气相色谱法测定伊潘立酮起始原料中1,2―二氯乙烷

[摘 要] 目的：建立伊潘立酮起始原料中1，2-二氯乙烷残留溶剂的测定方法。方法：采用顶空进样毛细管气相色谱法。色谱柱：Agilent DB-624毛细管柱（30m×0.53mm×3.0?m）；程序升温；检测器：电子捕获检测器（ECD），温度：250℃；恒压：2.5psi；载气为高纯氮气。结果：1，2-二氯乙烷在0.55～2.00μg/mL浓度范围内线性关系良好（r=0.9999），平均回收率为101.1%；定量限为2.75ppm；检测限为0.75ppm。结论：建立的方法操作简便、灵敏度高，结果准确，可有效检测伊潘立酮起始原料中一类溶剂1，2-二氯乙烷的残留量。

[关键词] 伊潘立酮起始原料；1，2-二氯乙烷；顶空气相色谱法

中图分类号：O657 文献标识码：A 文章编号：2095-5200（2016）03-067-03

[Abstract] Objective： To establish the method for the determination of 1，2-dichloroethane in iloperidonestarting material. Methods： Headspace capillary gas chromatography. The determination was performed on Agilent DB-624 capillary column by temperature programming.The temperature of electron capture detector was set at 250℃，steady pressure was set at 2.5psiand high purity N2was used as carrier gas. Results： The good linear range of 1，2-dichloroethane organic solvent had been obtained at 0.55μg / ml ～ 2.00μg / ml concentration range（r=0.9999）with average recovery of 101.1%.The limit of quantification was2.75ppm. The limit of detection was0.75ppm. Conclusion： The established method is simple， sensitive， accurate，and it can be effectively used in the determination of 1，2-dichloroethanein iloperidonestarting material.

[Key words] Iloperidonestarting material；1，2-dichloroethane；headspace gas chromatography

伊潘立酮（Iloperidone）为口服非典型精神抑制药物，是5-羟色胺、多巴胺D2受体拮抗剂，能够明显减轻精神分裂患者阳性和阴性症状[1-3]且副作用少。伊潘立酮起始原料在合成过程中使用了卤代烃1，2-二氯乙烷（CH2ClCH2Cl）[4-8]，其属于一类有机溶剂，有剧毒，对人体健康危害较大，因此在制订质量标准时必须考察该起始原料中1，2-二氯乙烷残留问题。按照2010年版《中国药典》（二部）附录Ⅷ P残留溶剂测定方法[9]和人用药品注册技术要求国际协调会（ICH）[10]制定的相关要求，本文采用顶空气相色谱法对其进行测定，并对测定方法进行了验证，结果表明本文建立方法操作简便、灵敏度高，结果准确，从而为伊潘立酮质量标准制订提供依据。

1 仪器试剂

Agilent6890N，Agilent7890A气相色谱仪（美国Agilent 公司）；Agilent 7694E自动顶空进样器（美国Agilent 公司）；电子捕获检测器（ECD）；纯水氢气发生器（济南浩伟实验仪器有限公司）；HV-3静音无油空压机（济南浩伟实验仪器有限公司）。

伊潘立酮起始原料（天津药物研究院，自制，批号：080306，090107，含量>99.50%）；

1，2-二氯乙烷，分析纯（天津市化学试剂二厂，含量：>99.0%）；N，N-二甲基甲酰胺，分析纯（天津市康科德科技有限公司，含量：>99.0%）。

2 实验方法

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent DB-624毛细管柱（30m×0.53mm ×3.0?m）；升温程序：80℃保持20min，以100℃/min速率升温至200℃，保持5min；电子捕获检测器，检测器温度：250℃；载气：高纯N2，恒压：2.5psi；进样口温度：250℃，分流比：1∶1。采用顶空进样法测定，顶空平衡温度为120℃，平衡时间为15min，进样量：3mL。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品贮备溶液 精密称取1，2-二氯乙烷2.0mg置于盛有适量N，N-二甲基甲酰胺200mL容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液。

2.2.2 对照品溶液 精密量取上述对照品贮备溶液10mL，置于100mL容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺溶液稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

2.2.3 空白溶液 精密量取N，N-二甲基甲酰胺2mL置于顶空进样瓶中，加盖密封，作为空白溶液。

2.2.4 供试品溶液 精密称取伊潘立酮起始原料样品约400mg置于顶空进样瓶中，加入2mL的N，N-二甲基甲酰胺溶液，溶解密封，作为供试品溶液。

3 方法学验证

3.1 系统适用性试验

在2.1项色谱条件下，取对照品溶液（2.2.2）进样测定，记录色谱图，对照品溶剂色谱图见图1A。结果表明与相邻溶剂峰（6.155min）之间分离度大于1.5，符合分离要求。

3.2 空白干扰试验

在2.1项色谱条件下，取空白溶液进样测定，记录色谱图，空白溶剂色谱图见图1B。结果表明空白溶剂对样品测定无干扰，符合溶剂要求。

3.3 定量限试验

取2.2.1项下对照品溶液用N，N-二甲基甲酰胺逐步稀释成一系列低浓度溶液，分别取2mL，置于顶空进样瓶中，按2.1项下色谱条件进样，记录色谱图。将信噪比S/N约为10时相应溶液确定为定量限溶液，在该浓度水平下重复测定6次，6次所得色谱图溶剂峰面积RSD值小于10%，结果见表1。

3.4 检测限试验

取定量限浓度溶液用N，N-二甲基甲酰胺逐步稀释成一系列低浓度溶液，分别取2mL，置于顶空进样瓶中，按2.1项下色谱条件进样，记录色谱图。信噪比S/N约为3相应溶液确定为检测限溶液，结果见表1。

