穿心莲质量标准研究

摘要：目的 对穿心莲药材的有效成分进行定性定量鉴别，对水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物及重金属含量进行定量测定，进一步完善穿心莲药材的质量标准。方法 采用薄层色谱法对穿心莲中的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯进行定性鉴别，高效液相色谱法进行定量测定，常规检查项目按2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅸ A杂质检查法、Ⅸ H水分测定法中的烘干法、附录Ⅸ K灰分测定法、附录Ⅹ A浸出物测定法及Ⅸ E重金属检查法测定。结果 10批穿心莲样品中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯及醇溶性浸出物含量均符合我国药典规定的标准。结论 所建立的方法简便、准确，能作为质量标准以控制穿心莲药材的质量。

关键词：穿心莲；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.09.022

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）09-0063-03

Study on Quality Standard of Andrographis Herba LIANG Li-juan1， ZHAO Kui-jun1， DONG Ting-xia2， Karl Wah-keung TSIM2 （1.Beijing Friendship Hospital Affiliated to Capital Medical University， Beijing 100050， China；2.Center for Chinese Medicine R & D， Hong Kong University of Science and Technology， Hong Kong， China）

Abstract：Objective To improve the quality standard of Andrographis Herba through determination of effective components， moisture， total ashes， acid insoluble ashes， extracts and heavy metals. Methods TLC and HPLC were used for qualitative and quantitative identification of andrographolide and dehydroandrograpolide in Andrographis Herba. Routine examinations were based on the procedures recorded in the Appendix Ⅸ A， Ⅸ H， Ⅸ K， ⅩA and Ⅸ E of Chinese Pharmacopoeia （2010）， for foreign matter， moisture， ashes， extracts determination and heavy metal test respectively. Results Total content of andrographolide and dehydroandrographolide， extractives （70% ethanol） all complied with Chinese pharmacopoeia. Conclusion The established method was simple， accurate and can be used as the quality standard for the quality control of Andrographis Herba.

Key words：Andrographis Herba；TLC；HPLC；quality standard

穿心莲为爵床科植物穿心莲Andrographis paniculata （Burm.f.） Nees的干燥地上部分[1]，具有清热解毒、凉血、消肿等功效。二萜内酯类成分穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯是穿心莲药材的主要有效成分，多被用来作为质量控制的指标成分。由于产地不同，上述成分含量差异较大。为确保临床用药安全性、有效性，并全面控制穿心莲药材的质量，本研究对不同产地的穿心莲药材中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯进行定性检测，并测定药材中水分、灰分、浸出物和重金属元素的含量，以期为穿心莲药材质量控制的再提高与临床合理用药提供依据。

1 仪器与试药

美国Waters高效液相色谱仪（Waters 600 Controller、Waters 717自动进样器、在线脱气机、Waters Empower色谱工作站），R200D型电子分析天平（德国，Sartoriius公司），SB5200型超声波清洗机（上海，Branson公司），R210型旋转蒸发仪（瑞士，Buchi公司），GoodLook-1000型全自动薄层色谱成像系统（上海科哲生化科技有限公司），硅胶GF254预制板（Merck 1.05554.000），马弗炉（SRJX，上海金沪电热仪器联营厂），PMC-130S型水浴锅（Pensonic Company），1410型烘箱（VWR Scientific Company）。

水由Milli-Q系统制得，其他试剂均为分析纯。穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品（纯度>98%），购自中国食品药品检定研究院，批号分别为110797-200307、110854-200306。

共收集了10批穿心莲药材，来源见表1。经笔者鉴定为爵床科植物穿心莲Andrographis paniculata （Burm.f.）Nees的干燥地上部分。标本保存于香港科技大学中药研发中心。

表1 10批穿心莲样品来源

样品号 来源

CXLC 001 黄泽记（香港商品药材）

CXLC 002 永春行（香港商品药材）

CXLC 003 新生药业有限公司（香港商品药材）

CXLC 004 永利（香港商品药材）

CXLS 001 广东饶平

CXLS 002 广西桂林

CXLS 003 广西横县

CXLS 004 广西横县

CXLS 005 广西平南

CXLS 006 广西贵港

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别

取穿心莲粉末约1.0 g，精密称定，加乙醇30 mL，超声处理（240 W，60 kHz）20 min，提取物在2000×g下离心10 min，上清液蒸干，残渣加乙醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。取穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品适量，分别加乙醇制成每1 mL含1.0 mg穿心莲内酯和每1 mL含0.5 mg 脱水穿心莲内酯的溶液，作为对照品溶液。以甲醇作为空白对照，照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅵ B]试验，吸取空白对照溶液3 ?L、穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品溶液5 ?L和6 ?L、样品溶液4 ?L点于同一硅胶60 GF254预制板上，以石油醚-乙酸乙酯-乙醇（4∶2∶1，V/V）为展开剂，上行展开，展距7.5 cm，晾干，置紫外灯（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2.2 穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量测定

