受社会各界的关注，这对新时期医务工作者也提出了更高的行为规范标准。但是，现代医学在技术上的高度发展与医学人文精神失落造成的职业冷漠形成了巨大反差。面对新形势、新情况，医学生思想政治教育工作还不够适应，存在不少薄弱环节。社会实践作为提高医学生思想政治教育的重要环节之一，将思想政治教育融入医学生社会实践活动，具体可从以下几个方面入手。
（一）创造机会、注重社会实践的时效性及多样性。时效性和多样性对于大学生社会实践具有重要意义，应通过观念创新，主动与社会沟通，努力为学生创造社会实践机会，力求达到预期实践目标。采取走出去、请进来的方式，邀请社会知名人士来校参加创业就业导航、与企业联合举办文化艺术和科技创新创业、走进养老院、残障儿童康复中心、到各地市残疾人协会调研等方式，为学生社会实践创造机会，并努力实现社会实践内容的多样化，在行动中让医学生潜移默化地接受思想政治教育。
（二）在实践中把医学生的思想政治教育与人文教育结合起来。进一步改革更新教育方法、教育思维，以更加生动的形式来进行人文素质教育，将人文教育与当前的社会实际结合起来。现代医学模式要求医学生广泛关注环境、关注社会、关注心理，达到生理、心理和社会的完善与和谐。通过深入社会，特别是贫困地区，了解民众疾苦，了解基层医疗卫生状况，能够唤起医学生的责任意识与人文情怀，思考医疗卫生资源的有效运用、人口增长、生活质量、生态环境等社会问题，端正对社会的看法。
（三）在实践中把医学生的思想政治教育与医德教育结合起来。良好的医德来自完备的医德教育。医学院校应通过合理调整课程设置，积极开展医学社会学、医学心理学、医学伦理学、医学哲学、医学法学、社会医学、医学史、卫生经济学等课程的学习，并在社会实践中把这些知识加以应运。总之，医学教育是高等教育活动中一种特殊的教育形式，其教育成果与大众健康、社会医疗卫生事业发展有着必然的、直接的联系，是关系到社会大众生存的质量、劳动力再生产的质量和保障社会经济发展、社会发展、生态文明发展的重大问题。然而加强医学大学生的思想道德教育，提高他们的思想道德修养，形成良好的医德品质，更是关系医疗卫生事业的发展和国家命运的大事。
医学实践论文范文第4篇
ExpressionofMMP9inskinsquamouscellcarcinomaanditssignificanceinmicroangiogenesis
【Abstract】AIM:TodetecttheroleandthesignificanceofMMP9inmicroangiogenesisinskinsquamouscellcarcinoma(SCC)andtoobservetherelationbetweentheexpressionofMMP9andmicrovesseldensity(MVD)inSCC.METHODS：ImmunohistochemicalSPstainingwasusedtoexamineMMP9expressionandthechangeofMVDunderlightmicroscopein45casesofSCC,19casesofBowendisease,and10casesofnormalskin.RESULTS：TheexpressionofMMP9inSCCgroupwassignificantlyhigherthanthatinBowendiseasegroup（P<0.05）,whilethelatterwasalsosignificantlyhigherthanthatinnormalskingroup（P=0.028，P<0.05）.ThelevelofMVDinSCCgroupwassignificantlyhigherthanthatinBowendiseasegroup（P<0.05）,andthelatterwassignificantlyhigherthanthatinnormalskingroup（P<0.05）.CONCLUSION：MMP9ishighlyexpressedinSCC,andmaybeoneofimportantfactorsinangiogenesisofSCC.
【Keywords】skinneoplasms;carcinoma,squamouscellimmunohistochemistry;gelatinaseB;antigens,CD34;microvesseldensity
【摘要】目的：探讨皮肤鳞状细胞癌（SCC）发生发展过程中基质金属蛋白酶9（MMP9）对微血管生成的意义.方法：SCC45例,Bowen病19例、正常皮肤10例进行CD34,MMP9免疫组化染色.检测MMP9的表达和微血管密度（MVD）的变化，分析MMP9的表达与MVD之间，及它们与SCC临床病理特征之间的关系.结果：在SCC组中MMP9表达高于Bowen病组（P<0.05）,Bowen病组中MMP9表达高于正常皮肤组（P=0.028,P<0.05）.在SCC组中MVD值高于Bowen病组(P<0.05)，Bowen病组中MVD值高于正常皮肤组（P<0.05）.结论：MMP9可能是SCC促进微血管生成因子之一，与SCC的侵袭性相关.
【关键词】皮肤肿瘤；免疫组织化学；明胶酶B；抗原CD34；微血管密度
0引言
癌细胞侵袭和转移能力与其诱导产生蛋白酶降解细胞外基质（ECM），基底膜（BM）的能力密切相关.基质金属蛋白酶（MMP）是其中最为重要的一组蛋白酶，研究表明［1-2］，MMP对肿瘤的侵袭和转移起重要的作用.Guttman等［1］研究表明MMPs在肿瘤血管生成中也有重要作用.明胶酶是MMPs的一个亚类，包括基质金属蛋白酶2（MMP2）和基质金属蛋白酶9（MMP9），近年MMP9与肿瘤血管生成的关系逐渐被重视.MMP9不仅是降解基底膜和ECM的关键酶，而且在肿瘤间质血管生成中起重要作用.在皮肤鳞癌中，有关MMP9的研究报道很少，其结果也不完全一致.我们通过免疫组织化学技术检测Bowen病(BD)，鳞状细胞癌（squamouscellcarcinoma,SCC）组织中MMP9和CD34的表达，并对MMP9的表达与微血管密度（MVD）做定量分析，探讨皮肤鳞状细胞癌、Bowen病、基底细胞癌组织中MMP9对血管生成的作用及其临床意义.
1材料和方法
1.1材料石蜡包埋组织标本选自西安交通大学第二附属医院199901/200605病理确诊手术患者.SCC45例，年龄45～95(平均68.8)岁，男27例，女18例.Bowen病19例，年龄45～87(平均65.2)岁，男12例，女7例.正常人皮肤10例对照，年龄46～78（平均62.5）岁，男5例，女5例作鼠抗人MMP9mAb（MAB0245）和CD34mAb（(MAB0034)，免疫组化SP试剂盒(KIT9710)及DAB试剂盒均购自福州迈新生物技术有限公司.
1.2方法所有组织均经40g/L甲醛液固定，常规石蜡包埋切片，连续切片5张，厚约4μm.采用SP法，免疫组化染色程序按试剂盒说明书进行.阳性对照采用自身对照,用PBS代替一抗和二抗进行阴性对照.MMP9和CD34均采用高温高压抗原修复.MMP9结果判定：在不知任何背景资料的情形下,采用双盲法进行判定,以肿瘤细胞膜和/或细胞质出现淡棕黄色颗粒为阳性，并按着色强弱分级：无色为0，浅黄色为1，深黄色为2，棕黄色为3；着色范围以在10×40高倍镜下随机选区5个视野（每个视野记数100个细胞）计数阳性细胞所占的百分数均值：＜25%为1,25%~49%为2，50%为3.上述两项相加为MMP9的表达强度积分：＜2为阴性，＜3为弱阳性（+），3~4为阳性（），＞4为强阳性（）.MVD计数参照文献［3-4］方法进行微血管计数，先在低倍镜（×100）下观察确定血管密度最高处，在（×200）视野下选择3个高血管密度区，计算单位视野（×200）平均血管数.单个内皮细胞或内皮细胞簇，均作为一个血管计数，而直径大于约8个红细胞的血管，有较厚肌层的血管以及硬化区的血管不在计数范围内.
统计学处理:采用SPSS10.0统计软件包进行处理,根据资料类型组间比较分别采用方差分析和χ2检验，P<0.05为有统计学意义.
2结果
2.1MMP9MMP9阳性改变为细胞质或细胞膜呈棕黄色，偶尔可见细胞核着色，阳性颗粒多呈团块状.正常人皮肤组织中MMP9呈弱阳性表达，主要表达于颗粒层和棘细胞层，真皮层中纤维样细胞、单一核细胞等见阳性染色.BD组织中表皮全层均有MMP9均匀弥漫表达.SCC中MMP9在癌巢组织弥漫分布，以肿瘤周边表达强烈（图1）MMP9表达在正常皮肤组、Bowen病组、SCC组依次增高（表1）.MMP9在SCC组中高于Bowen病组织（χ2=6.667,P<0.05），Bowen病组中MMP9高于正常皮肤组（P=0.028，P<0.05）.在SCC组中MMP9的表达与患者的年龄、性别、肿瘤组织的病理分级均无关（P＞0.05）.
表1MMP9在正常皮肤组、Bowen病组和SCC表达(略)
2.2MVD计数CD34标记的微血管呈点状分布，血管内皮细胞膜被染成褐色.在SCC组织中微血管形态不规则，部分血管呈现发芽状，血管分布不均匀，在SCC的边缘区域最为密集，呈簇状(图2).Bowen病组织中微血管形态较规则，但分布不均，血管簇偶见.正常皮肤组织内的微血管形态规则，分布均匀.Bowen病组中和SCC组中MVD明显升高（表3）.
