膜条酶联免疫法检测特异性IgE抗体的比对分析

【摘要】 目的 比较酶联免疫快速膜条法与荧光酶联免疫测定法（unicap法）对9种常见血清特异性IgE抗体检测结果的吻合度， 以及该膜条法按照仪器操作和手工操作结果的一致性比较， 从而验证膜条法作为半定量检测sIgE抗体的有效性。方法 收集来自临床科室标本80份， 用仪器和手工方法同时对10种物质进行sIgE检测， 分析两种不同操作方法所得结果；另外选取部分标本同时用膜条法仪器测定和unicap法对9种常见血清特异性IgE抗体进行检测分析。结果 两种实验方法定性结果符合率较理想， 对于大部分检测项目， 两种操作方法定性结果一致性高。结论 HOB膜条法操作简捷， 检测成本低， 是一种值得推广的定性检测血清变应原特异性IgE抗体的方法。

【关键词】 过敏原；特异性IgE； HOB膜条

过敏性疾病是一种常见病， 通常认为， IgE是导致I型过敏反应的主要抗体， 通过检测患者血清过敏原特异性IgE（sIgE）， 可明确患者的过敏原， 对于疾病的诊断、指导预防和治疗均具重要意义[1]。CAP变应原检测系统， 已在国内外广泛应用， 但其所需样本量大， 检测成本高， 局限了其作为初筛检测常规方法的推广[2]。本研究旨在探讨HOB膜条试验法与unicap法检测结果的一致性， 分析膜条法临床应用价值。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 研究对象为广州医科大学附属第一医院2013年1～5月就诊于变态反应科和儿科门诊有过敏性反应特征的患者80例， 临床症状主要包括哮喘、过敏性鼻炎、荨麻疹。其中男性38例， 女性42例， 年龄3～78岁， 平均23. 0岁。

1. 2 方法和原理 患者分别采集静脉血5 ml， 全部血液分离血清后， 移至 EP 管， -20℃保存待测。sIgE测定采用两种方法：一种是unicap荧光酶联免疫法；另一种是HOB膜条法， HOB膜条法采用酶联免疫法（ELISA）快速试纸条技术检测血清中的过敏原特异性IgE抗体。测试条的检测区域由多个反应区组成， 其中包括一个阴性对照区和一个阳性对照区。患者血液样本先与包被有多种过敏原的测试条进行孵育， 使得样本中的特异性IgE抗体与测试条上的相应过敏原结合。随后去除未结合的抗体， 加入酶标抗体， 孵育。随后的清洗步骤会去掉未结合的酶标抗体， 加入酶底物液进行反应， 产生可以直接观察的颜色变化， 得出定性结果。亦可以通过专用过敏原扫描分析软件， 得到半定量结果。本次实验用膜条自动操作仪及手工用试剂盒对同一样本进行检测10种过敏原， 分别为屋尘螨（D1）、猫毛（E1）、狗皮（E5）、花生（F13）、大豆（F14）、鸡蛋（F1）、牛奶（F2）、豚草（W1）、艾蒿（W6）和交链孢霉， 分别记录检测结果。以上所有检测实行全过程质量控制

1. 3 结果判定 根据sIgE浓度（IU/ml）将结果分为0～VI级， 其中“0”级为阴性， I～VI级为阳性。

1. 4 统计学方法 数据分析采用SPSS18.0软件分析， HOB膜条仪器测定结果与CAP法测定结果按照吻合度作分析， HOB膜条法仪器与手工法对比数据分析采用Kappa检验。

2 结果

2. 1 两种检测方法各项结果见表1。以unicap法作为参照， 评价膜条法和unicap法测定结果的吻合度。两种方法共检测 237项， 检测结果完全一致的为 203项， 即符合率为 85.6%。检测结果不一致的为 34 项， 比例为 14.4%。牛奶（F2）的吻合度不理想， 只有68.09%。

2. 2 HOB膜条仪器测定和手工测定结果对比见表2， 仪器测定整个程序由仪器完成， 操作简捷， 但由于仪器进样口和出样口都为单通道， 所以当仪器进行多样品检测时耗时比较长。手工法测定分别经历加样、孵育、加试剂、多次洗涤、显色等过程才能完成， 显得比较繁琐， 但实验耗时相对较短。结果显示， 大多数sIgE， 仪器与手工测定定性结果具有较高的一致性（Kappa系数>0.6）， 阳性符合率、阴性符合率、总符合率均>95%。

表1 unicap法与HOB膜条仪器测定结果对比

过敏原 标本数 CAP阴性 CAP阳性 结果吻合度

（%）

印迹阴性 印迹阳性 印迹阴性 印迹阳性

F2 47 30 4 11 2 68.09%

F13 11 9 0 0 2 100.00%

F1 31 29 0 2 0 93.55%

F14 12 11 0 0 1 100.00%

W6 16 11 0 4 1 75.00%

D1 67 13 0 8 46 88.06%

W1 9 8 0 0 1 100.00%

E1 22 19 0 2 1 90.91%

E5 22 17 0 3 2 86.36%

合计 237 147 4 30 56

注： 因unicap法没有包含交链孢霉抗原， 无法与膜条法进行对比

表2 HOB膜条仪器测定和手工测定结果对比（标本数：80）

D1 E1 E5 F13 F14 F1 F2 W1 W6 交链孢霉

- + - + - + - + - + - + - + - + - + - +

手工仪器 - 33 0 72 0 74 3 72 3 71 0 78 1 36 30 72 0 72 0 69 0

+ 0 47 0 8 0 3 4 1 1 8 1 0 7 7 1 8 0 8 1 10

阳性符合率（%） 100 100 100 25 88.89 100 50 88.89 100 90.91