3.5 线性关系及范围

分别精密量取对照品贮备溶液（2.2.1）0.80mL、1.00mL、1.20mL、1.50mL、2.00mL，置于10mL量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀。另外取定量限溶液作为最低浓度溶液。各取上述溶液2mL，置于顶空进样瓶中，按2.1项下色谱条件分别进样。以1，2-二氯乙烷质量浓度（c）为横坐标、峰面积（A）为纵坐标绘制标准曲线，其线性关系见表2。

表2 1，2-二氯乙烷线性关系试验结果

残留溶剂 线性范围（μg/ml） 线性方程 相关系数（r）

1，2-二氯乙烷 0.55～2.00 A=100.28c-0.3308 0.9999

由表2可知，1，2-二氯乙烷在0.55～2.00μg/mL浓度范围内，与峰面积积分值呈良好线性关系，表明该方法线性关系良好。

3.6 精密度试验

3.6.1 重复性试验 精密量取对照品溶液2mL至10mL顶空进样瓶中，平行6份，密封。按2.1项下色谱条件，进样，记录色谱图，结果峰面积RSD为1.56%（n=6），表明方法重复性良好。

3.6.2 中间精密度试验 精密量取对照品溶液2mL至10mL顶空进样瓶中，平行6份，密封。第二天由另一操作人员在Agilent7890A气相色谱仪上进行试验，按2.1项下色谱条件进样，记录色谱图。结果峰面积RSD为1.13%（n=12），表明方法中间精密度良好。

3.7 回收率试验

精密量取对照品贮备溶液4mL、5mL、6mL分别至50mL容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺溶液稀释至刻度，分别得对照品溶液浓度80%、100%、120%溶液。精密称取样品约（批号：090107）400mg至10mL顶空进样瓶中，共11份，其中2份加入2mL N，N-二甲基甲酰胺溶液溶解密封，作为供试品溶液。其余9份加入以上三种浓度溶液各2mL，各平行3份，作为加样供试品溶液。以2.2项下对照品溶液作为对照，按2.1项下色谱条件，分别进样，计算回收率，1，2-二氯乙烷平均回收率为101.1%，回收率RSD为3.16%。可知1，2-二氯乙烷回收率符合要求，表明方法准确度良好。

3.8 稳定性试验

精密量取对照品溶液2mL至10mL顶空进样瓶中，在不同时间点，按2.1项下色谱条件进样，记录色谱图。结果在75h内峰面积RSD为1.75%，表明1，2-二氯乙烷在N，N-二甲基甲酰胺溶液中稳定。

3.9 耐用性试验

精密量取对照品溶液2mL至10mL顶空进样瓶中，平行18份，依据方法色谱条件，对压力（±0.1psi）、初始柱温（±2℃）、顶空平衡温度（±2℃）及平衡时间（±1min）进行微小改变，在初始色谱条件及各变动条件下分别进样，每个条件下各进样2份，记录色谱图。结果在压力各个条件下，峰面积RSD为4.19%；初始柱温各个条件下，峰面积RSD为3.40%；顶空平衡温度各个条件下，峰面积RSD为2.96%；顶空平衡时间各个条件下，峰面积RSD为4.02%。说明该方法耐用性良好。

3.10 样品测定

精密量取对照品溶液2mL于10mL顶空瓶中，平行2份。称取2批样品约400mg于10mL顶空瓶中，加入2mL N，N-二甲基甲酰胺溶液，溶解密封，各平行2份。按2.1项下色谱条件分别进样测定。结果见表3。

4 讨论

测定药物中残留溶剂对于控制药品质量、保证用药安全具有重要意义。用本文建立气相色谱法检测药品中残留溶剂，结果完全符合2010年版《中国药典》（二部）附录Ⅷ P中有机溶剂残留量测定要求[9]。

4.1 检测器选择

使用电子捕获检测器和氢火焰离子化检测器均可检测1，2-二氯乙烷。相比而言，电子捕获检测器对于含有卤素1，2-二氯乙烷响应值更高，便于对样品中微量溶剂准确测定。

4.2 溶剂选择

伊潘立酮起始原料在二甲基亚砜和N，N-二甲基甲酰胺中溶解性均较好，但是伊潘立酮起始原料与二甲基亚砜会发生反应，生成未知杂质峰，故不选用。在本色谱条件下N，N-二甲基甲酰胺出峰与1，2-二氯乙烷峰互不干扰，而且1，2-二氯乙烷在N，N-二甲基甲酰胺中能互相溶解。所以选择N，N-二甲基酰胺作溶剂。

4.3 顶空平衡条件选择

顶空平衡温度120℃和130℃相比，峰面积基本不再改变，因此选用顶空瓶加热（平衡）温度为120℃；并对顶空平衡时间进行筛选，结果发现平衡时间30min与15min相比，峰面积基本不再增加，表明溶液在15min时气-液两相已达到平衡。因此选择在平衡温度120℃条件下平衡15min。

4.4 柱温选择

分别选择柱温为80℃、100℃进行试验。结果显示在100℃时，1，2-二氯乙烷与空白溶液中4.9min杂质峰未分开，故选择80℃作为初始温度。

经过验证，建立方法定量限、检测限、精密度、线性及范围、回收率、稳定性、耐用性等试验结果均较好，能够准确地检测出伊潘立酮起始原料中残留1，2-二氯乙烷，对于保障药品质量及用药安全具有重要意义。

参 考 文 献

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