成人隐匿性自身糖尿病免疫学研究

1资料与方法

1.1一般资料

选取2010年3月～2014年3月在我院内分泌科住院的糖尿病患者133例：LADA组52例；诊断标准：糖尿病患者年龄≥15岁、胰岛自身抗体阳性、诊断糖尿病后至少半年不依赖糖尿病治疗，同时具备以上3项，排除妊娠及其他特殊类型糖尿病后即可诊断LADA。速发型1型糖尿病组31例；诊断标准：以酮症发病，一直需要胰岛素治疗；空腹C肽＜0.3mmol/L，餐后C肽＜0.6mmol/L；GAD、ICA均阴性。同时选择与之匹配的2型糖尿病患者50例。所有患者符合1999年WHO糖尿病诊断标准。排除标准：妊娠糖尿病以及药物、胰腺疾病等所致的特殊类型糖尿病。

1.2调查内容

表格式询问登记糖尿病发病情况、病程、诊治经过、既往病史、家族史；专人测量升高、体重、血压；计算BMI（按kg/m2公式）。

1.3实验室检测项目

空腹及餐后2h取血，测定血糖、血脂、糖化血红蛋白（HbA1C），C肽、GAD、ICA。血糖以葡萄糖氧化酶法测定、血脂以全自动生化仪用酶法测定。HbA1C采用高压液相法测定、C肽和胰岛素用放免法测定。GAD、ICA采用ELISA法测定（试剂盒购买自德国宝灵曼公司）。

1.4流式细胞分析

采用BDFACSCanto2型流式细胞仪，将抗凝血与荧光标记抗体室温孵育25min，加入溶血素室温避光10min，离心后PBS洗涤细胞2次，加入PBS、多聚甲醛混匀，4℃避光，3天后上机检测。采用FACSCanto软件，每次收集细胞15000以上，计算CD4+T，CD8+T细胞群占外周血淋巴细胞的百分比，并计算两者比值。

1.5统计学分析

采用SPSS13.0统计软件进行统计分析，计数资料采用x2检验；计量资料以“x±s”表示，采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1三组患者一般情况及生化特征比较三组患者在FBG、P2hBG、HbA1C方面相似，差异无统计学意义（P＞0.05）；从血糖代谢角度而言有可比性。

2.2三组患者的GAD，ICA，TPO-Ab、CD4、CD8比较LADA和T1DM患者GAD、ICA阳性率明显高于T2DM组（P＜0.05）；LADA和T1DM患者CD4+T细胞、CD4/CD8比值高于T2DM组（P＜0.05）；而CD8+T细胞均低于T2DM组，但单组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。

3讨论

通过比较总结LADA患者具有如下特点：患者平均年龄、体重指数（BMI）、空腹以及餐后C肽水平介于1型及2型糖尿病之间；GAD，ICA阳性率高；CD4+T亚群比例以及CD4/CD8比值高于其他类型糖尿病。研究表明GAD的滴度高低与LADA临床表现相关。Buzzetti等[2]大样本研究中，GAD滴度呈双峰分布，高滴度者具有严重的胰岛细胞内损害及更高的HbA1c；而肥胖和代谢综合征比例较小；合并IAA及TPO-Ab阳性者比例更高。国内临床前瞻性研究[3]提示GAD滴度与FC-P呈负相关，且随访期间发现GAD滴度还与FC-P下降百分比呈正相关，这反映了较强的免疫反应可导致胰岛细胞功能的较快衰竭。本研究对本院住院的781例各类型糖尿病患者进行血清GAD、ICA检测；发现在LADA患者中起阳性率最高，分别为63.5（33/52）、25.0（13/52）；与国内外学者研究结果想符合。国内外研究[5-6]发现LADA和T1DM、T2DM患者的CD4+T细胞、CD8+T细胞变化不一。本研究发现，LADA和T1DM，CD4+T细胞和CD4+T/CD8+T比值与T2DM相比明显升高，而CD8+T细胞稍有下降，但统计学分析差异不显著，表明自身免疫性糖尿病患者体内存在明显T细胞亚群失衡和免疫功能紊乱。目前认为CD4+CD25+调节性T细胞群（CD4+CD25+Tr）是机体免疫系统外周耐受维持的一个重要的调控者，是一具有免疫调节（或免疫抑制）作用的细胞群，占CD4+T细胞的5%～15%。它可以通过细胞接触机制或抑制性细胞因子依赖机制主动抑制自身免疫性T细胞的活化，维持自身免疫耐受，防止自身免疫病的发生。若LADA患者免疫调节性CD4+CD25+Tr细胞减少，而细胞毒性CD3+CD8+T细胞增多则会破坏胰岛β细胞，导致自身免疫性糖尿病的发生和发展。本研究结果表明LADA体内存在多种自身抗体入GAD、TPO-Ab等等、淋巴细胞群亚群绝对值和比例的变化，那么GAD能否反映T细胞介导的免疫反映程度？近年来已有学者通过酶联免疫斑点（ELISPOT）技术观察到LADA患者Th1/Th2失衡，有更多Th1细胞产生。目前通过ELISPOT技术可以检测到单个T细胞的特异性反应，未来我们可以通过应用此技术对LADA患者及早诊断、治疗和预防。

作者：邓利娟 王红梅 吴永新 林霖 单位：梅州市人民医院内分泌科