图1SCC组织MMP9表达SP×400(略)
表2SCC组织MMP9表达与患者年龄、性别及鳞癌分期的关系(略)
图2SCC组织MVD计数SP×100(略)
表3CD34和MVD在Bowen病和SCC中表达(略)
aP<0.05vs正常皮肤.
3讨论
本研究结果显示,MMP9在SCC组中高于Bowen病组织（P<0.05），Bowen病组中MMP9高于正常皮肤组（P<0.05）.Bowen病MMP9在增生表皮细胞质或细胞核表达；在SCC组织中MMP9在肿瘤细胞，增生上皮细胞和间质细胞均有阳性表达，在表达的强度、阳性细胞的种类、数量上均高于Bowen病组，提示MMP9高表达可能是SCC转移、侵袭能力的分子基础.同时观察到仅有部分有肿瘤细胞能表达MMP9，且表达MMP9的肿瘤细胞多位于癌巢的外周部分和毛细血管、淋巴管管腔周围，提示MMP9表达的肿瘤细胞可能具有更强的侵袭能力.实体肿瘤的新生血管提供了更多与体循环连接的通路，这使肿瘤细胞更容易从原发灶向远隔部位转移.肿瘤组织中微血管密度越大，肿瘤细胞进入血循环及淋巴循环的机会越多，淋巴结及邻近脏器转移的机会也增大.在许多肿瘤中都发现：微血管密度与肿瘤侵袭性与肿瘤转移的发生率相关［1,5-6］.近来研究表明，MMP9不仅是降解基底膜和ECM的关键酶，而且在肿瘤间质血管生成中起重要作用［1，5］.Wang等［7］人的研究表明,存在于细胞外基质的VEGF能够通过存在于血管平滑肌细胞上的VEGFR1受体调节MMPs的表达.而MMPs又能降解细胞外基质释放更多的VEGF,这便建立了一个正反馈调节环路来促进新生血管的形成.Naglich等［8］研究发现MMP1,MMP2,MMP9诱发和促进血管生成，TIMP1,TIMP2,TIMP3,TIMP4抑制新血管生成.
本实验显示，在SCC组织中微血管形态不规则，血管分布不均匀，在SCC的边缘区域最为密集，呈簇状.Bowen病组织中微血管形态较规则，但分布不均.正常皮肤组织内的微血管形态规则，分布均匀.SCC组中MVD高于Bowen病组织（P<0.05），Bowen病组中MVD高于正常皮肤组（P<0.05），提示细胞在发生恶性转化之前已有血管生成增多，这很可能是SCC血管生成的启动阶段.我们发现在SCC组、Bowen病和正常皮肤组中MMP9表达高者MVD表达亦高，且MMP9的高表达的部位与MVD高密度区具有一致性，均位于癌巢边缘地区，提示：肿瘤的浸润生长与新生血管生成是同步进行的，MMP9的表达与肿瘤血管形成有关.本研究结果表明，SCC的发生和侵袭转移与肿瘤细胞的分化程度及新生血管的密度密切相关，MMP9可能是SCC的重要促血管生成因子之一.阻断MMP9的表达，抑制MMP9的活化可能对抑制SCC转移具有重要意义.
【参考文献】
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医学实践论文范文第5篇
EffectofVHLmRNAandFIH1mRNAexpressionsincolorectalcarcinomaonHIF1αproteinlevel
【Abstract】AIM:TodetectmRNAexpressionsofVHLandFIH1incolorectalcancer,andexploretheireffectonHIF1αproteinlevel.METHODS:SemiquantitativeRTPCRassaywasusedtodetecttheexpressionsofVHLmRNA,FIH1mRNAin42patientswithcolorectalcancer;ExpressionofHIF1αproteinwasmeasuredbySPimmunohistochemistry;Spearmanrankcorrelationwasusedtoanalyzethecorrelationbetweenthem.RESULTS:mRNAlevelsofVHLandFIH1incolorectalcancerweresignificantlylowerthanthoseinadjacenttissue（t=-10.14,P=0.00；t=-15.26,P=0.00）；BothexpressionsdecreasedasDukesstageincreased,andtheexpressionsinDukesA+BstageweresignificantlyhigherthanthoseinDukesC+Dstage（t=2.84,P=0.01；t=-5.13,P=0.00）；Theirexpressionshadnorelationshipwithtumorlocationandgender.In42casesofcolorectalcancer,positiverateofHIF1αproteinwas69.1%(29/42),theexpressioninDukesC+Dstage(80.0%,24/30)wassignificantlyhigherthanthatinDukesA+Bstage(41.7%,5/12),(t=5.89,P=0.02);itwasnegativeinadjacenttissue;SpearmanrankcorrelationdisplayedthattheexpressionsofVHLmRNAandFIH1mRNAwerenegativelycorrelatedwiththeHIF1αproteinlevel(rs=-0.97,P=0.01;rs=-0.66,P=0.01).CONCLUSION:TheoverexpressionofHIF1αmayplayanimportantroleinthedevelopmentandmatastasisofcolorectalcancer；ThedecreaseofVHLmRNAandFIH1mRNAexpressionsiscloselycorrelatedwiththeincreaseofHIF1αproteinlevelincolorectalcancer.
【Keywords】colorectalneoplasms;HIF1α;VHL;FIH1
【摘要】目的：检测大肠癌中VHLmRNA，FIH1mRNA以及HIF1α蛋白的表达,探讨VHL，FIH1对HIF1α蛋白水平的影响.方法：采用RTPCR技术检测42例大肠癌组织和相应的癌旁正常粘膜组织中VHLmRNA，FIH1mRNA的表达，采用免疫组化SP法检测HIF1α蛋白在大肠癌和癌旁正常组织中的表达，Spearman相关关系检验分析其之间的相关性.结果：大肠癌组织VHLmRNA和FIH1mRNA的表达水平显著低于癌旁正常组织（t=-10.14,P=0.00；t=-15.26,P=0.00）；二者的表达水平随Dukes分期而降低，DukesA+B期显著高于DukesC+D期（t=2.84,P=0.01；t=-5.13,P=0.00）；它们的表达水平与与肿瘤部位、性别无关.大肠癌组织HIF1α蛋白表达阳性率为69.1%(29/42),在癌旁正常组织中均为阴性；DukesC+D期(80.0%,24/30)显著高于DukesA+B期(41.7%,5/12),(t=5.89,P=0.02)；Spearman相关分析显示，HIF1α表达水平与VHLmRNA，FIH1mRNA的表达水平显著负相关（rs=-0.97,P=0.01，rs=-0.66,P=0.01）.结论：HIF1α的过表达在大肠癌的发生发展、浸润转移过程中起着重要作用，大肠癌组织中VHL以及FIH1的水平下降与HIF1α蛋白水平的升高之间存在密切相关.
【关键词】结直肠肿瘤；低氧诱导因子1α；VHL基因；缺氧诱导因子抑制因子1
低氧诱导因子1（hypoxiainduciblefactor1，HIF1）在低氧状态下通过对靶基因的转录激活，调控着血管发生、红细胞生成以及糖酵解等过程［1］.希佩尔林道病(vonHippelLindau,VHL)希佩尔林道病肿瘤抑制蛋白(proteinvonHippelLindau,pVHL)在依赖于氧的条件下作用于HIF1的α亚单位，促使其发生泛素化和蛋白酶体的降解［2］.低氧诱导因子1抑制因子(factorinhibitingHIF1,FIH1)能结合HIF1α并抑制其转录激活功能［3］.我们采用RTPCR法检测了大肠癌组织和相应癌旁正常组织中VHLmRNA,FIH1mRNA的表达水平，同时采用免疫组化方法检测HIF1α蛋白的表达，并进一步分析探讨它们之间的相关性.
1材料和方法
1．1材料甘肃省人民医院肛肠科200410/200504手术切除并经病理证实的新鲜大肠腺癌标本42(男27，女15)例，年龄31～76（中位56)岁.其中结肠癌7例，直肠癌35例.DukesA期5例，B期7例，C期18例，D期12例(有7例发生转移),术前未做化放疗.同时距肿瘤边缘5～10cm以上切取正常组织作为自身对照.标本离体后5min内即投入液氮罐并转至-80℃冰箱冻存.RNA提取试剂,饱和酚,100bpDNAladder购自上海生工;逆转录酶MMLV(RNaseH)，Taq酶，AgaroseGel，MMLVRtasecDNAsynthesisKit(codeD6130)，RNA酶抑制剂，琼脂糖（Agarose）均购自大连宝生物公司;兔抗人HIF1α多克隆抗体购自武汉博士德公司;生物素链霉素抗生物素蛋白检测系统(SP)试剂盒均购自福州迈新公司;根据从NCBI的Nucleotide数据库中所查到VHL和FIH1mRNA序列，经计算机辅助设计引物，内参对照选用磷酸甘油醛脱氢酶(Gapdh).引物均由上海生工合成，使用浓度均50μmol/L(表1).
