HPLC测定夏桑菊颗粒中迷迭香酸含量

时间:2022-07-13 07:38:20

【摘要】 目的:建立高效液相色谱(HPLC)法测定夏桑菊颗粒中迷迭香酸的含量测定方法。方法:采用HPLC法,色谱柱:Agi。lent ZORBAX SB C18(4。6ram×250mm,5μm),流动相:乙腈-0.1%磷酸(20:80),检测波长:330 nm;流速1.0ml/min;柱温:30℃。结果:迷迭香酸在0.068~1.357μg范围内线性关系良好(r=0.9999,n=6),平均加样回收率为99.15%,RSD为1.4%(n=9)。结论:该方法简便快捷,准确,重现性好,灵敏度高,可用于夏桑菊颗粒的质量控制。

【关键词】 夏桑菊颗粒;迷迭香酸;高效液相色谱法

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】A 【文章编号】1007-8517(2013)18-0015-02

夏桑菊颗粒收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十五册,由夏枯草、桑叶、等3味药材组成,具有清肝明目,疏风散热,除湿痹,解疮毒的功效,临床用于治疗风热感冒,目赤头痛,高血压,头晕耳鸣,咽喉肿痛,疔疮肿毒等症。方中夏枯草为君药,具有清肝泻火,明目,散结消肿的功效。该制剂标准中无含量测定项目,为了更好地控制产品质量,本实验选用处方中君药夏枯草中主要成分迷迭香酸作为指标性成分,参照《中国药典》2010年版一部夏枯草项下迷迭香酸的测定方法,建立高效液相色谱法测定本品中迷迭香酸的含量,为该制剂的质量控制提供依据。

1 仪器与试药

美国Agilent 1200高效液相色谱仪;KQ-300型超声波清洗器;迷迭香酸对照品(批号:111871-201102,购自中国食品药品检定研究院,);不同厂家不同批号的夏桑菊颗粒均购自南宁市各零售药店;乙腈、甲醇均为色谱纯,磷酸为色谱纯,水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱:Agilent ZORBAX SB C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸(20:80);检测波长:330 nm;流速:1.0mL/rnin;柱温:30℃;进样量:10μ1,在此条件下,迷迭香酸峰与邻峰基线分离。取除夏枯草外的其他几味药材同法制成阴性样品,再按供试品溶液的制备方法同法制成阴性样品溶液,阴性样品溶液无干扰(见图1)。

2.2 对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的迷迭香酸对照品10.18mg,置50ml棕色量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得0.2036mg/ml对照品储备液。精密量取对照品储备液5ml置15ml棕色量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液,避光保存。

2.3 供试品溶液的制备取夏桑菊颗粒适量,研细,取约2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加50%甲醇15ml,称定重量,超声处理30min(功率300w,频率40kHz),放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得。

2.4 线性关系考察精密吸取“2.2”项下对照品储备溶液0.5、1、2、4、6、8、10ml,分别置15ml棕色量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀。分取上述不同浓度对照品溶液10μl注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积的积分数值为纵坐标,进样量为横坐标,进行线性回归,回归方程:Y=2139X-37.8,r=O.9998(n=6),说明迷迭香酸进样量在0。068~1.357p,g范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验精密吸取对照品溶液10μl,连续进样6次,测定迷迭香酸的峰面积,其RSD为1.08%(n=6)。

2.6 稳定性试验取批号20120210的供试品溶液,按供试品测定方法分别在0、2、4、6、8、10、12、24h进样测定,结果8次进样迷迭香酸峰面积的RSD=1.27%,结果表明供试品溶液在24h内稳定。

2.7 重复性试验取广州G药业股份有限公司,批号20120210的夏桑菊颗粒,精密称取6份,制备供试品溶液,并依法测定迷迭香酸峰面积,计算其平均含量为0.53 mg/g,RSD为0.87%。

2.8 加样回收率试验 取同一批供试品(批号:20120210)9份,每份精密称取1g,分别精密加入一定量的迷迭香酸对照品,照“2.3”项下方法制得供试品溶液,进样测定,计算回收率。迷迭香酸平均回收率为99.15%,RSD=1.4%,结果见表1。

3 讨论

3.1 夏桑菊颗粒的质量标准中无含量测定项目,对夏桑菊颗粒质量标准的研究,分别有测定熊果酸、绿原酸、蒙花苷的含量,但对迷迭香酸的含量测定未见有报道。本实验采用高效液相色谱法测定迷迭香酸的含量,结果稳定、准确可靠,可为夏桑菊颗粒进一步制定质量标准提供参考依据。

3.2 迷迭香酸对照品溶液在自然光下稳定性较差,易产生分解,因此操作中应注意闭光,选择采用棕色量瓶。

3.3 按照《中国药典》2010年版一部的方法进行试验,发现流动相甲醇0.1%三氟乙酸溶液(42:58)并不适合夏桑菊颗粒。另考察了多个流动相系统,如甲醇-0.2%甲酸(40:60)、甲醇-0.1%磷酸(40:60)、乙腈-0.1%磷酸(20:80)等,最后选择乙腈-0.1%磷酸(20:80)作为流动相,出峰时间适当。同时还考察不同色谱柱,如phenomenex Gemini C18(4.6mm×250 mm,5μm)、AgilentZORBAX SB C18(4.6mm×250mm,5μm)、Diamonsil C18(4.6mm×250 mm,5μm)等,最后选择Agilent ZORBAXSB C18(4.6mm×250mm,5μm)作为色谱柱,结果迷迭香酸色谱峰的对称性和分离度均较好。

3.4 在实验过程中采用稀乙醇、甲醇、50%甲醇溶液和70%甲醇溶液同法处理样品,结果表明50%甲醇溶液提取迷迭香酸的含量最高。同时考察超声处理及回流提取法,结果表明,两种提取方法迷迭香酸的含量差异性不大,考虑到实验上操作方便,故采用超声法处理样品。

3.5 实验测定了不同厂家不同批号的夏桑菊颗粒中迷迭香酸的含量,实验结果表明,不同厂家生产的夏桑菊颗粒,迷迭香酸的含量相差较大,建议通过测定迷迭香酸的含量来控制夏桑菊颗粒的质量。

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(收稿日期:2013.06.28)

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