流式细胞术在临床检验中的应用分析

摘要 目的：通过了解和讨论，对流式细胞术在临床检验中的应用情况做出详细分析。方法：通过多次严谨性实验并且真实详细记录每次实验数据，进一步分析流式细胞术在临床检验中的应用效果和可行性。结果：经过实验数据分析，流式细胞术在检验HLA-B27抗原、淋巴细胞亚群、肿瘤标志物、白血病免疫、临床微生物等应用中有着明显的效果。结论：流式细胞术在临床检验中可以得到很好的应用。

关键词 流式细胞术；流式细胞仪；临床检验；应用

流式细胞术是一种生物学技术，用流式细胞仪（FACS）对悬浮于流体中的微小颗粒进行计数和分选。这种技术可以用来对流过光学或电子检测器的一个个细胞进行连续的多种参数分析。流式细胞术（FCM）是对悬液中的单细胞或其他生物粒子，通过检测标记的荧光信号，实现高速、逐一的细胞定量分析和分选的技术。

FCM不但快速、灵敏而且还可以同时对多个参数进行分析，FCM在临床微生物检测中的作用受到越来越多人的关注。FCM不但可以用来检测受染细胞内的病毒抗原，而且还可以对受染细胞表面的病毒抗原进行检测。由于FCM检测的一般只是单个细胞，因此经过FCM检测的受染细胞只适用于支气管灌洗液、血液、尿标本以及一些经酶消化过的组织细胞，同时由于FCM进行的是多参数分析。所以FCM体外抗生素药敏试验的主要机制是，通过FCM检测病原体和染料结合在一起后所发出的不同强度的荧光。从而间接地反映出病原体的功能状态以及活性，以达到帮助判断病原体对抗生素的反应性目的，其中用于研究抗菌效应的荧光染料主要有2大类：其中用来标记DNA和RNA的染料主要包括如溴化乙锭、碘化丙啶等；其次是用来反映代谢活性或结合蛋白的探针，其中包括异硫氰酸荧光素、膜电位敏感性染料等。怎样选择这些物质，与这种染料本身的发射特性有关，同时抗生素的作用机制也可能关系到这些物质的选择。近年来FCM在细菌的药敏效应的研究领域已获成功，将这些荧光染料和FCM联合运用到一起，可以判断其细菌活力与功能状态，这种方法由于有速度快等优势，临床实验室的常规药敏试验中也应用到这种方法。

方法

本实验用到的细胞定量分析和分选技术，这个技术要用的实验细胞包括MCF7、293（T）、U20S等。以U20S细胞为例，他们通常所用的操作方法：首先对细胞进行培养以及铺板，转染、细胞分板、上机样本制备、加药刺激、细胞收获及处理、相关试剂配制等步骤。其中在细胞培养时，以U20S细胞作为细胞株和材料，在这个过程我们要注意的是一瓶细胞总数一般情况下会达到1×107个。在铺板的过程首先要对细胞进行分化，然后才对细胞进行计数，计数时如果发现细胞密度很大，影响计数，就必须对细胞进行合适倍数的稀释后才计数。最后才能进行铺板。铺板的过程是：首先在6cm培养皿按照每孔6×105个的数量加入细胞，然后将6cm培养皿沿水平面方向前后左右来回晃动，使细胞能够均匀分布，晃动时要小心以防止培养液泼出，再将细胞放置培养箱里生长。将这些过程都完成后，然后可以用转染色剂Lipofectamin2000进行转染操作，其操作过程：首先在DEF-FN载体上构建目的基因质粒，当细胞密度为达到50%～60%时，再进行转染操作，转染12～16h后，再根据细胞密度按1：3进行分板，使分板后细胞密度30%左右。除了以转染质粒作为阳性对照外，我们还可以以药物处理细胞作为阳性对照。将细胞铺板24h后，再加药对其进行刺激，加药培养24h后，然后就可以对细胞进行收获处理了。注意在这个过程中要分别对培养液进行收集，在每个6cm规格的板中加入1mL胰酶进行消化。待消化完毕后，再向内一一对应地加入已收集的培养液来中和胰酶。上述过程进行完之后，最少要放置4h，才能从将细胞样本从冰箱里取出进行离心操作来收集细胞。将1×PBS清洗2遍后，再加入100μL 1×PBS将两者混匀，加入10μL PI（终浓度100μg/mL），10μLRnase（终浓度50μg/mL），置于37℃水浴锅，避光处理30min。这样才算完成上机样本制备。在处理分选细胞样本前，要对细胞进行贴壁培养，每个细胞样本至少需要1个10cm规格的细胞板，去除培养液酶消化，在37℃条件下充分消化至细胞轻拍脱壁，再加入5mL培养液进行中和，以充分分散细胞，取100μL细胞上机，测定转染效率，剩余细胞计数、离心，根据转染效率，分选模式，调节细胞浓度，达到上样速率1000～3000个/s。

结果

经过实验分析得出结果，将其用于病毒检测具有以下优点及可行性：可在单个细胞中同时获得多个分析参数；能定量检出受染细胞，当用不同荧光染料标记不同的病毒抗原特异性抗体或将特异性病毒抗体与不同大小的乳胶颗粒相联时，FCM可同时检测到同一样本中的多种病毒或病毒抗原，这种方法也可用于真菌、寄生虫、病毒以及这些病原体混合感染的检测。

讨论

随着科学技术的发展，流式细胞技术也取得了快速的发展，其临床应用越来越广泛，在临床工作中发挥着重要的作用。流式细胞术已普遍应用于免疫学、细胞生物学、生物化学等临床医学和基础医学研究领域。随着对FCM研究的日益深入，其价值已经从科学研究走人了临床应用阶段，在我国临床医学领域里已有着广泛的应用。可见流式细胞术在临床检验的应用具有很好的发展前景和可靠性。