1．2方法
1．2.1VHL及FIH1的RTPCR检测从-80℃冰箱中取出冻存的新鲜组织(癌及癌旁正常组织)200mg，采用Trizol法提取组织总RNA，测定总RNA浓度及纯度.使用Takara的MMLVRtasecDNAsynthesisKit(codeD6130)反转录合成cDNA的第1链，接着合成第2链（均照说明书操作）.将所得30μL产物冻存于-20℃以备进行PCR.PCR反应体系50μL，包括10×Buffer5μL,25mmoldNTPmixture0.5μL,TaqDNA酶1μL，目的引物（VHL或FIH1）上下游各1μL，Gapdh引物上下游各1μL，cDNA模板1μL，无菌水38.5μL.反应条件：94℃预变性5min；94℃变性30s,退火30s(退火温度VHL55℃,FIH158℃)，72℃延伸45s，30个循环；72℃10min后终止反应.PCR产物于20g/L的琼脂糖凝胶做电泳,以无菌水代替cDNA模板的PCR管为阴性对照，天能凝胶成像系统对电泳条带拍照并进行半定量分析.VHLmRNA,FIHmRNA相对表达量以同一反应体系中目的产物电泳条带密度指数与内参对照Gapdh电泳条带密度指数的比值来表示.
1.2.2HIF1α免疫组化染色取出冻存的新鲜标本迅速置于40g/L甲醛中固定，制成石蜡块.先行HE染色确定,取标本无出血、坏死区域,组织厚度5μm连续切片,HIF1α稀释度1∶50,SP法染色，用PBS液代替一抗作阴性对照.DAB作底物显色,苏木素复染核,梯度酒精脱水,二甲苯透明,树脂胶封片,显微镜下观察.HIF1α判断标准按文献［4］:阳性细胞胞核呈棕黄色颗粒着色,阴性(-)为肿瘤组织完全不着色或阳性细胞数<5%；阳性(+)为肿瘤组织阳性细胞数的范围为5%～25%；阳性()为肿瘤组织阳性细胞数的范围为>25%～50%；阳性()为肿瘤组织阳性细胞数>50%.
统计学处理:数据采用SPSS13.0软件进行统计学分析，计量资料以x±s表示，组间比较采用t检验.计数资料两组率的比较采用四格表的校正卡方检验，RTPCR结果和免疫组化结果的相关性采用Spearman等级相关分析，按α=0.05的水准判断是否具有统计学意义.
2结果
2．1RTPCRVHLmRNA在大肠癌组织中的表达水平为0.51±0.08，癌旁正常组织中的表达水平为0.63±0.11，配对t检验结果显示差异有显著性（t=-10.14,P=0.00）；FIH1mRNA在大肠癌组织中的表达水平为0.52±0.05，癌旁正常组织中的表达水平为0.60±0.14，配对t检验结果显示差异有显著性（t=-15.26,P=0.00）.VHLmRNA，FIH1mRNA表达水平与发病部位，性别，Dukes分期以及有无转移等临床病理资料之间有关(图1,2,表2).表2大肠癌组织VHLmRNA与FIH1mRNA的表达与临床病理的关系
2．2免疫组化染色癌旁正常组织HIF1α免疫组化染色均为阴性（图3）；癌组织中29例（69.1%）HIF1α阳性(图4)，其中(+)16例，()10例，()3例.HIF1α表达与Dukes分期明显相关，DukesA+B期和DukesC+D期的阳性率分别为41.7%(5/12),80.0%(24/30),两者差异具有显著性(P<0.05).无转移者HIF1α阳性率为65.7%(23/35),有转移者阳性率为85.7%(6/7),两者差异无统计学意义.
2．3VHLmRNA，FIH1mRNA表达与HIF1α蛋白水平的关系我们采用非参数检验的Spearman等级相关分析，结果显示，大肠癌组织中HIF1α表达水平与VHLmRNA和FIH1mRNA的表达水平呈显著负相关(rs=-0.97,P<0.01；rs=-0.66,P<0.01).图3癌旁正常组织HIF1α的表达SP×400
3讨论
HIF1是一个异二聚体，由对氧敏感的α亚单位(HIF1α或HIF2α)和组成性表达的β亚单位(HIF1β,也称之为芳香烃受体核转位分子，ARNT)构成［5］.HIF1调节通路的失调对于癌症以及缺血性疾病的发生发展有着重要的影响作用［6］.VHL基因定位于染色体3p2526区域,包含3个外显子，编码由284个氨基酸残基组成的pVHL［7］.FHI1基因定位于染色体10q24，它在生物工程信息数据库国家中心的基因座ID为55662.此基因有8个外显子，全长14kb，可以编码一种特异性的天冬酰胺羟化酶，属于2酮戊二酸依赖性双加氧酶家族［8］.我们用RTPCR法检测了大肠癌和癌旁正常组织中VHLmRNA和FIH1mRNA的水平，同时用免疫组化法检测了HIF1α蛋白在癌组织和癌旁正常组织中的表达.结果表明，VHLmRNA和FIH1mRNA在癌组织中的表达水平显著低于癌旁正常组织；二者的表达水平随Dukes分期而降低，DukesA+B期显著高于DukesC+D期；FIH1mRNA在有转移的病例中显著低于无转移的病例；它们的表达水平与与肿瘤部位、性别无关.而HIF1α蛋白表达在癌组织中总阳性率为69.1%(29/42),在癌旁正常组织中均为阴性；在DukesC+D期显著高于DukesA+B期；HIF1α蛋白的表达在转移的病例中高达85.7%(6/7)，而未转移者为68.6%(23/35)，但却无统计学意义，可能是样本量过少的缘故.
Spearman等级相关分析显示，HIF1α表达水平与VHLmRNA，FIH1mRNA的表达水平显著负相关，这表明大肠癌组织中抑癌基因VHL以及FIH1的水平下降与HIF1α蛋白水平的升高之间存在密切相关.HIF1α的过表达在大肠癌的发生发展，浸润转移过程中起着重要作用，HIF1α高表达的癌组织具有较强的浸润和转移能力.提示HIF1α的表达可反映结直肠癌的生物学行为，可以作为判断结直肠癌浸润、转移和预后的有价值指标.此外，低氧适应性反应在肿瘤发生发展中起着重要作用，而HIF1α是此过程中的枢纽环节，利用反义核酸抑制HIF1α的转录活性已经成为治疗肿瘤的一个重要切入点［9-11］，随着对VHL和FIH1作为HIF1α负性调节子功能的逐步阐明［12］，进一步探讨联合应用VHL基因治疗和FIH1的拟似物，以降低HIF1α的表达和转录活性，抑制癌细胞的低氧适应反应，在防治大肠癌的发生发展，浸润转移方面将会有更广阔的前景.
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医学实践论文范文第6篇
EffectsofoctylphenoloncellcycleandcyclinexpressionofMDAMB231breastcancercells
【Abstract】AIM:Toobservetheeffectsofoctylphenol(OP)oncellcycleandcyclinexpressionofMDAMB231breastcancercellsandtoprobethemolecularmechanismsofOPinhibitingMDAMB231breastcancercellproliferation.METHODS:Thechangesofcellproliferation,cellcycle,cyclinD1mRNA,cyclinD3mRNA,CDK2mRNA,CDK4mRNAandcyclinD1proteinexpressionsofMDAMB231cellstreatedwithOPwereobservedbyusingMTTtest,flowcytometry,immunocytochemistryandRTPCR.RESULTS:WhenMDAMB231breastcancercellsweretreatedwith4or8μmol/LOPfor48h,thecellinhibitionrateswere(17.13±4.1)%,(40.25±8.7)%,andthefluorescencevaluesofcyclinD1were55.1±10.2,41.4±11.2,significantlydecreasedascomparedwithcontrolgroup(89.9±11.2,P<0.05).WhenMDAMB231breastcancercellsweretreatedwith8μmol/LOPfor24and72h,thecellratiosintheG0/G1phasewere(67.0±17.6)%and(44.4±11.9)%，significantlyincreasedascomparedwithcontrolgroup［(46.6±12.8)%at24h,(15.3±3.1)%at72h,P<0.05］.OPinhibitedthemRNAexpressionsofcyclinD1,cyclinD3,CDK2andCDK4andtheproteinexpressionofcyclinD1.CONCLUSION：OPcaninhibittheproliferationofMDAMB231breastcancercells,whichmayberelatedtodownregulatingtheexpressionsofcyclinD1,cyclinD3,CDK2andCDK4mRNAandcyclinD1protein.
【Keywords】cellproliferation;breastneoplasms;octylphenol;cyclinD1；cylindependentkinases
【摘要】目的:观察辛基酚(OP)对细胞周期及周期蛋白表达的影响，探讨OP抑制MDAMB231乳腺癌细胞增殖的可能分子机制.方法：以MTT试验、流式细胞分析、免疫细胞化学和RTPCR等方法观察OP对MDAMB231乳腺癌细胞增殖、细胞周期、CDK2，CDK4，cyclinD1和cyclinD3表达的影响.结果：4,8μmol/LOP作用MDAMB231乳腺癌细胞48h时，其抑制率为(17.1±4.1)%,(40.3±8.7)%，cyclinD1表达量荧光值为55.1±10.2，41.4±11.2，比对照组(89.9±11.2)明显降低(P<0.05).8μmol/LOP作用MDAMB231乳腺癌细胞24h和72h，G0/G1期细胞为(67.0±17.6)%和(44.4±11.9)%，G0/G1期细胞比对照组［24h，(46.6±12.8)%；72h，(15.3±3.1)%］明显增高(P<0.05).OP导致MDAMB231乳腺癌细胞中CDK2，CDK4，cyclinD1和cyclinD3mRNA的表达降低，且cyclinD1蛋白的表达也降低.结论：OP能抑制MDAMB231乳腺癌细胞增殖，其机制可能与OP能降低乳腺癌细胞中CDK2，CDK4，cyclinD1和cyclinD3mRNA及其蛋白的表达有关.
