HPLC法测定板蓝根中腺苷的含量

摘 要： 本文采用HPLC测定板蓝根提取物腺苷含量，以提高板蓝根的质量标准，方法为将板蓝根醇提液挥去乙醇，经氯仿萃取，然后用HPLC测定，得出色谱柱：Diamonsil C18，250mm×4.6mm，5μm，流动相：甲醇-水（10∶90），流速：1.0mL/min，检测波长：260nm，柱温：45℃。结果表明腺苷含量在0.188～0.940μg范围内，r=0.9998，平均回收率为96.45%，RSD为3.05%（n=5），线性关系良好。可见本方法简单灵敏，准确可靠，重现性好，可完善现行的质量标准，为提高板蓝根的质量控制方法提供实验数据，对于保证其质量和临床疗效具有重要意义。

关键词： 板蓝根 腺苷 高效液相色谱法 质量标准

板蓝根为常用中药，始载于《神农本草经》，在《中国药典》中收载始于1985年版，2005年版规定板蓝根为十字花科菘蓝属植物菘蓝Isatis indigotica Fort.的干燥根[1]，性寒味苦，有清热解毒、凉血消肿的功效，用于温毒发斑、舌绛紫暗、丹毒、痈肿等，临床应用极其广泛。而1985年版《中国药典》到现行版，均无专属性指标成分作为板蓝根的质量标准。腺苷是板蓝根所含的一种天然成分，具有抗凝血、扩张冠状动脉、松弛支气管平滑肌、镇静中枢神经和抗心律不齐的作用[2]。本文以腺苷作为指标成分，选取定量分析方法，对完善现行质量标准提供实验数据，对保证板蓝根中药质量有重要意义。

1.仪器与试剂

1.1仪器。SPD-LC10A型高效液相色谱仪（日本岛津）；BP210S 电子天平（德国Sartorius 公司）；SPD―10A型紫外检测器（日本岛津）；N2000（浙大智达）数据处理系统。

1.2材料及试剂。板蓝根（陕西省老百姓大药房，产自甘肃，经鉴定均为正品板蓝根）；腺苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号896-200909，质量分数>98%），色谱纯甲醇，水为重蒸水，其他试剂为分析纯和色谱纯（国药集团化学试剂有限公司）。

2.方法与结果

2.2腺苷对照品溶液的配制。精密称取腺苷对照品3.2mg，置50 mL量瓶中，加10%甲醇适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.064mg/mL的腺苷对照品溶液。

2.3供试品溶液的配制。取板蓝根药材粉末1g（过3号筛），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入10%的甲醇20mL，超声提取（功率：200～250W，频率：60～100Hz）30min，冷却后过滤，滤液挥干，残渣用10%甲醇溶解并移入5mL的量瓶中用10%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液[3]。

2.4线性关系考察。精密称取腺苷对照品4.7mg，用流动相溶解并定容至50mL；精密吸取1，2，3，4，5 mL至10mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，20μm进样测定[4]。以峰面积（X）对进样量（Y）进行回归，得标准曲线回归方程：X=2531490.23Y-13966.25，相关系数：r=0.9998（n=5）。结果表明腺苷含量在0.188～0.940μg范围内，线性关系良好。

2.5精密度实验。腺苷对照品溶液20μl，重复进样5次，按上述实验方法项下的色谱条件测定，测得的峰面积如下：35.5775，35.5549，35.6545，35，4060，35.7038，RSD%=0.482%。

2.6重复性实验。同一试样精密称取5份，分别按供试品溶液制备方法制备，测定腺苷含量[5]。测得供试品溶液含量的平均值为0.3786mg/g，RSD为1.26%。

2.7加样回收率实验。分别称取已知含量的样品6份，各精密加入一定量的腺苷对照品，按供试品溶液制备方法制备，测定腺苷含量，计算回收率。结果见表1。

从表1可得平均回收率为96.45%，RSD为3.05%。

2.8样品含量测定。取甘肃产板蓝根3批，粉碎，按供试品溶液制备方法制备，20μl进样，测定腺苷含量[16]，结果见表2，色谱图见图1和2。

3.结果

通过以上实验方法可以看出，高效液相色谱法对腺苷含量测定0.188～0.940μg范围内，r=0.9998，平均回收率为96.45%，RSD为3.05%（n=5），线性关系良好。该方法简便、准确、可靠，可作为妇女痛经丸的质量控制方法。

4.讨论与结论

板蓝根经现代药理研究发现具有多方面作用。板蓝根及其制剂的质量控制目前多以靛蓝、靛玉红的含量测定（高效液相色谱法）为指标，但是板蓝根中靛蓝、靛玉红的含量仅为百万分之几（μg/g），且样品溶液的制备需用氯仿回流提取很长时间（回流提取一次8h或回流提取3次，每次2h），因而不利于板蓝根成品质量控制。2010年版《中国药典》板蓝根鉴别项下以精氨酸对照品作为TLC鉴别依据[7]，无定量测定方法。精氨酸虽然可作为指标建立定性方法，但并非板蓝根的特征性成分，缺乏专属性。腺苷为板蓝根的特征性成分，用高效液相色谱法便于测定其含量，操作简便、易行。专属性强，可与南板蓝根相区别，为活性成分，具有抗凝血、扩张冠状动脉、松弛支气管平滑肌、镇静中枢神经和抗心律不齐的作用，在板蓝根中含量较高（约0.2mg/g），且化学性质稳定，因此本研究选择腺苷作为指标成分建立板蓝根药材质量标准，为板蓝根新质量标准的制定提供依据。

参考文献：

[1]国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：化学工业出版社，2005：142-143，487-488.1985，2000，2005，2010.

[2]赵军.板蓝根的药理作用及其临床应用[J].时珍国医国药，2003，14（4）：241.743.

[3]许润春，杨明，苏艳桃.HPLC测定板蓝根中腺苷含量[J].中成药，2005，27（6）：742.

[4]张敏如，洪亮，郭群.高效液相色谱法测定发酵虫草菌粉和金水宝胶囊中腺苷的含量[J].中草药，1994，25（2）：77.

[5]姜涛，刘畅.车环宇板蓝根颗粒剂中靛玉红、腺苷含量测定方法学研究[J].黑龙江医药，2010，23（4）.

[6]张慧晔，罗杰，黄亦南，王德勤，邓乔华，李兰芳.HPLC法同时测定复方板蓝根颗粒中的尿苷腺苷和表告依春的含量[J].今日药学，2011，21（6）.

[7]国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：化学工业出版社，2005：142-143，487-488.1985，2000，2005，2010.