2.2.1 色谱条件 Alltima C18色谱柱（4.6 mm× 250 mm，5 ?m）；流动相A为乙腈，流动相B为水；梯度洗脱梯度条件：0～5 min， 22%A25%A；5～30 min，25%A30%A；30～60 min，30%A45%A。检测波长：215 nm；流速：1 mL/min；进样量：10 ?L。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品粉末0.2 g，加20 mL甲醇，超声提取（240 W，60 kHz）2次，每次30 min，滤过，提取物在2000×g下离心10 min，上清液蒸干，残渣加2 mL甲醇溶解，作为供试品溶液。

2.2.3 对照品溶液的制备 分别精密称取穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品各5.0 mg，分别置5 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为1.0 mg/mL穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的对照品储备液。

2.2.4 线性关系试验 精密吸取“2.2.3”项下对照品储备液，分别用甲醇稀释成6个不同浓度的穿心莲内酯（20、40、60、100、150、200 mg/L）和脱水穿心莲内酯（10、20、30、50、75、150 mg/L）对照品溶液，分别进样10 ?L，依上述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，相应浓度为横坐标（?g/mL），绘制标准曲线，得到回归方程。穿心莲内酯：Y=17 224X+15 985，r2=0.9999，线性范围为0.2～2 ?g；脱水穿心莲内酯：Y=13 581X+3522.2，r=0.999 9，线性范围为0.01～0.15 ?g。

2.2.5 精密度试验 取对照品溶液，连续进样6次，测得穿心莲内酯峰面积RSD=1.46%，脱水穿心莲内酯峰面积RSD=0.944%，表明精密度良好。

2.2.6 方法检出限及定量限 称取益母草约0.2 g，精密称定，作为空白基质，加入穿心莲内酯对照品25.0 ?g、脱水穿心莲内酯20.0 ?g用于测定方法检出限。连续进样7次，测得穿心莲内酯峰面积的SD=0.0697，方法检出限（LOD=3.14 SD[2]）为0.219 mg/L。脱水穿心莲内酯峰面积的SD=0.069 8，方法检出限为0.219 mg/L。

称取益母草约0.2 g，精密称定，作为空白基质，分别加入穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品55.0 ?g用于测定定量限，连续进样5次，测得穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的定量限分别为275、275 mg/kg。

2.2.7 重复性试验 精密称取穿心莲CXLC 001样品6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，其RSD分别为2.24%和1.57%，表明方法的重复性良好。

2.2.8 加样回收率试验 取穿心莲CXLC 001样品6份，精密称定，加入穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品。按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，计算回收率，结果穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯平均回收率分别为98.0%、97.7%。见表2。

表2 穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯加样回收率试验结果

成分 取样量

（g） 样品中含

量（mg/kg） 加入量

（mg/kg） 测得量

（mg/kg） 回收率

（%） 平均回

收率（%） RSD

（%）

穿心莲 0.199 8 15 811.1 1700 183 261.1 98.5

内酯 0.201 6 15 955.9 1700 183 235.9 98.4

0.199 1 5 871.7 1700 175 361.7 99.7 98.0 1.34

0.200 9 5 903.4 1700 171 823.4 97.6

0.201 0 10 045.3 1700 173 415.3 96.1

脱水穿心 0.199 8 5 635.8 650 69 595.84 98.4

莲内酯 0.201 6 5 609.3 650 70 089.26 99.2

0.199 1 3 954.0 650 68 238.97 98.9 97.7 1.77

0.200 9 2 998.0 650 65 852.98 96.7

0.201 0 3 947.8 650 65 762.76 95.1

2.2.9 样品测定 分别精密量取对照品溶液和供试品溶液10 ?L，进样测定峰面积，分别计算10批穿心莲中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。结果见表3。

表3 10批样品中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量测定（%）

样品号 穿心莲内酯 脱水穿心莲内酯 总含量

CXLC 001 1.8 0.6 2.4

CXLC 002 0.7 0.4 1.1

CXLC 003 0.7 0.5 1.2

CXLC 004 0.9 0.5 1.4

CXLS 001 1.1 0.3 1.4

CXLS 002 1.0 0.1 1.1

CXLS 003 0.7 0.5 1.2

CXLS 004 1.8 1.8 3.6

CXLS 005 3.8 0.7 4.5

CXLS 006 1.0 0.4 1.4

2.3 常规项目含量测定

水分测定按2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅸ H水分测定法中的烘干法，灰分测定按2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅸ K灰分测定法，浸出物测定按2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅹ A测定法分别采用热浸法及冷浸法对10批穿心莲药材进行测定，结果来自市场及不同产地的药材成分含量差异较大，穿心莲中叶草比为27.6%～73.3%，杂质为0.3%～0.6%，水分为8.0%～11.3%，总灰分为7.1%～14.0%，酸不溶性灰分为0.3%～0.8%，浸出物冷浸和热浸分别为15.4%～24.8%、16.9%～27.27%，70%乙醇冷浸和热浸分别为15.4%～27.2%、14.0%～25.2%。见表4。