【关键词】细胞增殖;乳腺癌;辛基酚；细胞周期蛋白D1;细胞周期蛋白质依赖激酶类
0引言
辛基酚（octylphenols,OP）是一种环境雌激素，近年来对它的雌激素活性检测及其生殖毒性效应研究较多［1］.OP能促进ERα+MCF7乳腺癌细胞的增殖，表现雌激素活性，却抑制ERα-MDAMB231乳腺癌细胞的增殖［2］.细胞增殖与细胞周期密切相关，本研究将OP作用于MDAMB231乳腺癌细胞，观察细胞的增殖和CDK2,CDK4,cyclinD1，cyclinD3表达的改变，探讨OP影响MDAMB231乳腺癌细胞增殖的作用机制.
1材料和方法
1.1材料试剂中，OP纯度>98%，sigma产品.cyclinD1抗体为兔抗人抗体，使用浓度为1∶75倍稀释，FITC标记羊抗兔抗体，北京中杉产品.RTPCR试剂盒，上海sangon产品.二甲亚砜(DMSO)，纯度>98%，进口分装试剂，用于配制OP.MDAMB231乳腺癌细胞由中科院上海细胞所提供.实验前将MDAMB231乳腺癌细胞在无酚红的DMEM/F12中培养24h以耗尽细胞的内源性雌激素，然后以该培养基进行实验.实验分为3组：对照组，给予DMSO；4μmol/LOP组；8μmol/LOP组.
1.2方法
1.2.1MTT试验以492nm波长测定活细胞的吸光度（A），抑制率（PR）=(对照组A值-实验组A值)/对照组A值×100%，每次试验设2个平行孔，试验重复3次［3］.
1.2.2细胞周期相及凋亡检测实验各组细胞处理24,48和72h，收获细胞，700mL/L冷乙醇固定，RNase消化，碘化丙啶(PI)染色，流式细胞仪检测，每次试验设2个平行孔，试验重复3次.
1.2.3cyclinD1表达分析细胞生长于小盖玻片上，多聚甲醛固定，血清封闭，加一抗于37℃孵育50min，加荧光素标记二抗孵育20min，甘油封片，LeicaNT激光共聚焦显微镜观察、照相及数据分析，实验重复2次.计算荧光强度时每组实验取3张片子，每张片子取36个视野，每个视野取5个细胞，计算其平均荧光强度.
1.2.4RTPCR检测CDK2,CDK4,cyclinD1,cyclinD3的mRNA表达实验各组细胞处理24h，收获细胞，用Trizol试剂一步法提取各组细胞总RNA，逆转录为cDNA，置-80℃备用.引物由上海sangon合成，CDK2：F5′GCTCTCACTGGCATTCCTCCT3′，R5′5′CGAAATGAAGGCACTAGAGC3′，产物546bp；CDK4：F5′CTACCTCTCGATATGAGCCAGT3′，R5′CATCTGGTAGCTGTAGATTCTG3′，产物563bp；cyclinD1：F5′GAGGAACAGAAGTGCGAGGA3′，R5′TCTGGAGAGGAAGCGTGTGA3′，产物501bp；cyclinD3：F5′TGTCAGGAGCAGATCGAAGC3′，R5′CCTTTAGAAGGCACTAGAGC3′，产物453bp；βactin：F5′AGGGGCCGGACTCGTCATACT3′，R5′GGCGGCACCACCATGTACCCT3′，产物202bp.25μL体系加样本总cDNA，上游和下游引物各1.5μL，依次加入试剂盒其他成分.反应条件为94℃灭活40s，60℃或61℃退火40s，72℃延伸40s，22个循环，20g/L琼脂糖电泳，照相，半定量分析以凝胶成像系统的分析软件Q1来分析其灰度值，每实验重复3次，以目的条带/βactin之比值为结果，各组间进行单因素方差分析.
统计学处理：数据用x±s表示，组间比较用SPSS10.0软件进行单因素方差分析.
2结果
2.1MDAMB231乳腺癌细胞增殖以4,8μmol/LOP作用MDAMB231乳腺癌细胞48h，细胞抑制率为(17.1±4.1)%，(40.3±8.7)%.
2.2MDAMB231乳腺癌细胞周期相分布8μmol/LOP作用MDAMB231乳腺癌细胞24h和72h，G0/G1期细胞分别为(67.0±17.6)%和(44.4±11.9)%，G0/G1期细胞比对照组［24h，(46.6±12.8)%；72h，(15.3±3.1)%］明显增高(P<0.05).
2.3MDAMB231乳腺癌细胞中cyclinD1蛋白表达cyclinD1蛋白主要表达于细胞的胞浆中(图1)，4,8μmol/LOP组cyclinD1表达量荧光值分别为55.1±10.2，41.4±11.2，比对照组(89.9±11.2)明显降低(P<0.05).
A：对照组；B：4μmol/LOP组；C：μmol/LOP.
图1OP对MDAMB231乳腺癌细胞中cyclinD1表达的影响SPFITC×400（略）
2.4MDAMB231乳腺癌细胞中CDK2,CDK4,cyclinD1,cyclinD3mRNA表达mRNA的表达以电泳条带的亮度来判断，亮度值越强，mRNA量越高，经凝胶成像系统软件处理，与对照组比较，OP组CDK2,CDK4,cyclinD1及cyclinD3mRNA表达均降低(图2).
M:marker;1:8μmol/LOP;2:4μmol/LOP;3:对照.aP<0.05vs对照.
图2OP对MDAMB231乳腺癌细胞中cyclinD3,cyclinD1,CDK2,CDK4mRNA表达的影响（略）
3讨论
雌激素是哺乳动物体内分泌的一种性激素，起着调节动物生长、分化和生殖的作用.OP是一种苯环类化合物，能与ERα结合，显示出雌激素活性.OP主要用于生产非离子表面活性剂、增塑剂、热稳定剂、光稳定剂等，广泛存在于生活、工作环境的水体、淤泥、土壤和食物如鱼类、贝类及饮用水中［4］.MDAMB231乳腺癌细胞是一株ERα-的细胞，>15μmol/LOP对MCF7乳腺癌细胞会产生毒性作用，1~10μmol/LOP会对MDAMB231乳腺癌细胞产生毒性效应，抑制MDAMB231乳腺癌细胞的增殖［1］.以植物雌激素三羟异黄酮作用184B5/HER细胞，结果发现活细胞数量减少，呈剂量效应关系，同时G0/G1期细胞增高，细胞凋亡也增多.本研究结果显示4，8μmol/LOP均能抑制MDAMB231乳腺癌细胞增殖，并呈时间效应和剂量效应.
细胞增殖依赖于细胞周期的顺利进行，该过程受G1/S，G2/M两个关健点调控.植物雌激素三羟异黄酮能将MDAMB231乳腺癌细胞阻滞于G2/M期，细胞凋亡增加［5］，超二倍体增加.本研究结果显示OP作用MDAMB231乳腺癌细胞24h，G0/G1期细胞(凋亡峰)明显增加(P<0.05)，表明OP具有急性毒性作用，细胞迅速凋亡.OP引起MDAMB231乳腺癌细胞周期阻滞与三羟异黄酮不同，这可能与三羟异黄酮具有多种生物活性有关.
细胞增殖依赖于细胞周期的顺利进行，细胞周期的正常进行又依赖于细胞周期调控蛋白如cyclinD，cyclinA，cyclinE等及细胞周期依赖性激酶(CDK)的正常表达.cyclinDCDK4是G0/G1期的限速步骤，过度表达G1期的周期蛋白如cyclinD，cyclinE能加速细胞快速通过G1期.cyclinD1蛋白表达与细胞周期运行有关［6］，抑制肿瘤组织生长与P53的高表达及cyclinD1低表达相关［7］.以17羟雌二醇作用雌性Wistar大鼠60d，发现雌二醇通过减少CDK2，CDK4的表达以及降低CDK2活性，将细胞阻滞于G1/S期［8］.本研究结果表明，OP作用MDAMB231乳腺癌细胞后，能降低CDK2,CDK4,cyclinD1及cyclinD3mRNA的表达，降低cyclinD1蛋白的表达，抑制乳腺癌细胞的增殖，细胞阻滞于G1/S期，导致MDAMB231乳腺癌细胞的增殖受抑，并呈剂量效应和时间效应.
