流式细胞术检测1150例HLA―B27抗原的临床价值探讨

【摘要】 目的 为了探讨HLA-B27抗原检测的临床价值。方法 用流式细胞术检测本院及外院送检的1050例患者及100例健康人群的外周血淋巴细胞HLA-B27抗原，分析其抗原表达情况与强直性脊柱炎（Ankylosing spondyliti，AS）的关系。结果 1150例检测人群中疑诊AS者582例，症状不典型患者468例，健康体检者100例。在疑诊AS者中HLA-B27阳性率313/582（53.7%），临床最后确诊为AS者288例（占阳性的92.0%），症状不典型者中HLA-B27阳性率89/468（19.0%），临床最后确诊为AS者70例（占阳性的78.7%），健康体检者中HLA-B27阳性率4/100（4.0%），且4例均为同一家庭成员，临床无1例确诊为AS。所有HLA-B27阴性患者中有12例最终为AS者（占阴性的1.6%）。结论 HLA-B27与AS高度相关，对AS的辅助诊断具有重要价值，灵敏度为96.8%，特异度为93.5%，阳性预测值89.0%，阴性预测值98.1%，采用流式细胞仪进行HLA-B27的检测具有简便、快速、易于标准化及质量控制、结果准确可靠等优点，有利于临床推广应用。

【关键词】 强直性脊柱炎；HLA-B27；流式细胞术

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.08.696 文章编号：1004-7484（2013）-08-4684-03

人类白细胞抗原HLA-B27与人类的免疫系统功能密切相关，与多种疾病具有相关性，尤其是强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）[1]，是AS的重要辅助诊断依据，为了满足我市AS患者的诊治需求，我院于2008年开展了流式细胞术检测HLA-B27抗原，现已完成1050例患者及100例健康体检者的检测，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象 1050例均来自2008年7月至2013年5月我院及周边医院送检的住院或门诊患者，男性612例，年龄14岁-58岁，平均年龄22.8岁，女性438例，年龄18岁-62岁，平均年龄25.8岁，其中AS患者582例，症状不典型患者（如轻度腰背痛、手臂疼痛、关节疼痛、关节僵硬等）468例，按1984年纽约修订的AS诊断标准，最后明确诊断AS的有370例。健康体检者100例均来自我院体检中心临床无腰背、关节疼痛或僵硬等症状者，其中男性68例，女性32例，年龄19岁-55岁，平均年龄24.5岁。

1.2 方法

1.2.1 标本 按测定要求抽取患者静脉血1ml-2ml于EDTA-K2抗凝或肝素抗凝管中，立即轻轻颠倒混匀，于24小时内完成检测。

1.2.2 试剂与仪器 仪器使用美国Beckman/Coulter EPICS XL型流式细胞仪，试剂使用美国Beckman/Coulter公司生产的HLA-B27-FITC/HLA-B7-PE荧光双色试剂、阴性对照IgG2a-FITC/IgG1-PE试剂及全部原装配套试剂。

1.2.3 检测方法 检测严格按仪器及试剂说明书进行。

1.2.3.1 样本处理及检测 将HLA-B27-FITC/HLA-B7-PE单克隆抗体20μl加入到100μl全血中混匀，与白细胞膜上相应的抗体结合，经过溶血（和固定）、洗涤等步骤后，在流式细胞仪上进行分析测定。

1.2.3.2 结果判断 HLA-B27阳性且HLA-B7阴性（HLA-B27+/HLA-B7-）的细胞达90.0%以上，同时HLA-B27的平均荧光强度（X-Mean）达到8.0以上时判断为阳性结果，否则判断为阴性。

1.2.4 统计方法 结果采用百分比表示，组间结果采用χ2检验进行相互比较，p

2 结 果

2.1 1150例人群中HLA-B27抗原表达情况 1150例人群中疑诊AS组582例、其他症状不典型组468例，健康体检组100例，其中疑诊AS组中HLA-B27阳性313例（占53.7%），其他症状不典型组中HLA-B27阳性89例（占19.0%），健康体检者组HLA-B27阳性4例（占4.0%），其阳性率在三组中差异具有显著统计学意义（ρ0.005），见表1。

2.2 406例HLA-B27阳性人群中临床最终确诊AS者的情况 406例HLA-B27阳性者中疑诊AS组313例临床最终确诊AS者288例，确诊率为92.1%，症状不典型组89例，最终确诊AS者70例，确诊率为92.1%，健康体检组4例，无1例确诊AS者，确诊率为0.0%，HLA-B27阳性在三个组中的确诊率差异明显有统计学意义（ρ0.005），见表2。

2.3 744例HLA-B27阴性人群中临床最终确诊AS者的情况 744例HLA-B27阴性者中临床最终确诊12例，其中疑诊AS组8例，症状不典型组4例，健康体检组0例，其确诊率在三个组中差异无统计学意义（ρ0.05），见表3。

2.4 HLA-B27抗原表达情况在AS确诊中的价值 HLA-B27阳性对AS确诊的灵敏度为96.8%，特异度为93.5%，阳性预测值89.0%，阴性预测值98.1%，见表4。结果表明，HLA-B27阳性与AS高度相关，是AS的重要辅助诊断依据。