2.4 重金属含量测定

10批穿心莲药材中重金属含量按2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录Ⅸ E重金属检查法测定，结果见表5。

表4 穿心莲药材中杂质、水分、灰分和浸出物含量测定结果（%）

样品号 叶草比 杂质 水分 总灰分 酸不溶性灰分 浸出物含量

冷浸 热浸 70%乙醇冷浸 70%乙醇热浸

CXLC 001 37.9 0.5 9.0 12.1 0.4 15.4 16.9 15.4 14.0

CXLC 002 34.6 0.4 11.3 7.1 0.3 16.2 18.3 16.3 14.5

CXLC 003 27.6 0.6 10.8 10.2 0.3 19.1 21.4 18.3 16.3

CXLC 004 48.9 0.3 8.0 14.0 0.8 18.0 19.6 19.1 17.6

CXLS 001 39.4 0.3 8.8 10.2 0.4 24.8 27.2 27.7 25.2

CXLS 002 66.7 0.4 9.2 10.6 0.4 20.6 22.7 21.9 19.9

CXLS 003 38.3 0.3 8.3 10.9 0.8 21.5 23.5 23.5 21.5

CXLS 004 40.7 0.3 9.0 11.4 0.6 16.2 18.2 25.6 23.3

CXLS 005 73.3 0.4 9.3 10.4 0.5 19.6 21.6 25.7 23.3

CXLS 006 39.7 0.3 9.0 9.5 0.4 21.8 24.0 22.6 20.5

平均值 44.7 0.4 9.3 10.6 0.5 19.3 21.3 21.6 19.6

最大值 27.6 0.3 8.0 7.1 0.3 15.4 16.9 15.4 14.0

最小值 73.3 0.6 11.3 14.0 0.8 24.8 27.2 27.7 25.2

表5 10批样品中重金属含量测定（mg/kg）

样品号 砷 镉 汞 铅

CXLC 001 0.20 0.23 0.06 5.87

CXLC 002 1.00 0.92 - 4.59

CXLC 003 0.30 0.28 - 2.64

CXLC 004 0.33 0.20 - 3.34

CXLS 001 0.41 0.12 - 1.33

CXLS 002 - 0.20 - 1.01

CXLS 003 0.18 0.22 - 5.09

CXLS 004 0.20 0.28 - 4.90

CXLS 005 0.58 0.58 - 3.87

CXLS 006 0.25 0.19 - 3.51

最大值 1.00 0.12 0.06 1.01

最小值 0.18 0.92 0.06 5.87

注：“-”表示未检出

3 讨论

本试验分别考察了甲醇-水（52∶48、30∶70）、乙腈-水（35∶65）等多个流动相在适当配比时的分离条件，其中以乙腈-水溶液梯度洗脱时分离效果最好。本试验分别考察了以甲醇、70%甲醇、40%甲醇、乙醇、70%乙醇、40%乙醇为提取溶剂超声提取时穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量，以甲醇为提取溶剂时两者含量最高。考察了以甲醇作为提取溶剂，用超声提取、回流提取及索氏提取对样品穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的影响，结果以超声提取2次、每次30 min为最佳提取条件。

穿心莲薄层色谱的分离与鉴定结果显示，香港市售穿心莲药材与收集自不同产地的穿心莲药材和穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品一致。高效液相色谱测定结果显示，10批药材穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯总量为11 091.8～44 698.8 mg/kg不等，均大于我国药典规定的0.8%。常规检查结果显示，10批药材中只有CXLC 003样品叶含量低于30%，其他均符合我国药典规定的标准，叶的最高比例达73.3%。热浸法测醇溶物的含量均高于我国药典规定的标准。重金属检查结果显示，购自永春行的CXLC 002样品砷和镉的含量均较高，采自广西平南的CXLS 005样品镉含量较高，购自香港黄泽记CXLC 001商品药材及采自广西横县的CXLS 003样品铅的含量较高。我国药典未对重金属含量进行限定，故建议砷、镉、汞、铅含量应分别低于0.5、0.5、0.1、5.0 mg/kg。本研究结果表明，商品药材及采自不同产地的药材中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量及常规检查结果均有所不同，质量差异较大。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：251.

[2] Revised Assessment of Detection and Quantitation Approaches[M]. USEPA，2004：2.

（收稿日期：2013-03-07，编辑：陈静）