【参考文献】
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医学实践论文范文第7篇
××，女，现年岁。年毕业于湖南医科大学，现任邵阳市第一人民医院儿科主任。该同志自参加工作以来多次荣获湖南医科大学“优秀带教老师”等荣誉称号，先后在省级以上刊物发表专业论文数篇，科研项目获市级科技成果二等奖，她所领导的科室由于获得了良好的社会效益与经济效益也于年荣获“省表年文明号”称号。该同志现为中华医学会邵阳分理事委员、市儿科专业委员会副主任、省脑瘫康复委员会委员，中南大学湘雅医学院兼副教授。
一、刻苦钻研、苦练本领
××同志自年参加工作以来就一直在临床一线从事儿科疾病的诊治工作。为了使自己成为一个出色的儿科医生，为年幼的患儿解除病痛，为患儿的家庭拂去忧愁，她总是刻苦钻研专业知识，埋头工作。在虚心向老同志、老专家讨教临床经验的同时还不断汲取新的知识，探索新的科研项目。她在这种进取精神的激励下日渐成为一个技术精湛的儿科大夫，并于年晋升为儿科副主任医师，成为儿科医师队伍中的当家花旦。二、言传身教、严谨行医
××同志从进入临床工作的第一天起就严格要求自己必须做一个让患者觉得可亲又可敬的医生。在医疗技术上她要求自己精益求精、治疗效果上要好上加好，在诊治疾患的过程中应该严肃认真，尽职尽责，这样才可以在患者心目中树立自己的可敬的形象，而平时与患者的交谈又要亲切自然、态度和蔼，要把患者及其家属当成自己的朋友一样去交谈，这样才可以让患者又觉得可亲。多年以来，××一直就这样要求着自己，同时也要求着自己带教的学生。××同志工作所在的邵阳市第一人民医院是湖南医科大学（即湘雅医学院）的教学医学之一，每年都有大批的学生来到该院进行临床实习。正是有着象××同志这样严谨行医、言传身教的好老师，湘雅学子在这里才得到了良好的临床锻炼，既丰富了自己的临床知识又树立了良好的职业道德，为日后担负救死扶伤的光荣使命奠定了坚实的基础。也正是××同志几十年如一日的工作伤风体现在每一次的带教工作中而使她连续多年获得湖南医科大学“优秀带教老师”的荣誉称号。
三、心血浇灌、铁树开花
由于业务水平高、工作责任心重，又具有强烈的开拓精神与领导意识，××同志在年全院中层干部大调整时成为当之无愧的儿科主任，全面负责儿科的工作。年以前，由于众多的原因，儿科在我院所有的科室中是出了名的差科室、累科室，患儿哭哭啼啼，家属骂骂闹闹，医务人员忙碌了一年却还得不到一分钱的奖金。多年以来的这种状况致使在儿科工作的医护人员思想不稳定，总想有朝一日跳出这个火坑。××任儿科主任后深知重任在肩，为了改变儿科的现状，她进行了大胆的改革和创新；调整病房布局、开创新的项目、挖掘服务空间、提高业务水平、增强服务意识、改善医患关系、扩大行业影响……能想到的她都去做了，能去做的她都做好了。功夫不负有心人，她用心血浇灌的儿科这棵铁树终于开出了喜人的鲜花：该科目前已形成了以新生儿重症监护病房与小儿脑性瘫痪康复治疗中心为主的特色专科。高超的医疗水平和完美的服务理念改变了儿科当年的“火坑”局面。如今的儿科，医患关系融洽、就医环境舒适，工作人员笑容灿烂，最值得一提的是儿科全体工作人员在××的带领下竟创造了年收入连续翻几番的经济效益，从年全科年收入的万增加至××年的多万元。今年上半年儿科总收入万元，比去年同期增长万元，增长。成为临床科室业务总收入和增幅位居第一的科室。版权所有
四、枝繁叶茂、硕果累累
××同志于年在全市各大医院中率先创建了新生儿重症监护病房，数年来治愈了各种新生儿重症疑难病例数千例，特别是在超低体重早产儿的救治方面获得了巨大的成功。她曾救治的一位孕期只有周，体得仅为克的早产儿是目前为止我市救治的一位体重最轻、孕期最短的一个早产儿。该例患儿的成功救治标志着我市在超低体重患儿的救治方面达到了一个新的水平。更让人惊喜的是她在最近又成功抢救一例呼吸停止个小时的新生儿，为我市重症儿的救治工作再谱篇章。××同志在取得临床医疗效果的新突破的同时，更有医学理论方面的新成就；年《大剂量东莨菪碱抢救婴幼儿重症肺炎合并顽固性呼吸衰竭例临床分析》获全国首届基层医学理论与实践论文优秀奖；同年《中西结合治疗小儿病毒性脑炎例临床分析》再获全国首届基层医学理论与实践论文优秀奖；年《大剂量维生素及鲁米那治疗新生儿缺血缺氧性脑病的临床观察》、《新生儿黄疸例的临床分析》又同获全国现代基层医学论文优秀奖；年月《高危儿的随访与超早期诊治脑瘫》在《中华临床医药杂志》第卷第期发表；××年月《高频射通气治疗婴幼儿急性呼吸衰竭临床观察》在《中华综合医药卫生研究》第七卷发表；抚触对促进低出生体重儿生长发育的临床疗效观察（《综合医学杂志》第六卷第七期）；高频喷射通气治疗婴儿急性呼吸衰竭临床观察《中华综合医药卫生研究》（××年月第卷）；年月，××同志被邵阳市医学会聘为儿科学会专业委员会副主任委员。摘获串串硕果，××不但没有觉得可以松口气了，反而更激起了她勇往直前探索科学领域的斗志。创建邵阳市第一家小儿脑性瘫奖康复治疗中心！这成了她的又一个奋斗目标。凭着她的毅力与能力，××又一次成功了。到目前为止这家邵阳市唯一的小儿脑性瘫奖康复治疗中心已成功治愈了多例小儿脑性瘫痪患儿，为孩子赢得了健康的生命，为患儿家庭驱散了忧虑的愁云，也为社会减少了负担和拖累。小儿脑性瘫痪康复治疗这一项目的开展填补了我市在该领域的空白并达到了国内先进水平，××年月《高危儿的随访与超早期诊治脑瘫》这一科研项目获邵阳市科学技术进步二等奖，××年月，湖南省医学会特于新宁举办由××同志讲述的《小儿脑瘫的超早期诊治与早期干预》继续教育学习班以肯定××同志在这一领域所取得成就促进该项目的继续发展。本文转载自网
××同志深深扎根在儿科这块土地上，多项目的深入研究有如繁茂的枝叶，渐次而获的成绩正如累累硕果。
五、救护生命、忘却小家
××同志十分敬业，她曾说：“我随时随地都是值班医生”。她以院为家，全部心血都倾注在医疗事业上。她担任科主任以来，从款休过探亲假及工休假，节假日也总要到病房去巡视。年初，武冈老家的母亲脑溢血病危，当时工作在新生儿重症监护病房的她正在救治一例体重克的早产儿，为了挽救宝宝的生命而没有请假回去照看母亲。最后，宝宝获救了，而母亲却离她而去了。
为弘扬人道主义精神，扩大社区服务范围，她还经常利用节假日还领医护人员深入到福利院及县、乡医院进行随访义诊，使重病的患儿及时送往医院救治，挽救了许多儿童的生命。
××同志就是这样一个平凡的科技工作者，她在自己平凡的工作岗位上为人类的生命健康、为医学技术的持续发展，做出了突出的贡献。××年月被湖南省政府妇联授予“三八红旗手”及“帼国建功标兵”同年月获得邵阳市专家突出贡献奖。
市第一人民医院
医学实践论文范文第8篇
关键词：专业选修课；现代教学论；教学认识论；教学实践论；教学构建论；教学交往论；实践探索
中图分类号：G642 文献标志码：A 文章编号：1002-2589（2015）11-0202-03
高等教育是科技和社会发展的重要引擎。党的十七大以来，党中央、国务院做出了走中国特色新型工业化道路、建设创新型国家、建设人才强国等一系列重大战略部署，为此，教育部启动了“卓越工程师教育培养计划”。哈尔滨工程大学于2010年6月成为首批进入该计划的学校，肩负着培养造就创新能力强、适应经济社会发展需要的高质量工程技术人才的重任。在国家和社会对高等教育改革发展迫切要求的时代背景下，教育工作者们备感责任与挑战，同时也十分珍视这破茧的契机。
专业选修课长期以来是高校课程体系和学生培养方案的重要组成部分。学校已成为国内“三海一核”等领域人才培养和科学研究的重要基地，专选课程的建设应围绕国家战略，顺应国家发展的需要，符合当前行业的发展状况和用人需求，以学生的发展和成长为长远目标。然而，专选课相比公共基础课、专业必修课等有不同的特点，实际教学中往往存在“老师鼓不起热情，学生提不起兴趣”、重方法轻理论、片面地运用一些现代教学手段但缺乏实效等问题。
本文结合理工科专选课特点及作者自身的教学思考和体验，力图寻求适合于专选课的教育理论，并在其指导下探索改进教学方法。
一、理工科专业选修课的特点及教学现状
作为一种特定的课程类型，只有充分把握其特点和使命，才能与现实对比发现差距、针对性地寻求改进方法。
首先，与公共基础课、必修课相对应，专业选修课应着重拓宽学生的思路，开阔视野。换言之，可以不拘泥于知识的系统性、完整性，转而更重视研究兴趣的激发、最新科研动态的传递和评价以及学习和科研方法的引导[1]。专选课不应该只是现成知识与结论地单向灌输，而应适当包涵启发性、探索性甚至不确定性的内容。这是很重要但又常被忽视的一方面。