3 讨 论

在我国AS发病率为0.3%-0.4%[2]，是一种严重危害人体健康的慢性、进行性炎性疾病，在发病早期，由于症状与骶髂关节其他症状如腰肌劳损等临床表现相似，容易造成误诊、漏诊。在疾病晚期将出现全身性关节病变，同时伴随有心脏病变、眼部病变、耳部病变、肺部病变及神经系统病变等多种并发症，且致残率极高，严重威胁到患者的身心健康。该病诊断标准主要依照1984年纽约修订的诊断标准为主，即要求患者存在X线≥2级骶髂关节炎，同时要求腰椎、胸椎活动受限等症状。这就导致存在患者患病4-10年之后才能被确诊，而此时已经造成了患者部分关节不可逆转性损害，错失了最佳治疗时机，早期诊断对其良好预后起到关键的作用[3]，建立特异性实验室辅助诊断标准显得尤为重要。

目前，文献报道[4-8]检测HLA-B27对于早期诊断AS具有重要价值，AS患者HLA-B27阳性率>90%，HLA-B27阳性的人群中约有20%-30%的人患有AS，而HLA-B27阴性者99.9%不会患AS，如症状和体征提示AS，B27阳性会显著增加正确诊断的机会，B27阴性则排除AS诊断的。强直性脊柱炎是一种具有较强的家族遗传倾向，LA-B27阳性的AS患者的HLA-B27阳性亲属的发病率高达25%-50%，如果对HLA-B27阳性患者的一级亲属进行B27检测，对AS早期诊断及早期干预治疗均有重要价值。我们的分析显示：在370确诊AS患者中HLA-B27阳性358例（阳性率96.8%），在406例HLAB27阳性患者中临床最终确诊AS者358例（占HLA-B27阳性率96.7%），744例HLA-B27阴性者中临床最终确诊AS者12例（占HLA-B27阴性率1.6%），非AS者732例（占HLA-B27阴性率98.4%），健康体检中4例HLA-B27阳性（占健康人群的0.4%），均为同一亲缘关系的家庭成人，且临床均无明显症状。我们的结果表明：除HLAB27阳性者中确诊AS者比例高于文献报道外，其余与文献报道相近，这可能与我们检测的标本多为临床有症状者，尤其部分是临床高度疑诊AS者有关。因此，在传统诊断的基础上加上HLA-B27的检测，可以提早诊断AS，为患者的治疗和预防赢得时间[9]，是AS重要的辅助诊断及鉴别诊断依据。

目前检测HLA-B27的主要方法有补体依赖性微量淋巴细胞毒试验（CDC法）、玫瑰花法、ELISA发、流式细胞术（FCM法）、PCR法等，与微量细胞毒法和PCR检测方法比较，流式细胞仪检测HLA-B27的表达无须分离淋巴细胞，且操作简单，其检测灵敏度可达100%，特异性为97.4%，不同仪器型号及实验室之间的检测重复性高[8-9]，易于标准化和质量控制，更有利于临床推广应用。由于HLA-B27、B7抗原均属于交叉反应的B7群，B27单抗在识别B27抗原时可与B7抗原发生交叉反应，因此FCM法必须排除B7对B27的干扰。我院使用美国Beckman/Coulter公司生产的HLA-B27-FITC/HLA-B7-PE检测试剂盒，其阳性结果判断标准为：HLA-B27阳性且HLA-B7阴性（即HLA-B27+/HLA-B7-）的细胞达90.0%以上，同时HLA-B27的平均荧光强度（X-Mean）达到8.0以上，从而有效的排除了B7对B27的干扰。本文的结果显示：用流式细胞仪检测HLA-B27，其结果准确可靠，在AS的辅助诊断中具有重要价值，其灵敏度为96.8%，特异性为93.5%，阳性预测值89.0%，阴性预测值98.1%，其中灵敏度、特异性及阴性预测值与文献报道相近，而阳性预测值高于文献报道，原因可能是：

3.1 我们检测的人群多数是有症状的患者，尤其部分是临床高度疑诊AS者，他们本身就是HLA-B27高表达的人群。

3.2 我们判定阳性的标准较高，在实验中我们发现，有部分人的HLA-B27表达超过50%，甚至超过80%，但是根据标准，我们仍然是判定为阴性，这部分人很可能是发展为AS的潜在人群，建议临床随访。

总之，HLA-B27检测可辅助AS诊断，对疑为AS患者进行淋巴细胞表面HLA―B27抗原的检测有助于提高早期诊断AS的可能性，为此类患者的诊断和鉴别诊断提供线索，可弥补X线不能早期诊断AS的不足[10]。HLA-B27检测还可预测幼年特发性关节炎患儿的转归，如患者阳A-B27阳性，则发展为AS的可能性大。同时HLA-B27抗原检测对AS的预防亦具有一定意义，HLA-B27阳性患者的一级亲属可检测B27，对As进行早期诊断，及早进行干预治疗[7]。

参考文献

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