其次，与通识选修课不同，专选课的内容虽也可以融入对思想道德、思维品质、学术态度等方面的教育，但其不可能囊括各学科多分枝，也不是一味迎合学生的生活情趣和日常爱好，而是自有其专业性。从这一点来讲，专选课在内容上不宜太笼统空泛，讲授时不应过于浮光掠影、将大部分内容推给学生课后自学，而是应该有充分的课时保证、足够的专业内涵，让学生听之有物、学有所得，如此才能促其养成良好的专业素养。
最后，理工科的很多知识都是学生未来科研和工作上实际解决工程问题的工具，其专选课应该也能引导学生锻炼实际解决相关问题的能力。因此，专选课还应该具有应用性和实用性的特点，教学内容中对实践技能充分关注，培养学生应用所学的知识实际分析问题、提出方案、解决问题的能力，避免纸上谈兵、雁过无痕。
专业选修课兼顾了专业的拓展教育与学生的自主选择，按理说应该是一类很受欢迎并能带来很大收效的课程，但实际的教学情况往往不如人意，表现出的问题大致有如下一些方面。
第一，体制机制上，学校支持不够、教师热情不足。在同行沟通及走访调研中了解到，学校在评职、聘任、课时核算、教学奖申报条件等导向性政策的制定上常将选修课排除在外；资历丰厚的教师宁肯重复教授基础课，也不愿投入精力新开一门选修课；青年教师由于多处在科研经验的积累阶段，对讲授内容的理解主要来自书本，欠缺对课堂的把控能力和对教学方法等的深层次的思考，或者忙于投身项目，难于创新。
第二，教学理念上，重方法不重理论。多媒体技术普及之前的情形多是老师整面板书、学生忙于笔记而来不及思考消化。如今，基于计算机技术的现代多媒体教学方式已成为主流，很多高校实现了多媒体全覆盖，但不乏一些教师是在政策要求下被动地使用多媒体，或是在形式上代替黑板，加快了“翻篇儿”的速度，使得教学效果不显著，教育的投入产出比居高不下。此外，一些教师把他人的新鲜方法照搬照套，简单秉持“经验主义”“实用主义”，欠缺对教学方法背后的理论思考，认为理论太抽象、不实用。殊不知，教育不只是一项技术，也是一门科学。教育理论虽然源于教学实践，但也可以反过来指导实践。对于现代教学手段所带来的新情况、新问题，需要结合新的教学理念和理论来探索处理和解决的方法。
第三，教学内容与教学方法难以激起学生的动力。有教师悉心进行了调查，统计发现61%的学生认为理论性强的专选课最没有开设的必要[2]；91.2%的学生则希望在讲授基础上增加互动、案例讲解、实践操作及应用等内容[3]。与这些愿望相反，实际情况是不少专选课充斥着大篇幅的理论讲授，缺乏对学生能力――特别是学习能力和创造思维能力的培养；在教材选用上比较陈旧、封闭，或干脆没有教材；在教学活动中以教师为重心，学生处于被动地位；在教学形式上沉闷、呆板，导致“慕课而来”的学生兴趣渐减，而抱着凑够学分心理的学生则收效更微，教师在台上也难免“看在眼里，冷在心上”。
第四，考核指标相对单一，评价体系不够人性化。有的过分看重学生掌握知识的多少，熟练程度以及考试成绩指标；有的看似指标多元化了，但只是出勤到课、期中论文、期末成绩之类的简单叠加，可能导致学生用心不在学习而在应付；另一类常见的做法是单纯采用课后小论文或大作业的形式，这纵然可以迎合很多学生的想法，但易使某些作业通过拼凑蒙混过关，没能起到让学生真正有所学、有所思、有所得的目的。笔者在与学生的交流中常听反映，他们期望的是既可以开阔眼界、了解前沿、学到知识和能力，又不需要为应付考核而分心的课程。一套科学的评价指标体系也可以从侧面调动学习的主动性和积极性。
二、现代教学理论比较分析
为了针对性地改善上述问题，教育工作者有必要在理论层面进行梳理，通过比较和分析，探寻适合课程特点的教学理论，吸纳各派理论中的有益成分，从而反观和指导平日的教学活动。
现代教学论内涵人本主义思想，是在“二战”后国际关系民主化、经济全球化、文化多元化的背景之下，在对近代传统教学论的基础上批判、发展起来的[4]，产生了包括美国教育家杜威、苏联著名教育家赞可夫、美国著名心理学家布鲁纳在内的代表性人物以及一系列影响广泛的教学理论。
1.教学认识论
到目前为止，教学认识论仍是指导课堂教学的主要理论。它把教学活动概括为“学生在教师指导下认识世界的过程，是接受前人积累的知识经验的过程”。这一理论认为学生对知识是未知、少知的，处于被动接受地位；而教师的知识和经验具有权威性，负责引导学生掌握系统的文化科学知识和技能技巧，处于主动的讲授地位。它过多强调知识本身的重要性，对于学生学习的心理基础常有忽视，而且对于实践对认识的作用缺乏考虑。因此，尽管教学认识论的基础源自马克思主义认识论，但它并非真正符合该理论；其理念和观点不无道理，但也存在明显的局限。
2.教学实践论
在教学认识论的基础上，教学实践论的思想提升了一个层次，在教学改革中引起了极大关注。在马克思主义认识论和实践论的综合指引下，教学实践论把教学过程看作是教师精心指导学生掌握知识经验的认识活动和建构学生完美主体结构的实践活动的统一体[5]。课本和老师所传授的高度凝练的知识对于学生而言只是间接经验，缺乏个人体验，对理论知识加深理解会产生一定障碍。因此教学活动不仅仅是让学生获得人类已知的经验，更应针对性地补充实践环节，帮助学生获得直接经验，更好地掌握理性知识，同时进一步放回到实践中进行验证，从而培养运用知识的能力。在这一实践过程中，学生转而成为主导者，教师则完全作为旁观者与指导员。
3.教学构建论
教学构建论的理论基础是建构主义心理学，经过皮亚杰、苏联心理学家维果斯基、美国教育家布鲁纳等人的发展逐步应用到教学活动中来。
教学构建论对于知识、学习的概念以及学生、教师的角色和关系有着独到的认识。知识只不过是人们对客观世界的一种解释、假设或假说，不能作为问题的最终答案，因此教师不能把知识作为预先决定了的东西教给学生，不能用社会赋予的“权威”去压服学生。应当把学习者原有的知识经验作为新知识的生长点，倾听他们自己对各种现象的思考和理解以及这些思想的由来，并据此引导学生丰富或调整自己的解释[6]。
正所谓“学生的头脑不是一个要被填满的容器，而是需被点燃的火把”，教学构建论十分重视知识的处理和转换、学生对知识的主动构建，而且并不忽视构建过程中教师的有效指导与良好情境的创设。这些理念使得教学构建论更富人性化，也显得更科学合理。不过它对教师的能力水平要求也要更高，否则有可能模仿了形式，却无法收到实际、深入的教学效果。
4.教学交往论
教学交往论源自哈贝马斯的交往理性论，其理论基础看似深奥，但所蕴含的追求却是不难理解的。教学交往论认为当前的教育世界被“工具理性”所统治――师生之间、师师之间、生生之间的交往多是一种知识传递的事际关系，人员的交往在“工具理性”的支配下变得缺少温度和内涵，因此期望通过弘扬人的主体性、倡导“交往理性”来解放教育，进而解放人类自身[7]。该理论主张变革传统的非民主、僵化冷硬的师生关系，强调教学活动的双边性和师生间的交流与沟通，其倡导的自主学习、合作学习、探究学习等教学交往活动，不仅有利于学生的道德发展、知识获取和方法习得，更有利于培养未来社会成员的“交往理性”，促进社会的和谐和高效运转。
结合以上有关专业选修课特点的论述，我们不难发现。
教学认识论最为朴素，其讲授式教学对于比较系统、相对确定的知识教育（如基础教育）可以适当采用。但它片面理解了马克思主义认识论，强调教师单方面的主体作用，因此单纯依据该理论对于专选课而言不甚适合。教学实践论转而关注实践对于认识活动的作用，教学方式由单向接受向有实际操作环节拓展，教学环境也可以由局限于教室向课外拓展，有利于学生获取直接经验，巩固所学知识，形成运用能力，适合理工类专选课的特点。倘若将这两种理论有机结合，既有讲授部分也安排实践环节，使知识不脱离实践，同时也能限制学生在正确的方向之中自助探索，学习中不失积极性和兴趣，应该能促进专选课的教学效果。
教学建构论有比较强大的心理学理论支撑，既保有教师的主导地位，更强调学习者从既有知识和能力上的主动构建和生发，提倡教学主体的回归，体现了以人为本、教为学服务、教与学并重的思想。高等教育的对象大多有一定的基础知识和经验技能，专选课的知识内容又恰好具有不求全面、可供探讨的特点，需要充分发挥学生的主动性、积极性和首创精神，这与教学建构论的理念以及衍生出的研究性学习、探讨学习方法正相契合。教学交往论则在人文关怀层面上更进了一步，让学生和教师都作为生活世界中的人，以平和的心态、平等的姿态走入专业世界。但要做到这一点，似乎与教师自身的阅历积累乃至人格魅力有很大关联。
综上笔者分析认为，以教学认识论―实践论相结合的理论以及教学构建论来指导专业选修课的教学活动是比较可行的，同时也应该不断积累经验，尝试将教学交往论的理念适当融入。这也符合当今单一理论指导向多元理论指导的发展趋势。
三、结合适当的教学理论改进教学方法
在上述可行的教学理论指导之下，笔者结合自身讲授的《大型水面舰船的舰机适配性》一课开展了探索和尝试。该课程主要针对本校船舶与海洋工程专业本科生，面向国防、船舶工业和海军装备建设领域的特色，旨在引导学生建立舰机适配性的基本思想和工程技术意识，掌握相应地基本知识体系，为日后相关技术工作奠定必要的理论与技术基础，是一门典型的理工科专选课。
一是基于教学认识论，笔者对于课程中的概论性知识和关键技术知识进行了启发性讲授，使学生对相关领域形成基本轮廓，掌握思考和分析实际问题的基础能力；并利用多媒体教学设备和仿真软件动画、专题视频等经过积累和修改的教学资源，化抽象为形象、化静态为动态，把理论教学直观化。
二是基于教学构建论和交往论，课程在介绍完大型水面舰船和舰载机的基本知识之后，没有直接进入有关舰机适配性的讲授，而是以一张存在问题的甲板设计图为引子，启发学生主动发现问题，思考舰机适配的必要性和注意要点。加入这一环节，一方面是考虑到选课学生对于有关知识并非空白，通过平日的新闻报刊以及专业课学习都多少有所了解，有兴趣也有能力主动思考，从而加深学习印象；另一方面是借此反面案例，同时以自身科研工作的经验引导学生在学习和研究中注重培养严谨细致的科学品质和系统工程思想，与学生相互鞭策、共求进步。类似的方法在课堂上收到了良好的响应和成效。
三是基于教学实践论和构建论，笔者在征求学生意见的前提下调整了考核和评价方法，降低了期末大论文的分值比重，拟定增设两次分小组专题报告的环节，并结合考虑出勤和即兴发言情况。此举主要为了避免学生期末匆匆应付了事，而是通过小组的自愿搭配、专题的研究探讨、组员的分工合作、汇报陈述后的答辩以及教师点评和集体评议，努力在课堂内外形成和谐积极的师生和生生关系，培养学生的知识运用能力、想象创造力和表达展示技巧。要求小组在确定专题内容、撰写报告之前拟定提纲上交，从而提供一次教师引导的机会，加大学习成效。两次分小组专题报告中，一次指定题目，学生围绕各国的舰机适配性工程案例搜集资料并探讨利弊，取得了举一反三、掌握课程和核心知识和思想的效果。另一次则开放思路，让各组结合已学知识信息，发挥成员的想象力，提出一种满足舰机适配性的舰船甲板布置方案。这一话题的考验难度增加，加之由于课程后期临近考研，部分小组没能圆满完成；但仍然有小组在把握基本原则的前提下打破思维常规，形成了完整的方案，且报告规范，研究成果令人惊喜。这也进一步说明了调动学习者主观能动性的重要作用，它可以激发学生学习和教师授课的热情，使教学双方相互启发，彼此促进。
四、结论与展望
本文结合作者自身和广大同行在日常教学工作中的经历，从专业选修课的特点出发，针对其现实教学中反映出的问题，梳理并分析了几个典型的现代教学理论，提出以汲取各家精华的多元理论来指导专选课的教学比较适合，即以教学认识论―实践论相结合的理论以及教学构建论为主，以教学交往论的理念为辅。同时借助校级教改项目为实施平台，针对一门专选课开展了初步探索，获取了一些心得和成效。由于一些客观原因，这些探索还不够系统，笔者将根据反馈的结果进一步调整和改善，在后续的教学工作中继续实践，期望在优秀教学理论的指导下形成一套行之有效的教学方法并供以交流借鉴，促进专业选修课的教学形成学校重视，教师投入，学生爱学的积极氛围和符合社会需求的良好效果。
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医学实践论文范文第9篇
关键词：研究生 培养工作 健康发展
中图分类号：G4 文献标识码：A 文章编号：1673-9795（2014）04（b）-0082-02
医学研究生培养是医学教育结构中最高层次的教育，担负着培养高素质人才和发展医学科学技术的双重任务，直接影响到我国医学事业的发展。随着近年来医学研究生招生规模不断扩大，如何保证培养质量，提高培养工作效率，是研究生培养管理部门努力探索的一项课题。结合工作实践，针对如何推进医学研究生培养工作进行了一些思考。
1 研究生培养工作存在的不足
1.1 管理制度方面的不足
一是信息化管理程度有待提高。在研究生培养各环节中需要逐步实现研究生网上学籍注册、选课、评课和成绩查询等，通过网络提供研究生培养方案和培养计划，开辟研究生网上学术论坛，促使研究生培养管理网络化。
二是答辩制度需进一步完善。当前在研究生的答辩过程中，聘请的答辩专家一般都只审查研究生论文，而对科研原始资料、学术成果证据很少查看，因此，实验数据的真实性需进一步甄别。答辩专家资格需要进一步规范。明确规定参加答辩专家的专业特长、工作纪律、回避条件，通过标准化程序开展答辩工作，杜绝随意性。
三是联合培养单位研究生管理制度欠佳。联合培养单位远离学校，缺乏熟悉教学管理的人员，培养环节把关不够细致。医院往往疏于管理，导致出现违反校纪校规以及安全方面的问题。
1.2 培养过程中存在的不足
一是辅导员队伍欠专业化。由于研究生学历背景、年龄层次差距较大，所面临的就业、家庭压力、求学目标也各有不同，导致开展思想政治教育难度较大。加上辅导员同时承担了其它工作，时间、精力有限，导致管理存在许多问题。
二是导师重专业轻思想教育。导师作为研究生求学生涯的重要引路人，对研究生个人成长影响很大，需要对研究生从专业知识到品德修养全方位进行帮助指导。导师是研究生思想政治教育的“首要责任人”，但部分导师存在重专业轻思想教育的现象。
三是课程设置、教材、教学需优化。某些专业的课程体系缺乏系统设计，课程设置不科学、不规范，缺乏连续性、一贯性。在课程设置中对如何培养研究生的创新精神和科研实验能力的问题，还有待进一步探索。一些研究生课程的教学内容中，课程内容经久不变，许多内容已经不合时宜[1]，特别是反映学科发展前沿和人文素质培养的课程数量偏少。
四是学术道德存在问题。由于对研究生个人品行修养的教导及监督存在缺陷，个别研究生学术成果存在编抄杜撰数据、抄袭他人学术成果、考试作弊等等不良行为。
五是论文质量不高。部分研究生毕业论文质量不高，没有新的学术成果，理论依据不严谨，辞章缺乏逻辑性等问题。
六是创新基地建设力度不够。医学是一门实践性很强的学科，目前研究生研究成果转化上一直存在较大问题，严重阻碍了研究生科研向生产的转化，对学术成果的实践论证也明显滞后，因此创新实践基地需加大建设力度。
2 大力推进研究生培养工作健康发展的几点建议
2.1 管理过程中不断改革，规范管理制度
一是建立健全信息化管理制度，更新研究生教育管理手段。教育管理信息化建设是社会信息化发展的必然要求，在世界已经进入数字化时代的今天，研究生教育管理程度越来越高，许多新情况、新问题的出现都要求我们推进管理技术的信息化，为了提高管理水平和效率。管理的各个环节需要充分运用现代的理论、方法、技术，利用学校研究生院建立的统一数据平台，实现网络化、信息化管理，如应用网络技术进行网上报名、成绩管理、导师队伍管理、数据统计、信息收集等。这些现代化办公手段和技术的应用，将大大提高工作效率，减少工作误差[2]，为研究生管理工作的科学性、规范性提供技术保证。
二是建立健全答辩制度，确保论文答辩工作质量。在学位论文工作的各环节严格把关，要求研究生所选课题多层次、多视角，层层审核；除了正常的课程考核成绩合格，如可考虑在申请学位论文前必须在正规省级以上期刊发表一篇论文；规范预答辩制度，确保毕业论文质量符合要求；建立完善答辩专家筛选审核制度，确保研究生答辩工作的严谨性、公平性。
三是建立健全联合培养制度，保证研究生联合培养质量。为了确保联合培养单位研究生培养质量，一要参与相关培养环节的考核，诸如开题报告、临床考核、学位审核等。二要加强检查和监督力度。即对联合培养单位培养研究生全过程进行监督，每年最少要集中检查两次。与研究生管理部门负责人进行沟通。与研究生进行座谈，了解研究生在思想、生活、学习、工作中存在的困难。与所在联合培养单位的导师进行沟通并培训。通过具体全方位的考察、学习、收集研究生、导师，教学管理部门负责人的意见和建议，通过加强对各培养单位管理部门负责人的沟通与培训，通过及时解决研究生提出的各方面的困难，使我校联合培养单位管理部门的负责人及导师更加熟悉研究生培养的全过程，使研究生管理、教学更科学化、规范化，使研究生及时得到了学校的关怀，更加努力的学习与工作。
2.2 培养过程中不断创新，把握好质量关
一是加强研究生思想教育，使研究生辅导员队伍专业化、职业化。研究生辅导员需不断进行培训与学习，提升自已的业务和理论水平。在工作中，以塑造医德为重点，从研究生入校开始，针对性开展一系列的教育，及时掌握发现学生思想动态，帮助研究生解决工作和学习中的实际困难，将为病人服务的职业道德理念培植在研究生灵魂深处，培养具备良好职业道德的医务工作者。
二是强化导师的责任意识，发挥导师教书育人的作用。导师是研究生培养过程中的第一责任人，充分发挥导师的育人作用，加强研究生与导师的联系，依靠导师把质量意识融入到研究生培养管理的各个环节[3]。如导师要认真审查并严格执行每位研究生的培养计划、严格审查学位论文、答辩等环节，确保研究生培养规模与质量的协调发展。
三是不断推进课程改革，借鉴先进教学经验。在一系列的研究生课程改革中，要求研究生课程内容力求体现前瞻性、应用性和前沿性，课程设置与教学内容既分清层次，又注意衔接。同时适应现代医学的发展趋势，在课程改革中通过减少必修课、扩大选修课程，促进新课程和前沿课程的开发和建设，促进教学质量的提高。鼓励教学手段现代化，教学方法多样化。在研究生教学中，鼓励教师采用现代化教学手段，鼓励英语与双语教学。在教学方法上，案例教学、启发式教学、课堂讨论等应被普遍应用，特别是研究生研讨式教学的探索等教学方法改革，将有助于研究生教学内容和形式向前推进一大步。
四是严处学术不端行为，严格医德医风教育。结合《教育部关于严肃处理高等学校学术不端行为的通知》教社科[2009]3号精神，加大对研究生学术不端行为惩处力度，对毕业研究生的学位论文全部进行不端行为检测。完善《加强研究生学术道德和学术规范建设的实施细则》等制度规范，保证医学研究生医德医风端正，切实为社会输送合格的医学人才[4]。
五是加大论文盲评试点，促进学位论文质量提升。加大抽查研究生学位论文盲审工作力度，与相关单位建立盲评合作关系。通过盲审，大力推进论文评审工作，加强对研究生学位论文工作的督促，促进研究生学位论文质量的提高。
六是开展教育创新基地建设，培养实用型医务工作者。大力建立研究生教育创新基地，建立健全创新基地管理规章制度，以学校专家为主开展基地建设工作，辅以企业专家共同搭建研究生培养平台，通过学校专家与基地专家相互交流与沟通学习，加强学术交流，为共同培养实用型高级人才奠定基础。
参考文献
[1] 周俊.医学院研究生课程设置的实践及启示[J].中华医学教育探索，2011（8）：968-969.
[2] 李门楼.研究生教育管理信息化的实践与思考[J].研究生教育研究，2011（6）：22-23.
[3] 孙玲芳，金明.导师责任制下提高研究生培养质量的思考与实践[J].江苏科技大学学报，2007（9）：106-107.
医学实践论文范文第10篇
[关键词] 公共卫生管理专业；教学改革；思考
[中图分类号]G420 [文献标识码]C [文章编号]1673-7210（2008）06（b）-186-02
随着我国社会经济的发展和对卫生管理的要求，对公共卫生管理专业学生的培养也提出了更高的要求。因此，如何培养适应新时代公共卫生事业管理人才是卫生管理专业高等教育所面临的首要问题。
1卫生管理专业教学面临的问题
1.1课程结构设置不够科学
首先，在课程设置中医学课程所占比重过大。从我国几所已设置卫生事业管理专业的主要高校来看，大多院校的医学课程比重都在45 %左右。其次，对预防医学课程重视不够。开设预防医学的比重较低，预防知识不足严重影响人才专业水平。第三，管理专业相关课程太少。大多院校卫生事业管理专业的专业课程占总教学课时不足30%，学生知识结构相对单一。
1.2 教材内容过于陈旧，脱离实际形势的变化
近年来我国医疗卫生领域的各个方面都发生了根本性的改变，教材内容却明显跟不上形势的变化。比如医疗保险等制度性变革每年都有新的改革措施出台，但教材不能把现实改革的状况反映在教材上。
1.3教学过程实践性不足
一是教师自身来自医学或者管理专业，不能很好地融合两类知识，综合素质有待提高。二是课堂教学多以讲授为主，使学生实践能力得不到提高。三是教师自身存在着理论与实践脱节的问题。教师亲身实践活动不足， 使得实践教学内容空洞。
1.4 学生的学习成绩考核形式单一
一是平时成绩以单一的闭卷考试为主，忽视了综合能力、操作能力、实践能力的考核。二是实习没有规范化的评价标准。现在卫生事业管理专业的实习有些在医药企业，有些在医院行政职能科室，在实习过程中没有一个具体的目标管理，对实习效果没有规范的评价标准。
2 卫生管理专业教学改革的设想
2.1明确专业培养目标和能力要求
根据《中共中央、国务院关于卫生改革与发展的决定》确立卫生事业管理专业的培养目标，我们培养的学生应是能力强、素质高的卫生管理专业人才，应具备卫生事业管理和研究的初步能力，并对医疗卫生事业的发展作出经济分析和预测。
2.2 设计好课程体系的框架
为了实现以上的培养目标，需要制定一个符合知识、能力、素质协调发展的课程体系。卫生事业管理专业学生必须具有扎实、广泛的人文基础和管理学知识，必须掌握和了解经济发展的客观规律以及国内外经济形势。须设置西方经济学、财务会计学、人力资源等课程。依法管理是管理方法中的一种最基本要求，卫生管理专业人才必须具有系统的法学基础知识，因此卫生管理专业人才必须具有系统的法学基础知识。人文基础课还包括管理学、政治学、社会学、卫生关系学、保险学、心理学、组织行为学、运筹学等组成。人文基础(管理学) 类课时应占总课时的35%左右。
卫生事业管理专业的突出特点就是以卫生事业为中心，因此该专业应以医学的理论和知识作为专业基础。作为管理专业的学生要掌握基本医药知识，掌握常见病、多发病的基本理论知识。在原有的课程设置中应保持医学基础的框架不变，减少细分学科，增加预防医学科目。课时应占总课时的30%左右。
对卫生事业管理学生要加强逻辑思维和定量思维的训练，这部分课程主要包括计算机操作、调查、统计分析能力课等，占总课时的15%。
实践课必须保障学时数量，使学生有机会了解医药管理岗位的实际情况，培养学生的动手能力和实践能力。这部分课程应占总课时的10%。其他课时占10%。
2.3 提高教学质量，优化教学内容
包括：①重视教师队伍的培养。公管专业教师多数是其他专业转变过来的，针对这一特点，要制定本专业的师资培训计划。教师也应该定期实习，掌握第一手资料，要给教师足够的调研时间和实习课时。②慎重选择教材。优先选择具有实践案例较多的优秀教材。③在教学内容改革上，教师要及时补充有关卫生改革的新思路、新理论、新做法，激发学生的理论兴趣， 拓宽学生的学习视野，提出现实中出现的新问题和前沿讨论课题，弥补教材滞后的不足。
2.4 探索实践性教学的新方法
卫生管理专业的特点是它具有极强的实践性，目前虽然有的学校尝试了实践性教学，但其效果不尽人意。学校应在教学基地的建设上加大投入，在实践教学中，不断探索新方法，如基层参观、现场讲授、模拟团队等，要定点、定量、定期、定标准，利用科学手段使实践性教学规范化。鼓励教师参加实践，并给教师提供实践基地和必要的经费。
2.5 注重学生综合能力的培养
首先，要让学生拓宽视野。很多学科的知识是互相交叉、互相渗透的，开设范围较广的讲座课。其次，注重培养学生自我获取知识的能力，培养学生在学习知识的同时掌握学习方法。再次，在教育教学中，应当注重对学生实际操作能力的培养。应该把现实问题推出来，让学生讨论、辩论或写出自己的看法，以此作为学生成绩的主要依据。
2.6 制定实习评价标准
包括：①实践单位对学生的能力评价；制定能力评价指标体系，交给实习单位填写，该表要量化，比如要有考勤、跟踪病房次数、下基层次数、调研报告的实际案例分析等。②写出实习单位的管理评价书。对实习单位管理上的长处和短处作出自己的评价。在实践过程中，发现了哪些问题、提出了哪些解决问题的方案、是否切实可行。③写出实践论文。考察论文写作的逻辑性和科学性。根据以上几个方面，评价学生的实习质量，给出实习成绩。
[参考文献]
[1]杨一帆，周毅,欧崇阳，等.卫生事业管理专业人才培养模式改革研究[J].医院管理杂志,2005,（5）:12.
[2]张旭，陈立明.高等院校卫生事业管理专业课程设置问题的探讨[J].重庆医学, 2006, 35(6):564-566.